国家教育部博士点基金(20110061110005)
- 作品数：8 被引量：71H指数：4
- 相关作者：丁壮胡静涛王春凤尹仁福杨文涛更多>>
- 相关机构：吉林大学吉林农业大学生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 2株乳酸菌对鼠结肠癌模型的抑制效果被引量：2
- 2015年
- 为比较酸奶中分离的短乳杆菌和鼠李糖乳杆菌对消化道肿瘤的潜在抑制效果,在肿瘤模型建立前2周给小鼠分别灌胃2株乳酸菌(2×108cfu),此后建立鼠结肠癌模型以比较2株乳酸菌对其是否具有抑制作用。通过给小鼠皮下注射CT26.WT细胞获得皮下增生物,经病理组织学检测为肿瘤后,通过腹部手术移植皮下瘤块至肠道表面,进而建立鼠结肠癌肿瘤模型。模型建立后通过腹部B超扫描监测肿瘤体积,并于模型建立2周后处死小鼠、分离肿瘤称重,计算抑瘤率。结果表明:皮下注射CT26.WT可以诱导获得皮下肿瘤,腹部手术、OB胶黏附瘤块建立了鼠结肠癌皮下移植瘤模型,荷瘤率为100%,术后存活率为96%以上。模型建立7 d后,腹部B超扫描检测结果表明,灌胃短乳杆菌组荷瘤鼠肿瘤的体积显著低于PBS组(P<0.05),而鼠李糖乳杆菌灌胃组荷瘤鼠肿瘤体积也有下降趋势,但与PBS组相比差异不显著。分离荷瘤鼠肿瘤组织,灌胃2株乳酸菌组小鼠肿瘤重均有所下降,且短乳杆菌组更为明显,短乳杆菌抑瘤率为36.47%,鼠李糖乳杆菌抑瘤率为21.68%。构建了鼠结肠癌原位移植瘤模型,且短乳杆菌对鼠结肠癌具有较好的抑制效果,优于鼠李糖乳杆菌。
- 胡静涛李俊峰黄海斌王丹叶丽萍
- 关键词：乳酸菌结肠癌抑瘤率
- CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术及应用研究进展被引量：2
- 2016年
- 成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白系统(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/CRISPR-associated nuclease system,CRISPR/Cas)是广泛存在于细菌和古细菌的适应性免疫系统,其中由Ⅱ型CRISPR/Cas系统改造而来的第三代基因组编辑技术——CRISPR/Cas9系统已广泛应用于生命科学研究的多个领域。本文主要从CRISPR/Cas9系统的发现、作用原理、应用进展及与其他新兴的基因组编辑技术的对比等四个方面进行阐述,重点介绍其最新研究进展,并展望了CRISPR/Cas9系统的应用前景。
- 孙玉章孙明军代永联尹仁福丁壮
- 重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2013年
- 为构建新城疫病毒乳酸菌穿梭表达载体,采用RT-PCR方法从新城疫病毒中扩增了HN基因,将其克隆到pMD18-T Simple Vector中。经测序鉴定正确后,定向克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,并转化入表达宿主菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明:NDVHN基因与表达载体pW425et正确重组,且该重组菌传50代次以上,重组质粒依然稳定。SDS-PAGE显示表达出约63 kD的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符。Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性。表明构建了重组NDVHN基因乳酸菌穿梭表达载体。
- 郭衍冰胡静涛于丹曹岩峰王一鸣张旺王春凤
- 关键词：新城疫病毒大肠杆菌
- NDPK B真核表达载体的构建及其对细胞生长活性的影响
- 目的,构建pEGFP-NDPK B真核表达载体,预测NDPK B蛋白的三维结构和活性位点,研究NDPK B表达对细胞生长活性的影响。方法,将目的基因NDPK B连接到pEGFP-N1真核表达载体,转染Vero细胞,通过增...
