国家自然科学基金(30900807)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- DDAH2蛋白乙酰化对其活性的影响
- 一氧化氮(NO)在血压调节中具有重要作用,其由三种一氧化氮合酶(NOS)催化合成,包括神经型(nNOS)、诱导型(iNOS)和内皮型(eNOS)。非对称性二甲基精氨酸(ADMA)是三种NOS的共同竞争性抑制剂,ADMA在...
- 孙陆李家亓李英慧
- 文献传递
- HEK293细胞中DDAH2蛋白的乙酰化
- 一氧化氮(NO)是一种重要的血压调节因子,它由左旋精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)催化下合成.NOS包括三种亚型：神经性(nNOS)、诱导型(iNOS)及内皮型(eNOS).非对称性二甲基精氨酸(ADMA)是三种NOS的共...
- 孙陆李英慧李家亓初国铭李春义赵彦艳
- 关键词：乙酰化基因表达
- 曲古抑菌素A对神经胶质瘤细胞NOS1基因转录的影响被引量：1
- 2010年
- 目的以曲古抑菌素A(TSA)为乙酰化作用因素,研究大鼠神经胶质瘤C6细胞中乙酰化对神经型一氧化氮合酶(NOS1)基因转录水平的影响。方法应用real-time RT-PCR方法检测C6细胞中NOS1基因mRNA在不同时间及不同浓度TSA作用下表达水平的变化;采用nuclear run-off实验检测TSA作用下NOS1基因转录效率的改变。结果 TSA以时间及浓度依赖方式上调C6细胞中NOS1 mRNA水平;NOS1基因转录效率在TSA作用下显著提高。结论 TSA引起的乙酰化使C6细胞中NOS1基因转录水平明显增加。
- 李英慧李春义陈芳杰赵彦艳
- 关键词：TSA乙酰化
- 二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因启动子区-个NF-κB反应元件的鉴定
- 2014年
- 目的鉴定二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH2）基因启动子区的一个NF-κB反应元件，证明其在DDAH2转录激活中的作用。方法应用多种软件分析DDAH2启动子区，寻找潜在的转录因子结合位点；构建系列截短的DDAH2基因启动子荧光素酶报告基因载体，转染人胚肾HEK293细胞，通过荧光素酶活性检测分析各段启动子的活性；应用电泳泳动迁移实验（electrophoresis mobility shift assay，EMSA）和染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation，CHIP）方法分别在体外及体内鉴定NF-κB反应元件；构建NF-κB位点突变的DDAH2基因启动子荧光素酶报告基因载体，转染细胞，比较其与野生型启动子活性差异。结果DDAH2基因启动子区存在多种潜在的转录因子结合位点；DDAH2的各段启动子具有高转录活性，其中-530～-437区域为一个正调控区域；DDAH2基因启动子-476～469区为NF-κB反应元件，NF-κB可特异性结合于该位点；该NF-κB元件突变使DDAH2基因启动子活性显著下降。结论DDAH2基因启动子-476～469区为NF-κB反应元件，该元件在DDAH2转录激活中具有重要的作用。
- 李英慧李家亓孙陆初国铭赵彦艳
- 关键词：一氧化氮高血压
- 人胚肾293细胞中乙酰转移酶p300对二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因表达的调节被引量：1
- 2013年
- 目的:一氧化氮(NO)在高血压发生中具有重要作用,二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)可调节NO生物合成。本研究以乙酰转移酶p300为乙酰化作用因素,鉴定人胚肾293(human embryonic kidney 293,HEK293)细胞中乙酰化是否参与调节DDAH2基因的表达。方法:以人胚肾HEK293细胞为研究对象,转染野生型及乙酰转移酶(HAT)结构域缺失的突变型p300表达载体,应用Western blot方法鉴定载体表达情况;real-time PCR方法鉴定野生型及突变型p300对DDAH2 mRNA表达水平的影响;软件分析DDAH2启动子结构;构建DDAH2启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶活性检测系统检测野生型及突变型p300对DDAH2启动子活性的影响。结果:Western blot结果显示转染两种p300表达载体的HEK293细胞中p300蛋白表达水平显著升高(P<0.05);实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)结果证明野生型p300可显著升高DDAH2 mRNA表达(P<0.05),而HAT结构域缺失的突变型p300无此作用(P>0.05);软件分析结果显示DDAH2启动子区存在多种潜在的受乙酰化调控的转录因子的结合位点;构建了两个DDAH2启动子荧光素酶报告基因载体,分别命名为pGL530w和pGL171w;双荧光素酶活性检测结果证明基础条件下,pGL530w和pGL171w具有较高的活性(P<0.05),野生型p300可显著升高二者活性,但突变型p300对二者无明显作用(P>0.05)。结论:人胚肾HEK293细胞中p300介导的乙酰化可通过调节DDAH2基因启动子活性,从而参与调节DDAH2基因表达。这一机制可能在肾脏组织NO生物合成中发挥重要作用,从而在高血压发生中发挥一定作用。
- 李英慧李家亓孙陆初国铭孙志军
- 关键词：一氧化氮乙酰化P300
- 神经细胞中乙酰化对NOS1基因启动子活性的调节被引量：1
- 2011年
- 目的探讨乙酰化对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中NOS1基因启动子活性的调节作用。方法构建系列截短的NOS1 5′侧翼序列萤光素酶报告基因载体,应用萤光素酶报告基因检测系统分析SK-N-SH细胞中NOS1启动子活性,并比较组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)刺激前后启动子活性的变化。结果构建并鉴定了系列截短的NOS1启动子萤光素酶报告基因载体;在NOS1基因启动子区鉴定了两个正调控区域和两个负调控区域,同时TSA可上调不同长度启动子的转录活性。结论乙酰化参与调节神经细胞中NOS1基因启动子活性。
- 李英慧陈芳杰李春义赵彦艳
- 关键词：乙酰化启动子
- 丁酸钠对HEK293细胞中DDAH2表达的作用
- 2016年
- 以一种去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(NaBu)作为乙酰化刺激因素,探讨乙酰化在DDAH2表达中的作用.以NaBu刺激人胚肾293(HEK293)细胞,应用real-time PCR和Western印迹杂交方法检测DDAH2mRNA和蛋白表达水平.结果显示NaBu以时间和浓度依赖方式上调DDAH2 mRNA表达水平,同时对DDAH2蛋白表达水平亦起到明显的上调作用.
- 李英慧孙陆陈凯师
- 关键词：丁酸钠乙酰化
