内蒙古自治区自然科学基金(2011BS0408)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：格日勒图特尼格尔赵慧小琴王敏更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学锡林郭勒职业学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 牛白介素10的克隆、测序及其在CHO细胞的表达被引量：1
- 2014年
- 用RT-PCR方法从健康牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白介素10(bIL-10)基因并进行测序,发现其核苷酸序列全长为537bp,编码179氨基酸,具有很好的遗传保守性。将该基因克隆到表达载体pcDNA3.1/V5-His Vectors A中,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1/V5-His A/IL-10,将该质粒转染到CHO细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测培养物上清和沉淀物中bIL-10的表达,结果表达的bIL-10大小约为20ku。本试验为bIL-10生物学特性及其基因多态性的研究奠定了基础。
- 敖敦格日勒温德宝百溪英一格日勒图
- 关键词：克隆测序真核表达
- 牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达及其表达产物的鉴定被引量：3
- 2012年
- 试验旨在构建微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达载体并获得重组CP15蛋白。试验以已知重组质粒pMD-CP15为模板,PCR方法扩增出CP15基因片段,并亚克隆到pGEX4T-3,构建了在E.coli BL21中GST融合表达载体pGEX-CP15;经1mmol/L IPTG进行诱导表达获得目的蛋白,其大小采用SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定。结果表明,扩增出约390bp的微小隐孢子虫表面抗原CP15基因片段并成功构建pGEX-CP15质粒,表达出分子质量为42ku的融合蛋白,与推导的理论值相符。Western blotting显示该蛋白能被GST血清识别。牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因在大肠杆菌中得到了高效表达。
- 满达兰丽王艳霞王敏格日勒图
- 关键词：原核表达
- 短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析
- 2012年
- S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出L.brevis的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示L.brevis样品在44～55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因,经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。
- 兰丽魏建民王艳霞王敏满达格日勒图
- 关键词：S-层蛋白克隆与序列分析
- 2种不同方法纯化乳酸杆菌重组S-层融合蛋白的比较试验
- 2014年
- 将重组菌E.coli BL21(含重组质粒pGEX-SLP)经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP,分别用非特异性的氯化锂沉淀方法和特异性的Pierce GST Spin Purification Kit纯化方法,将该融合蛋白进行纯化,纯化结果采用SDS-PAGE方法进行鉴定。结果显示,2种方法均能够获得大小约为71 ku的目的融合蛋白,但氯化锂沉淀方法纯化效果不及Pierce GST Spin Purification Kit方法。该研究结果为进一步研究乳酸杆菌S-层蛋白生物学特性提供了参考。
- 小琴特尼格尔赵慧格日勒图
- 关键词：重组菌E.COLIBL21融合蛋白纯化
- 多型FMDV VP1表位融合蛋白SLP-MultiVP1的纯化及鉴定被引量：4
- 2015年
- 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要感染偶蹄兽引起的烈性传染病。本研究对已构建的含有VP1表位肽基因的原核表达载体pGEX-SLP-MultiVP1进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE试验在菌体裂解物中证明了80 000融合蛋白的存在。通过Pierce?GST Spin Purification Kit亲和层析和切胶相结合的方法,成功纯化出融合蛋白GST-SLP-MultiVP1,并用Prescission Protease将该融合蛋白中的GST标签切掉,获得大小为54 000的目的蛋白SLP-MultiVP1,并用Western Blot试验证明了该蛋白与牛A、O、AsiaⅠ型疫苗株阳性血清均有特异性的结合。本试验进一步为口蹄疫VP1表位肽的免疫原性研究奠定了基础。
- 特尼格尔赵慧小琴陆继爽黄天鹏格日勒图
- 关键词：口蹄疫融合蛋白纯化
- 嗜酸性乳杆菌MG株S层蛋白的高级结构预测分析及原核表达
- 2013年
- 以嗜酸性乳杆菌MG株slp基因(表达S层蛋白的基因)为材料,应用Genetyx软件推导出其正确的开放阅读框(ORF),并用CPHmodels,Swiss-Model和Swiss-PdbViewer生物软件预测SLP蛋白质的高级结构;此外,构建slp基因的原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导后,成功表达出重组S层蛋白(S-layer protein,SLP),并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,使用3种不同的软件预测SLP蛋白质的高级结构,预测结果具有很高的相似性,其中α螺旋占3.33%,线性结构占45%,无规则卷曲占51.67%,平均亲水值为-0.262,亲水氨基酸比例为59.1%;表达载体pGEX-slp在E.coli BL21中经IPTG诱导成功表达出重组SLP蛋白,其GST融合蛋白的大小约为70ku。本研究结果为进一步以SLP为材料的生物制品的制备和应用开发奠定了基础。
- 王敏小琴那日苏王彩凤特尼格尔赵慧格日勒图
- 关键词：原核表达
- 短小乳杆菌重组S-层蛋白质的纯化及其体外黏附性的初步鉴定
- 2013年
- 以本实验室已构建的pMD19T-slp为模板,应用PCR方法亚克隆slp基因,将其定点插入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP并用LiCl的方法进行纯化。应用SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定,应用ELISA方法鉴定重组融合蛋白的体外黏附特性。在大肠埃希菌裂解样品中,SDS-PAGE和Western blot结果均证明分子质量大小约为71ku的重组融合蛋白GST-SLP的存在;ELISA结果提示,该重组融合蛋白在体外能够有效地黏附在乳酸乳球菌NZ9000表面。本试验为S-层蛋白质生物学特性的进一步研究奠定了基础。
- 王彩凤敖敦格日勒小琴特尼格尔赵慧格日勒图
- 关键词：纯化体外
