国家自然科学基金(81270854)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- WNT1诱导信号通路蛋白2对肝细胞脂质代谢的影响及其作用机制被引量：1
- 2022年
- 目的探讨不同浓度人重组WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)对人肝癌细胞(HepG2)脂质代谢的影响及相关作用机制。方法分别用不同浓度(0、0.4、1和2 μg/L)人重组WISP2作用于HepG2细胞48 h, Cell-Titer发光法测定细胞活力, 酶法检测各组HepG2细胞内三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)含量, 同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(western blot)检测HepG2细胞内脂质合成、分解、转运相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较, 各浓度人重组WISP2处理组均未降低HepG2细胞的活性;人重组WISP2处理上调HepG2细胞TG、TC含量, 0.4、1、2 μg/L人重组WISP2处理组TG的含量分别为未处理组的1.254±0.039、1.216±0.028、1.174±0.014倍(F=6.791, P=0.006), TC含量分别为未处理组的1.264±0.057、1.394±0.101、1.392±0.077倍(F=7.045, P=0.005)。进一步研究发现, 与对照组比较, 加入人重组WISP2明显增加HepG2细胞脂质合成蛋白甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及二酰基甘油酰基转移酶(DGAT2)mRNA表达(均P<0.05), 显著上调SREBP1、ACC及脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平的表达(均P<0.05);但对低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)这类脂质转运蛋白及关键的脂质分解蛋白--脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达无明显影响。结论 rh-WISP2能显著增加肝细胞脂质含量, 促进脂质合成增加可能是其作用的关键机制。
- 毛敏邓涯兰宫环徐溢恬齐若梅云春凤陈北冬
- 关键词：肝细胞脂质代谢
- 硫氧还蛋白通过下调Nox4活性抑制血管内皮细胞黏附蛋白的表达被引量：1
- 2016年
- 目的探讨动脉粥样硬化始动环节中硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）对还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶Nox4亚型的作用，及其参与内皮细胞黏附蛋白表达的分子机制研究。方法应用腺病毒感染的方法在原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中建立高表达硫氧还蛋白（Ad—Trx）及其对照（Ad—GFP）的细胞模型。以致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）为刺激剂。用免疫印迹法检测细胞间黏附蛋白-1（ICAM-1）、Nox4及P22phox的表达；用间接免疫荧光的方法检验Trx在细胞内的表达；提取细胞膜组织，用酶学方法测定内皮细胞NADPH氧化酶的活性；应用荧光探针DCFH—DA进行细胞内活性氧检测。结果Trx过表达及NADPH氧化酶特异性的抑制剂Apocynin可以显著下调ox-LDL刺激下内皮细胞ICAM-1的表达和活性氧产生。与对照组相比过表达Trx抑制了内皮细胞膜组分中ox-LDL刺激下Nox4的表达、NADPH氧化酶活性增加以及P22phox的表达增加。结论Trx通过下调内皮细胞Nox4的活性，抑制内皮细胞ICAM-1的表达，减轻炎性损伤，保护内皮细胞功能。
- 陈北冬赵革新宫环孙杰高欣齐若梅
- 关键词：NADPH氧化酶内皮细胞
- 白藜芦醇改善高脂诱导老龄小鼠肥厚性肥胖作用的研究被引量：2
- 2021年
- 目的探讨白藜芦醇对老龄小鼠肥胖的影响及其可能的作用机制.方法分别将32周龄和48周龄小鼠随机分为3组:正常对照组进食普通饲料,每天灌胃1次0.3 ml生理盐水;高脂饮食处理组进食高脂饲料(含有21%脂肪和1.25%胆固醇),每天灌胃1次0.3 ml生理盐水;高脂饮食加白藜芦醇组进食高脂饲料,每天灌胃1次白藜芦醇(22.4 mg/kg,分散于0.3 ml生理盐水中).12周后称量各组小鼠体重,并进行脂肪组织取材及称重;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血浆瘦素浓度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测小鼠肥厚性肥胖相关指标.结果高脂饮食加白藜芦醇组老龄小鼠体重及皮下脂肪含量分别为(34.43±3.23)g和(3.21±1.58)%,较高脂饮食组老龄小鼠(53.16±2.16)g和(4.86±0.64)%有明显下降(均P<0.01),并与普通饮食中年小鼠数据接近;与中年小鼠比较,白藜芦醇对高脂饮食老龄小鼠瘦素的抑制作用更为显著,高脂饮食加白藜芦醇组老龄小鼠血浆瘦素浓度(0.015±0.009)g/L,较高脂饮食组老龄小鼠(0.100±0.027)g/L明显下降,且低于普通饮食的老龄小鼠(F=19.85,P=0.001),与普通饮食中年小鼠相接近;白藜芦醇可以显著增加高脂饮食老龄小鼠皮下脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达,并降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达(F=10.79、9.31、7.02,P=0.003、0.006,0.010).结论白藜芦醇可以显著改善老龄小鼠肥厚性肥胖,抑制瘦素分泌和上调PPARγ表达可能是其作用的关键机制.
