国家自然科学基金(31170945)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 相关作者：刘天庆宋克东李香琴关水葛丹更多>>
- 相关机构：大连理工大学辽宁石油化工大学中国石油更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生一般工业技术理学更多>>
- 聚N-异丙基丙烯酰胺细胞培养平台的研究进展被引量：2
- 2015年
- 聚N-异丙基丙烯酰胺(poly(N-isopropylacrylamide),PNIPAAm),温敏性聚合物,可利用其温敏特性替代酶类物质或细胞刮刀用于贴壁细胞的收获,从而有效避免酶解和机械损伤,可为生物医药领域提供品质优良的种子细胞。重点阐述促进细胞有效粘附和快速脱附的温敏性PNIPAAm二维平面的研发情况,包括选取特殊基材、引入亲水基团、调节反应物比率、控制聚合物厚度/密度、提供适宜外力等方式,从而有效改善细胞对温敏性平面的适应性并降低染菌风险以及减少低温处理对细胞的影响。同时介绍PNIPAAm微载体、支架和凝胶等温敏性三维培养介质的研究进展,此方式不仅增加细胞生长面积,更可以模拟体内微环境,从而保持细胞原始生理特征,同时实现大规模扩增和非酶解收获细胞以及组织器官修复和重构的目标。最后简单说明PNIPAAm培养平台的应用,PNIPAAm的研发为再生医学的发展提供了崭新思路。
- 杨磊刘天庆范晓光王菲李政
- 关键词：聚N-异丙基丙烯酰胺干细胞
- 多顺反子质粒重编程人脂肪干细胞为诱导多能干细胞被引量：1
- 2013年
- 为建立多顺反子质粒载体转染技术获得人脂肪干细胞(adipose stem cells,ASCs)来源的诱导多能干细胞(inducedpluripotency stem cells,iPSCs),应用2A元件连接Oct4/Sox2/KLF4/c-Myc四因子基因,构建为单一开放阅读框的多顺反子质粒载体.使用该质粒对ASCs进行转染及重编程为iPSC.采用形态学观察、特异性抗体免疫荧光鉴定、体外拟胚体诱导分化和体内畸胎瘤形成等方法进行鉴定.结果显示,ASCs成功重编程为iPSCs,具有与人胚胎干细胞相似的形态学及多向分化潜能;通过拟胚体和畸胎瘤实验证实iPSCs能在体内外分化成三胚层细胞;DNA印迹实验显示质粒载体序列未整合至iPSCs基因组中.因此,通过多顺反子质粒载体重编程技术成功建立的人iPSCs具有多向分化潜能,可减免发生插入突变和免疫排斥问题,为iPSCs在遗传性或退行性疾病的治疗奠定了实验基础.
- 曲鑫建刘天庆宋克东李香琴葛丹关水
- 关键词：诱导多能干细胞人脂肪干细胞
- 聚N-异丙基丙烯酰胺共聚物纳米膜的制备与表征
- 2013年
- 报道了一种制备性能良好的温敏性纳米膜的简易方法。首先采用自由基聚合法将N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟丙酯和甲基丙烯酸(3-三甲氧基硅)丙酯等原料合成为新型的PNIPAAm共聚物。通过动态光散射、傅里叶变换红外光谱、核磁共振氢谱和凝胶渗透色谱等对终产物的温敏特性、化学结构和分子量进行研究。进而采用旋转涂膜法和加热退火法在硅片或玻璃片上制备PNIPAAm共聚物纳米膜,并采用接触角测量仪、原子力显微镜和椭圆偏振仪等技术手段检测了不同制膜溶液浓度和测试温度条件下共聚物膜的表面润湿性、表面结构和总体厚度。结果表明所制备的PNIPAAm共聚物及其纳米膜均具有温敏特性,且可用于干细胞的有效收获。
- 杨磊刘天庆马学虎宋克东武爽樊鑫
- 关键词：表面接枝
- 1-磷酸鞘氨醇促进间充质干细胞向心肌分化被引量：1
- 2013年
- 为研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)对脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和脂肪间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)向心肌分化的影响,探索其适宜的作用时间和浓度,将UC-MSCs和AD-MSCs接种到培养板,用添加不同浓度S1P的心肌细胞培养液诱导两种干细胞向心肌分化,诱导时间分为7 d、14 d和28 d。采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白,α-肌动蛋白(α-actin)、缝隙连接蛋白(Connexin-43)以及肌球蛋白重链(MYH-6)的表达,并通过共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察;采用MTT分析细胞的活性;膜片钳检测分化细胞的钙瞬变(此为心肌细胞的功能性指标)。结果表明,S1P与心肌细胞培养液协同作用,能够促进UC-MSCs和AD-MSCs向心肌细胞的分化。并且,随着S1P浓度的增加,促分化作用增强,但细胞活性降低。S1P在心肌细胞培养液中的适宜作用时间为14 d,适宜作用浓度为0.5μmol/L。而且联合心肌细胞培养液可以使UC-MSCs和AD-MSCs的心肌分化细胞产生钙瞬变,具有类似心肌细胞的功能性。S1P能够与心肌细胞培养液协同作用,促进UC-MSCs和AD-MSCs的心肌功能性分化。
