国家自然科学基金(30100043)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 脂质体介导人端粒酶逆转录酶基因构建永生化软骨细胞方法的建立及评价
- 2010年
- 目的:探索将人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转入兔软骨细胞以获取大量种子细胞的方法和技术。方法:分离培养原代兔软骨细胞,以pcDNA3.1/Zeo(+)-hTERT载体进行基因转染,对照组则为空载体pcDNA3.1/Zeo(+),筛选并挑选出阳性克隆后扩增,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测转染hTERT基因后的软骨细胞hTERTmRNA表达;甲苯胺蓝染色判断转染hTERT基因后的软骨细胞是否具有软骨细胞的生物学特性;流式细胞术检测细胞周期及核型;裸鼠致瘤实验观察成瘤情况。结果:RT-PCR检测RNA水平上hTERT在细胞中的表达情况,hTERT转入兔软骨细胞后细胞形态未发生变化,长满单层后仍然呈现出多角形,与正常体外培养的软骨细胞形态基本一致。甲苯胺蓝染色后可见多糖染成蓝紫色,呈现较小蓝紫色颗粒,蛋白多糖等基质分布均匀,即转染hTERT基因后的软骨细胞具有合成和分泌软骨相关基质的功能。细胞周期测定转染hTERT的兔软骨细胞的增殖能力明显上升,细胞分裂基本以整数二倍体方式进行,保持了核型的基本稳定。裸鼠接种不致瘤。结论:转染hTERT的软骨细胞表型未发生转化,具有作为种子细胞和研究正常软骨细胞的生理、生化工具细胞的可行性。
- 冯颖石毅马杰焦平顾地周周余来
- 关键词：人端粒酶逆转录酶转染软骨细胞细胞增殖
- 应用人胚软骨细胞修复关节软骨缺损的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 了解应用人胚胎关节软骨细胞修复家兔膝关节软骨大面积深层缺损的效果 ,为临床上进一步应用人胚胎关节软骨细胞进行同种异体细胞移植的可行性提供佐证。方法 将分离的人胚胎关节软骨细胞以天然胶原作为细胞外基质网架 ,进行体外三维培养 1周后 ,植入家兔关节软骨大面积深层 (5 m m× 5 mm× 4 m m)缺损处 ,对修复组织进行大体观察及组织学评估。结果 移植术后 12周 ,缺损部位平坦、光滑 ,已为类似关节软骨的半透明组织填充 ,修复组织与宿主关节软骨组织整合较好 ,界限模糊 ;移植术后 2 4周 ,缺损表面为透明软骨填充 ,缺损深部的软骨下骨组织已经重建。结论 人胚胎关节软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞用于修复关节软骨组织的缺损。
- 侯宜许侃池光范杨同书颜炜群
- 关键词：关节软骨损伤软骨组织工程动物实验
- 人胚胎关节软骨细胞库的建立被引量：2
- 2002年
- 目的体外建立人胚胎关节软骨细胞冻存、复苏的稳定技术,为软骨组织工程提供大量的、具有软骨细胞生物活性的种子细胞。方法将传代培养的人胚胎关节软骨细胞用含10%DMSO、50%胎牛血清的IMDM培养液悬浮后,置于-196℃的液氮中长期保存,建立人胚胎关节软骨细胞库。然后将细胞库中的冻存细胞进行复苏培养,观察其生长状况,并测定软骨细胞中DNA及糖醛酸的含量。结果冻存软骨细胞复苏后仍保持旺盛的增殖与分泌细胞外基质的功能。结论关节软骨细胞库的建立,可以长期保存培养的软骨细胞。
- 侯宜许侃杨同书颜炜群王冰梅
- 关键词：冻存
