国家科技支撑计划(2007BAD40B04)
- 作品数：21 被引量：124H指数：8
- 相关作者：贾万忠闫鸿斌付宝权才学鹏郭爱疆更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。
- 李永光李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠Radu Blaga付宝权
- 关键词：脑多头蚴克隆
- 四价鸡球虫苗的免疫效果研究被引量：10
- 2009年
- 在实验条件下观察自主研制的四价鸡球虫苗(LCV)对平养鸡的安全性和免疫保护效果。试验设空白对照组(NC)、攻虫对照组(PC)和免疫组(VC)3个试验组,每组30只鸡。试验结果:空白对照组、攻虫对照组和免疫组的相对增重率依次为100%、84.77%和94.97%;免疫后(免疫后攻虫前)排卵囊高峰期间(免疫后5d～10d),免疫组平均OPG(即每克粪便中的卵囊数)为2.70×104,攻虫后排卵囊高峰期间(攻虫后6d～13d)攻虫对照组组平均OPG为2.32×106,高于免疫组(2.69×105)(p<0.01);攻虫后各组死亡率依次为0、10%和0;3个组的ACI(抗球虫指数)分别为200.0、154.77和184.97,免疫组试验效果最佳。结果表明,LCV安全性高、免疫保护效果理想,接种该疫苗后的鸡对较大剂量攻虫具有较强的抵抗力。
- 闫鸿斌贾万忠田广孚李万坤孟庆玲郭爱疆才学鹏
- 关键词：球虫疫苗免疫
- 吸虫线粒体基因组及其应用研究进展被引量：1
- 2011年
- 吸虫病(Trematodiasis)如血吸虫病、肝片形吸虫病等是一类重要的人兽共患寄生虫病,在我国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对吸虫线粒体基因组全序列分析的研究进展、应用和今后的发展方向作一综述。目前,已完成包括复殖亚纲10个种和单殖亚纲4个种总计14种吸虫线粒体基因组全序列测定。吸虫线粒体基因组碱基组成、基因结构与排列、基因变异等分析结果为线粒体功能基因组学研究、比较基因组学研究、分子分类学研究、物种起源、分子系统发育与进化分析及其疾病诊断等提供了重要依据和指导作用。线粒体基因组序列分析有助于解决一些新近发现的种如三平并殖吸虫、中华血吸虫等独立种的分类地位;而怡乐村并殖吸虫和佐渡并殖吸虫是大平并殖吸虫的同物异名吸虫。日本片形吸虫与大片形吸虫的cox1基因序列完全一致,这些日本片形吸虫应为大片形吸虫;大片形吸虫不同株虽然在cox1基因序列上无差异,但nad1基因却有8.3%变异性,这表明大片形吸虫不同株中可能存在隐蔽种。总之,线粒体基因组序列可为吸虫虫种与虫株的分类学地位的确定提供重要依据。同时,人们可根据线粒体基因组序列,通过PCR方法有效地对临床上易混淆的吸虫的种、株或群等作出确切的鉴别与诊断,从而为吸虫病流行病学调查和防治工作等提供重要参考依据。
- 贾万忠闫鸿斌史万贵郭爱疆詹芳
- 关键词：吸虫线粒体基因组分子分类基因重排进化树
- 蠕虫线粒体基因组研究及其应用进展被引量：8
- 2011年
- 蠕虫主要包括扁形动物和线虫,其种类繁多,生活方式多样,可寄生于动物和植物体内,引起蠕虫病,其中血吸虫病、棘球蚴病、旋毛虫病等是重要的人兽共患寄生虫病,在世界各地普遍流行,危害严重.蠕虫线粒体基因组的碱基组成、基因结构、基因变异等方面有其特点,这为蠕虫线粒体功能基因组学研究、比较基因组学研究、分子分类学研究、虫种(株)鉴定与分类、生态学研究、分子系统发育和进化分析等提供了重要依据,为蠕虫病的诊断、分子流行病学与生态学调查等分子检测方法的建立奠定了基础.近20年来蠕虫线粒体基因组研究得到了极大发展,迄今为止,已完成蠕虫93个种(虫株)线粒体基因组全序列测定和分析.本文将对蠕虫线粒体基因组序列分析方面的研究进展、应用和今后发展方向作一简要评述.