- 郭育培杨建新张学东王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：细胞生长活性
- 文献传递
- GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建及原核表达被引量：4
- 2012年
- 为构建具有示踪特性的新城疫病毒(NDV)HN基因乳酸菌穿梭表达载体,采用PCR方法扩增NDV HN基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因,将两基因克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,转化入表达宿主菌BL21(DE3)后利用IPTG诱导表达。用荧光显微镜检查重组菌的绿色荧光效应,采用SDS-PAGE和Western-blotting检测其在大肠杆菌中的表达情况。结果显示,NDV HN和GFP基因与表达载体pW425et正确重组。荧光显微镜下可见阳性重组菌落的绿色荧光,且该重组菌传代30代次以上,荧光效应依然稳定。SDS-PAGE显示表达出约63ku的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符。Western-blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性血清所识别,具有反应原性。构建了GFP标记的重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体且能在大肠杆菌中表达。
- 胡静涛杨文涛肖冲佟盼盼孟菲王春凤丁壮
- 关键词：新城疫病毒
- 重组鹅源新城疫病毒HN基因乳酸菌的构建被引量：4
- 2015年
- 构建了重组鹅源新城疫病毒(NDV)HN基因乳酸杆菌后,将HN基因亚克隆至可在乳酸杆菌和大肠杆菌中穿梭表达的载体pSIP409中。此后,将构建的阳性重组体pSIP409-HN采用电转化方法转化至植物乳酸杆菌感受态细胞中。利用SDS-PAGE和Western-blot检测HN蛋白的表达情况。为明确HN蛋白的表达位置,利用流式细胞术检测了重组菌细胞是否有HN蛋白的表达。结果显示,克隆了NDV HN基因,构建了阳性重组质粒pSIP409-HN;鉴定结果表明,阳性重组质粒pSIP409-HN被成功电转化至乳酸杆菌感受态细胞中。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,构建的重组菌可以表达与HN蛋白已知大小相符的条带(66ku),且该蛋白能与NDV阳性抗体反应,具有反应原性。流式细胞术检测结果表明,HN蛋白被表达于菌体细胞表面,可作为黏膜疫苗的候选抗原。
- 胡静涛郭衍冰杨文涛石少华王春凤丁壮
- 关键词：新城疫病毒乳酸杆菌
- 稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响
- 2012年
- 为了研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对新城疫病毒(NDV)复制的影响,从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增RKIP基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR、双酶切和测序鉴定,采用Fu-GENE HD法将阳性质粒转染Vero细胞,经G418筛选,有限稀释法获取单克隆细胞株,Western-blotting检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明:成功构建鸡RKIP真核表达质粒;转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP;感染初期,NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。
- 杨建新郭育培张学东王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：新城疫病毒
- 稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响
- 为了研究RKIP对新城疫病毒(NDV)复制的影响,从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增RKIP基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR、双酶切和测序鉴定,采用FuGENEHD法将阳性质...
- 杨建新郭育培张学东王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：新城疫病毒
- 文献传递
- 新城疫流行病学新特点及鹅新城疫防控策略被引量：57
- 2015年
- 新城疫(Newcastal disease,ND)是危害我国养禽业最严重的疫病之一,与高致病性禽流感并列为世界公认的最重要的2个禽类疫病。该病为OIE规定的必须报告的疾病,也是我国规定的一类动物疫病,世界各国对新城疫的防制和研究一直十分重视。由于对该病采取的严格防控措施,包括扑杀、强制性免疫等,新城疫的暴发流行得到了一定的控制。
- 丁壮尹仁福薛聪王建忠钱晶
- 关键词：新城疫基因型水禽流行病学
- NDPK B真核表达载体的构建及其对细胞生长活性的影响被引量：1
- 2012年
- 将目的基因NDPK B连接到pEGFP-N1真核表达载体,转染Vero细胞,通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和Western blotting分析,鉴定构建的pEGFP-NDPK B真核表达载体的正确性;利用生物信息学工具分析预测NDPKB蛋白的三维结构和可能存在的活性位点;MTT试验检测NDPK B对细胞生长活性的影响。结果显示,pEGFP-NDPK B真核表达载体构建成功,在Vero细胞中NDPK B和GFP蛋白能有效地融合表达。在线预测了NDPK B蛋白的三维结构和可能存在的活性位点。MTT试验结果表明,NDPK B对Vero细胞生长活性的抑制率为25.8%,对A549细胞生长活性的抑制率为22.7%。结果表明,NDPK B能够抑制细胞的生长,对细胞的凋亡具有正调节作用。
- 郭育培杨建新张学东王泽党源张晓东丁壮
- 关键词：细胞生长活性
