国家自然科学基金(30100095)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
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- 纤连蛋白在血液系统的研究进展被引量：4
- 2005年
- 纤连蛋白(Fibronectin,FN)是细胞外基质中重要的黏附分子,与其整合素受体共同参与造血干／祖细胞的增值、分化及细胞黏附介导的耐药。随着对骨髓造血微环境的不断认识,细胞黏附介导的耐药在血液系统肿瘤耐药中起重要的作用。FN在血小板黏附与聚集中也起重要的作用,FN可能是独立于 Fbg、vWF之外介导血小板黏附与聚集的重要蛋白分子。本文就FN的分类、结构、功能及其与血液系统关系等方面的研究进展作一综述。
- 郭玉霞徐酉华
- 关键词：纤连蛋白血液系统骨髓造血微环境血小板黏附肿瘤耐药
- 逆转录病毒载体介导Fn-TPO基因修饰人骨髓间充质干细胞被引量：1
- 2006年
- 目的应用逆转录病毒载体介导纤维连接蛋白-血小板生成素(Fn-TPO)基因修饰人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),观察Fn-TPO基因修饰对于骨髓MSCs的影响。方法构建携带Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSCs进行体外基因修饰;台盼蓝拒染法计数活细胞数检测基因修饰后骨髓MSCs的体外增殖能力,RT-PCR检测Fn-TPO基因在骨髓MSCs中的表达情况,MTT法检测基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞的能力,ELISA检测基因修饰后骨髓MSCs分泌至细胞培养液中的TPO浓度。结果成功构建携Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSCs进行体外基因修饰;Fn-TPO基因在骨髓MSCs内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSCs体外增殖能力无明显改变(P>0.05);黏附造血细胞能力增强(P=0.01),分泌TPO的能力增强且不随培养时间延长而显著减弱(P<0.01),但受细胞生长状态影响。结论成功应用携带Fn-TPO基因的逆转录病毒载体对人骨髓MSCs进行基因修饰,使基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞分泌TPO能力增强。
- 于洁张磊莫姝杨光李欣宪莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞纤维连接蛋白血小板生成素逆转录病毒载体基因修饰
- FN-TPO基因修饰的骨髓间充质干细胞支持脐血造血干细胞植入的实验研究
- 2009年
- 目的观察纤维连接蛋白-血小板生成素(FN-TPO)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)支持脐血造血干细胞植入的能力。方法将20只严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠经亚致死剂量射线辐射后随机分为实验组(n=5):FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs联合脐血单个核细胞(CB-MNC)组共移植;对照组:包括单纯CB-MNC移植组(n=5)、CB-MNC联合未修饰骨髓MSCs共移植组(n=5)和仅输入不含血清的IMDM培养基的空白对照组。细胞移植后,持续观察各组小鼠4周,记录一般情况及生存率;通过检测不同时间点(辐射前,辐射后细胞移植前,细胞移植后2 d及1、2、3、4周)的小鼠外周血常规来反映小鼠造血系统恢复情况;4周后以流式细胞术和PCR等检测移植后小鼠体内的人源细胞的整合情况。结果辐射前、辐射后细胞移植前、移植后2 d及移植2周后各组动物外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数均无明显差别;细胞移植1周,实验组小鼠外周血WBC、RBC、Hb和Plt分别为(0.83±0.15)×109/L、(9.84±0.36)×1012/L、147.50±4.80 g/L和(198.75±71.14)×109/L,均较对照组为高,差别均有统计学意义(P<0.05),且实验组小鼠外周血常规变化比较平稳。移植4周各组动物生存率,基因修饰和未修饰MSCs联合CB-MNC共移植组较单纯CB-MNC移植组明显为高(80%VS40%);存活下来的细胞移植小鼠骨髓和外周血中均检测到人源性CD45+细胞,实验组小鼠骨髓和外周血中人CD45+细胞比例(%)分别为:8.15±1.72和2.28±0.57,与单纯CB-MNC移植组的3.93±1.28和0.82±0.06相比差别均具有统计学意义(P<0.05);PCR检测移植后4周存活小鼠体内人beta-actin基因表达情况显示:小鼠外周血、骨髓及心、肝、脾、脑、肺等重要脏器基因组DNA中有人beta-actin基因存在。结论FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs能够更有效的支持脐血造血干细胞植入。