- 贾万忠闫鸿斌倪兴维娄忠子李宏民曹平才学鹏
- 关键词：蠕虫线粒体基因组进化分子分类DNA条形码
- 带科绦虫线粒体基因组全序列研究进展被引量：11
- 2010年
- 贾万忠闫鸿斌郭爱疆史万贵詹芳付宝权
- 关键词：基因组全序列INFECTIONS人兽共患寄生虫病棘球蚴病囊尾蚴病
- 带属绦虫线粒体基因组全序列生物信息学分析被引量：14
- 2010年
- 通过利用生物生物信息学方法分析带属绦虫线粒体DNA（mtDNA）碱基组成、基因结构、密码子利用、基因变异及其在分子系统进化研究中的应用价值等,以期为带属虫种线粒体功能基因组学研究、分子分类学研究及其疾病诊断提供重要依据。从NCBI GenBank中下载已测序的6种带属绦虫线粒体基因组（mt genome）全序列,以细粒棘球绦虫mtDNA序列作为参考序列（外群）,用ClustalX软件（1.83）（http：//www2.ebi.ac.uk/clustal w/）进行多重序列比对,用DNAStar软件进行序列差异性分析,用MEGA4软件的邻接法（Neighbor-joining method）构建进化树,核苷酸进化距离算法用最大似然法（Maxi mumlikelihood method）,氨基酸进化距离算法用泊松校正法（Poissoncorrection method）,进化树检验用自展法（Bootstrap test）。tRNA和2个非编码区RNA二级结构预测分别使用软件ARWEN和RNAstructure Version 4.6。结果显示,带属绦虫mtDNA为双链闭环分子,为13.3~13.7 kb;4种碱基成分中,T含量最高（超过47%）,C含量最低（低于9%）;共有36个按照相同顺序排列的编码基因,其中蛋白质编码基因有12个,tRNA编码基因有22个（其中编码丝氨酸-tRNA和亮氨酸-tRNA的基因有2个,其余18种tRNA分子各有1个）,rRNA编码基因有2个（包括1个大亚基和1个小亚基）。基因组结构紧凑,基因间存在重叠区域,如nad4L和nad4基因;除广泛使用ATG作为起始密码子编码蛋氨酸,部分基因如多头绦虫nad6基因用GTG作为蛋白质翻译的起始密码子。线粒体tRNA长度为58~76 nt,二级结构多数呈典型的三叶草结构,少数呈D-loop结构;2个线粒体rRNA亚基基因rrnL和rrnS被trnC基因分隔开;线粒体基因组有2个大的非编码区,1个长非编码区（LNR）和1个短非编码区（SNR）;线粒体基因组中蛋白编码基因之间的差异为5.7%~28.9%,其中cox1和nad4L基因比较保守,而nad5和nad6则变异较大,进化较快。结果表明,根据线
- 贾万忠闫鸿斌史万贵王玉朝郭爱疆詹芳付宝权才学鹏
- 关键词：线粒体基因组生物信息学分析进化树分子分类
- 细粒棘球绦虫TPx基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2008年
- 从自然感染病羊肝内收集细粒棘球绦虫(Eg)原头蚴,分别提取总RNA和基因组DNA。根据GenBank数据库中的细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因序列设计1对引物,以总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出EgTPx基因片段,同时以基因组DNA为模板扩增出对应的基因组序列。PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析。结果表明,成功扩增到中国青海株细粒棘球绦虫EgTPx基因片段,其开放阅读框为582 bp,编码193个氨基酸,与已知的EgTPx基因核苷酸序列及其编码蛋白氨基酸序列的同源性均为99%,有3个碱基发生变异,分别在245,306,318位由C变为T;引起1个氨基酸变异,由Ala82变为Val82。EgTPx具有典型的2-Cys型过氧化物氧还蛋白催化性位点Cys48和Cys169,以及周围保守的FVCP和VCPA序列。EgTPx基因的开放阅读框对应的基因组序列包含2个外显子和1个69 bp的内含子。
- 李航李文卉苟惠天李永光王艳华张德林贾万忠史大中付宝权
- 关键词：细粒棘球绦虫基因克隆
- 鸡抗球虫免疫机理研究进展被引量：9
- 2010年
- 闫鸿斌贾万忠田广孚才学鹏
- 关键词：艾美耳球虫细胞免疫体液免疫黏膜免疫细胞因子免疫机理
- 多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 为原核表达Tm16和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头蚴原头节基因组DNA为模板分别扩增Tm16和Tm18抗原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm16和pGEX-Tm18。转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化。结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm16及GST-Tm18重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆抗体特异性识别。
- 李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋BLAGA R付宝权
- 关键词：原核表达
- 6种鸡艾美耳球虫兰州株的致病性研究被引量：5
- 2009年
- 在试验条件下,测定了鸡艾美耳球虫兰州株的毒力,为进行鸡球虫病疫苗免疫和药物防治效果评价试验等研究提供攻虫剂量的选择依据。试验设空白对照组(NC)、不同剂量感染组1组～8组,共9个组,每组20只鸡。结果显示:(1)NC组、第1组～第7组(第8组全部死亡)相对增重率依次为100%、77.23%、77.02%、76.42%、72.86%、63.91%、67.19%和42.06%,其中NC组相对增重率极显著高于所有感染组(p<0.01);第1组和第2组显著高于第5组和第6组(p<0.05),极显著高于第7组间(p<0.01);第7组极显著低于其他试验组(p<0.01)。(2)空白对照组、第1组～第7组各组料肉比依次为2.01、2.21、2.24、2.29、2.33、2.78、2.94和4.06,呈现出剂量依赖关系,其中第7组极显著高于其他各组(p<0.01);第6组和第5组显著大于NC组和第1组～第5组(p<0.05)。(3)攻虫后第8d,每组剖检5只鸡,各肠段平均病变记分各组依次为0、1.79、2.33、2.54、2.63、2.5、2.67和2.8。(4)感染后排卵囊高峰期间,各组平均每克粪便中卵囊数(OPG)值分别为0、3.05×104、2.35×104、32.20×104、62.23×104、60.45×104、103.51×104和150.11×104(第8组除外)。(5)各组死亡率依次为0、5.0%、5.0%、15%、25%、40.0%、45.0%、95%和100%。结果表明:本试验所选用虫株均具有较强的毒力,每只鸡感染6个虫种每个虫种1×104个孢子化卵囊时,感染鸡生长严重受阻;感染剂量为6个虫种每个虫种2×105/只时,半数感染鸡死亡;6个虫种每个虫种3×105/只的感染剂量可导致全部感染鸡死亡,因此,攻虫试验时选择6个虫种每个虫种1×104/只～1×105/只的剂量为宜。
- 闫鸿斌田广孚贾万忠刘红霞张冬峰才学鹏
- 关键词：艾美耳球虫致病力