- 尹森毛敏齐若梅冯璐宫环鲍利薛芸张明陈北冬
- 关键词：肥胖症白藜芦醇瘦素
- 硫氧还蛋白对血管内皮细胞Nox2通路调控的研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨动脉粥样硬化发生发展中硫氧还蛋白(Trx)对NADPH氧化酶Nox2亚型的调控作用及机制。方法应用腺病毒感染的方法,在原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立高表达硫氧还蛋白(Ad-Trx)及其对照(Ad-GFP)的细胞模型,将致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作为刺激剂,应用免疫印迹法检测Nox2、Rac1的表达及Akt的磷酸化;用免疫印记及免疫荧光的方法检验Trx在内皮细胞中的蛋白表达水平;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;提取细胞膜组织,用酶学方法测定内皮细胞NADPH氧化酶的活性。结果免疫印记结果显示腺病毒感染在内皮细胞中成功上调了Trx的表达,与对照组相比上调了3.3倍(P<0.01)。与对照组相比,过表达Trx明显下调了ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Rac1及p-Akt的表达(分别下调了31.5%、23.8%和20.8%,均为P<0.05),抑制了ox-LDL诱导的ROS增加(25.3%,P=0.0247)及NADPH氧化酶活性增加(32.6%,P=0.004)。结论过表达Trx通过减少ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Nox2结合蛋白Rac1的表达及Nox2下游信号分子Akt的磷酸化,抑制了内皮细胞Nox2通路的过度活化及氧化应激,减轻炎症损伤,保护内皮细胞功能。
- 陈北冬赵革新赵艳阳陈坤鲍利齐若梅
- 关键词：动脉粥样硬化硫氧还蛋白RAC1血管内皮细胞
- 胰岛素联合生长激素上调脓毒症大鼠肝生长激素受体的表达被引量：3
- 2013年
- 目的:观察脓毒症大鼠在胰岛素联合生长激素治疗前后生长激素受体的变化。方法:将56只造模成功大鼠随机分为七组,即对照组、脓毒症组、胰岛素组、生长激素组、联合组、LY294002组和MG-132组。于给药24 h后留取肝组织标本,检测生长激素受体mRNA和蛋白含量。结果:联合组较生长激素组脓毒症大鼠肝生长激素受体mRNA和蛋白含量增加。阻断PI3K和泛素蛋白酶体途径后,生长激素受体mRNA和生长激素受体蛋白均较联合组表达减少。结论:脓毒症时,胰岛素可通过PI3K信号上调肝细胞的生长激素受体水平,其作用可能与泛素蛋白酶体有关。
- 殷红珍虞文魁陈启仪李宁朱维铭李维勤高涛张娟娟习丰产
- 关键词：脓毒症生长激素受体胰岛素生长激素
- 氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化被引量：2
- 2020年
- 目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。
- 冯璐尹森宫环鲍利陈北冬
- 关键词：氯化锂二磷酸盐类