- 姜丽丽刘天庆宋克东关水李香琴葛丹
- 关键词：脐带间充质干细胞脂肪间充质干细胞心肌分化1-磷酸鞘氨醇心肌细胞
- PVDF-g-PNIPAAm温敏膜用于Hela细胞黏附生长与脱附被引量：1
- 2016年
- 传统的酶解法用于细胞收获容易导致细胞膜蛋白损伤,致使细胞功能缺失,而具有温敏特性的材料表面用于细胞培养时,可采用降温脱附法收获细胞,从而有效维护细胞的功能。研究将Hela细胞分别接种于常规空白培养板、PVDF膜以及四种不同PVDF-g-PNIPAAm温敏膜上,考察Hela细胞的黏附生长与降温脱附行为。培养过程中,观察细胞生长形态,检测细胞生长活率;收获时,观察细胞在从不同基底表面降温脱附行为,并对降温脱附法和胰酶消化法收获的细胞分别进行死活染色,计算细胞活率。结果表明,Hela细胞在不同基底表面均能正常黏附、铺展与生长;在四种不同PVDF-g-PNIPAAm温敏膜(M21,M32,M11,M23)上,M32与M11较更适宜细胞黏附与生长;当温度降低时Hela细胞不能从常规空白培养板及PVDF膜上自动脱附,但均能从四种温敏膜上自动脱附,脱附速率为M11>M32>M21>M23;降温脱附法比胰酶消化法收获的细胞活率更高,分别为(95±3.47)%与(81±2.26)%。PVDF-g-PNIPAAm温敏膜用于Hela细胞培养与收获的研究,为下一步采用温敏性PVDF-g-PNIPAAm中空纤维膜生物反应器大规模扩增并无损伤收获细胞奠定了基础。
- 李香琴刘天庆刘小红
- 关键词：聚N-异丙基丙烯酰胺聚偏氟乙烯细胞培养
- 新型温敏性中空纤维膜的制备与表征被引量：1
- 2016年
- 采用自由基聚合方法对中空纤维膜(hollow fiber membranes,HFMs)进行了N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)的接枝聚合,制备了一系列PNIPAAm-g-HFMs,同时考察了成纤维细胞在PNIPAAm-g-HFMs表面的培养与降温脱附情况。傅里叶红外光谱和元素分析结果表明PNIPAAm成功地在中空纤维膜上接枝聚合。动态接触角分析结果显示,当温度降至LCST以下,PNIPAAm-g-HFMs表面接触角明显降低;蛋白黏附测定结果进一步证实了当温度发生改变时,PNIPAAm-g-HFMs表面呈现亲疏水性质变化,即具有温敏性。37℃时,成纤维细胞在HFMs-0.005,HFMs-0.01和HFMs-0.05表面均能正常黏附、铺展与增殖;而HFMs-0.2不适宜细胞的黏附与生长。降温孵育后,黏附于PNIPAAm-g-HFMs表面的细胞发生明显的形态变化并从其表面发生脱附,细胞脱附率高达90%以上。以上实验结果表明,PNIPAAm-g-HFMs具有良好的温敏性,可实现细胞的降温脱附,可与生物反应器相结合用于贴壁型细胞的大规模扩增与降温收获。
- 庄美玲刘天庆宋克东王树萍
- 关键词：聚N-异丙基丙烯酰胺中空纤维膜接枝聚合温敏性
- 脂肪干细胞生长特性研究被引量：6
- 2014年
- 研究了脂肪干细胞在一个月连续培养中的生长增殖特性,及经长期连续培养后细胞的干细胞特性,同时探索了细胞周期蛋白表达与生长增殖特性之间的关系。分别采用CCK-8试剂盒与血细胞计数板来检测细胞活性与细胞数随时间的变化;用流式细胞仪检测细胞的死活情况;采用流式细胞仪和组织化学染色分析经一个月连续培养后细胞的干细胞特性;流式细胞仪和western blot分析不同时间段的细胞周期分布和细胞周期蛋白的表达。结果表明,脂肪干细胞在一个月的连续培养过程中始终保持很高的细胞活性和增殖能力。并且连续一个月培养后,仍然保持其干细胞特性。细胞周期蛋白A的增量表达,促进脂肪干细胞从S期向G2/M期过渡,使G2/M期细胞比率增加,处于分裂状态细胞含量增加,此时细胞处于快速增殖状态。因此,可以通过延长脂肪干细胞的传代培养时间来为细胞治疗提供更多高质量的移植用干细胞。并且在脂肪干细胞长期连续培养过程中,细胞周期蛋白A通过调节细胞周期分布而影响着细胞的生长增殖。
- 姜丽丽刘天庆宋克东关水李香琴葛丹
- 关键词：脂肪干细胞细胞周期细胞周期蛋白A