- 张磊于洁莫姝吴艳宪莹李欣
- 关键词：造血干细胞脐血纤维连接蛋白血小板生成素植入
- Fn、TPO基因修饰对人骨髓间充质干细胞的影响被引量：2
- 2007年
- 目的观察纤维连接蛋白(Fn)、血小板生成素(TPO)融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞(MSC)的影响。方法构建携带 Fn-TPO 融合基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓 MSC进行基因修饰;观察 Fn-TPO 基因在骨髓 MSC 中的表达,以及基因修饰后骨髓 MSC 的体外增殖、黏附造血细胞和分泌 TPO 的能力;并将脐血 CD34^+细胞接种到基因修饰后骨髓 MSC 形成的滋养层,培养7d 观察修饰后骨髓 MSC 对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响。结果成功构建携带 Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓 MSC 进行体外基因修饰;Fn、TPO 基因在骨髓 MSC 内能够正常转录;基凶修饰后的骨髓 MSC 体外增殖能力[(6.92±0.77)×10~4/ml]与对照组[(7.18±0.89)×10~4/ml]比较差异无统计学意义(P>0.05);基冈修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0.188±0.018和0.167±0.017(P<0.01),分泌 TPO 能力分别为(7.46±0.59)ng/ml 和(5.58±0.37)ng/ml(P<0.01),细胞分泌 TPO 的能力不受培养时间的影响,但受细胞生长状态影响;2×10~4脐血 CD34^+造血干/祖细胞经基因修饰后骨髓 MSC 联合必要细胞因子体外扩增7 d,有核细胞数、CD34^+细胞比例、BFU-E、CFU-GM 及 CFU-GEMM 分别为(29.9±2.7)×10~4、(33.3±2.8)%、109.3±4.1/1×10~4 CD34^+细胞、163.7±7.1/1×10~4 CD34^+细胞、13.3±1.5/1×10~4 CD34^+细胞,较对照组明显增加(P<0.01)。结论 Fn-TPO 基因修饰能够增强骨髓 MSC 黏附造血细胞、分泌 TPO 及支持脐血 CD34^+细胞扩增的能力。
- 张磊于洁莫姝杨光李欣宪莹金先庆
- 关键词：骨髓间充质干细胞造血干细胞纤维连接蛋白血小板生成素基因修饰
- 特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓MSC TGF-β1和HGF的表达及对免疫的调节作用的研究被引量：5
- 2009年
- 目的:研究特发性血小板减少性紫癜(Idiopa thicthrombocytopenic purpura,ITP)患儿骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)体外的免疫抑制能力。方法:采集ITP患儿和对照儿童的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态及增殖能力,计数分析骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位(Colony forming unit-fibroblast,CFU-F);采用混合淋巴细胞反应检测骨髓MSC体外对淋巴细胞的免疫抑制能力;采用RT-PCR和ELISA方法检测骨髓MSC细胞内转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)mRNA的表达水平和细胞培养上清中因子的浓度。结果:(1)ITP患儿的骨髓MSC呈典型的成纤维样细胞形态,CFU-F计数(21.29±5.25)与对照组骨髓MSC的CFU-F计数(22.33±5.33)无显著差异(P>0.05);(2)ITP患儿骨髓MSC免疫抑制率([74.93±8.01)%]与对照组骨髓MSC免疫抑制率([76.42±8.80)%]比较无显著性差异(P>0.05);(3)ITP患儿骨髓MSC细胞内TGF-β1、HGF mRNA的表达水平与对照组比较均无显著性差(P>0.05);(4)ITP患儿骨髓MSC培养上清中TGF-β1的浓度([617.88±81.89)pg/ml]与对照组骨髓MSC培养上清中TGF-β1的浓度([632.40±126.90)pg/ml]比较无显著性差异(P>0.05);ITP患儿骨髓MSC培养上清中HGF浓度([520.20±30.67)pg/ml]与对照组骨髓MSC培养上清中HGF的浓度([521.56±36.72)pg/ml]比较无显著性差异(P>0.05)。结论:ITP患儿骨髓MSC TGF-β1和HGF的表达水平及免疫抑制能力与对照组比较无显著性差异。
- 吴艳于洁张磊罗庆肖剑文刘筱梅宪莹戴碧涛徐酉华苏庸春
- 关键词：特发性血小板减少性紫癜免疫抑制转化生长因子-Β1肝细胞生长因子
