国家自然科学基金(30100075)
- 作品数：11 被引量：53H指数：5
- 相关作者：周清华刘伦旭朱文王艳萍车国卫更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- nm23-H_1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法 应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 (Westernblot) ,检测L9981(缺失nm2 3 H1 基因的原代肺癌细胞株 )、L9981 nm 2 3 H1 (转染了nm 2 3 H1 基因的L9981细胞株 )、L9981 PLXSN (转染了空载体的L9981细胞株 )中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平。磷酸化ERK 1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Westernblot法以及 p44 /4 2MAPkinase分析试剂盒予以检测。 结果 L9981 nm2 3 H1 细胞株中磷酸化ERK 1/2的水平 ,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981 PLXSN细胞株 (P <0 .0 1) ,L9981和L9981 PLXSN细胞株间磷酸化ERK 1/2水平和ERK 1/2活性比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 nm2 3 H1 基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK 1/2的转录表达和ERK 1/2的活性。推测nm2 3 H1 基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关。
- 李印周清华孙芝琳覃扬朱文王艳萍刘伦旭陈小禾孙泽芳
- 关键词：NM23-H1基因肺癌癌细胞信号传导通路
- 蛋白激酶C抑制剂CalphostinC抑制人高转移大细胞肺癌细胞株侵袭和转移的实验研究
- 2009年
- [目的]探讨以蛋白激酶C(PKC)为靶点应用其特异性抑制剂开发抗肿瘤侵袭与转移靶向药物的可行性。[方法]应用MTT法和改良Boyden小室法分别检测三株肺癌细胞株细胞(L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1)的侵袭力、增殖力;以及加入CalphostinC作用后,三株细胞株细胞侵袭力、增殖力的变化。[结果]L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无显著性差异(P>0.05)。用CalphostinC处理三株肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性显著下降(P<0.001),但L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),而后两者细胞间则无显著性差异(P>0.05)。[结论]PKC抑制剂CalphostinC可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力;CalphostinC和nm23-H1在影响人高转移大细胞肺癌细胞株细胞体外增殖活性和侵袭力的过程中具有协同和相加作用。
- 聂强杨平玲周清华朱文刘伦旭付军科李定彪李印车国卫
- 关键词：蛋白激酶C抑制剂肺肿瘤大细胞癌细胞株靶向治疗
- 转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?
- 付军科周清华朱文王艳萍刘伦旭陈小禾聂强李定彪李印
- 关键词：L9981GSK-3ΒΒ-连环蛋白
- 人肺癌细胞株L9981-nm23-H_1的建立被引量：8
- 2004年
- 目的 建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法 应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 H1 。应用PCR和Westernblot检测L9981 nm2 3 H1 细胞中nm2 3 H1基因及其蛋白表达。结果 成功构建了逆转录病毒载体pLXSN nm2 3 H1 EGFP。nm2 3 H1 cDNA导入到L9981细胞株中 ,并检测到L9981 nm 2 3 H1 细胞中有nm 2 3 H1 蛋白表达。结论 nm 2 3 H1 基因在细胞株L9981 nm2 3 H1 中能持续。
- 车国卫周清华王艳萍陈军刘伦旭覃扬孙芝琳陈小禾朱文
- 关键词：NM23-H1基因肺肿瘤
- nm23-H_1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中β-catenin表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中 β catenin和磷酸化β catenin表达水平的影响 ,为阐明nm2 3 H1基因逆转肺癌转移的分子机制提供实验依据。方法 以原代L9981、转染nm 2 3 H1基因的L9981 nm2 3 H1和转染空载体的L9981 pLXSN三株肺癌细胞株为研究对象 ,应用WesternBlot检测比较各细胞株胞浆、胞核中 β catenin和磷酸化 β catenin表达水平的变化 ,以确定nm 2 3 H1基因转染是否能调控人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中 β catenin和磷酸化 β catenin表达。 结果 ①β catenin在L9981 nm2 3 H1细胞株胞浆中表达量 (IOD) (3 64 9± 118)显著高于L9981(14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN(13 5 0± 5 5 )细胞株 (P <0 .0 0 1) ;②β catenin在L9981 nm 2 3 H1细胞株胞核中表达量 (2 945± 68)与L9981(2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN(2 65 2± 5 3 )细胞株比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;③磷酸化β catenin在L9981 nm 2 3 H1细胞株胞浆中表达量 (3 12 3± 10 2 )显著低于L9981(4 3 62± 13 1)和L9981 pLXSN (4 5 0 0±117)细胞株 (P <0 .0 0 1) ;④磷酸化 β catenin在L9981 nm2 3 H1细胞株胞核中表达量 (5 13 6± 112 )显著高于L9981(2 666± 116)和L9981 pLXSN(2
- 付军科周清华朱文王艳萍刘伦旭陈晓禾车国卫聂强李定彪
- 关键词：L9981Β-CATENINWNT信号通路
- nm23-H_1基因逆转肺癌转移表型及其分子机制的实验研究被引量：33
- 2003年
- 周清华车国卫覃扬王艳萍孙芝琳孙泽芳陈小禾彭玉珍秦建军刘伦旭陈军
- 关键词：转移抑制基因肺癌分子机制
- nm23-H_1基因转染能上调人肺癌细胞株L9981中GSK-3β激酶活性被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨转移抑制基因nm2 3 H1对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导激酶GSK 3 β的表达量和活性的影响 ,为全面阐明nm2 3 H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法 将稳定转染nm 2 3 H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1、原代细胞株L9981和空载体转染细胞株L9981 pLXSN培养传代 ,应用Westernblot分别检测应用 2 0mmol/LLiCl处理前后三个肺癌细胞株胞浆、胞核中GSK 3 β的表达水平 ,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞浆和胞核中的GSK 3 β激酶活性。 结果 ( 1)L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核中GSK 3 β蛋白表达量分别为( 63 41± 5 41)和 ( 4 3 5 6± 490 )IOD ,L9981 pLXSN分别为 ( 3 613± 3 83 )和 ( 70 5± 75 )IOD ,L9981分别为 ( 373 6± 2 98)和 ( 65 7± 5 7)IOD。三个细胞株间胞浆和胞核中GSK 3 β表达量均有非常显著差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β表达水平均显著高于L9981 pLXSN和L9981(P <0 .0 1) ,而后两者之间比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β激酶活性分别为 ( 2 895 5±2 5 0 9)和 ( 92 47± 92 4)CPM ,L9981 pLXSN分别为 ( 112 41±
- 付军科周清华朱文王艳萍陈小禾车国卫聂强李定彪刘伦旭李印
- 关键词：基因转染肺癌癌细胞L9981GSK-3Β转移抑制基因
- nm23-H_1基因转染前后人肺癌细胞中PKC转位的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和CalphostinC处理转基因细胞株L9981 nm2 3 H1前后PKC在不同的亚细胞区域的定位情况。结果 ( 1)原代细胞株L9981和空载体细胞株L9981 pLXSN中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞核及核周 ,处于激活状态 ;转染nm 2 3 H1基因后的人肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞浆 ,处于未激活状态。 ( 2 )CalphostinC作用后所有细胞中的PKC均主要位于胞浆中 ,处于未激活状态。结论 ( 1)nm2 3 H1基因可使L9981细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 ( 2 )CalphostinC可使L9981、L9981 pLXSN细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。
- 聂强朱文王艳萍陈小禾杨俊杰刘伦旭付军科李定彪李印周清华
- 关键词：NM23-H1基因转染肺癌癌细胞蛋白激酶C抑制剂信号转导
- nm23-H_1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性变化的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA活性的影响。方法 应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981 nm 2 3 H1 pLXSN和空载体转染细胞株L9981 pLXSN共同培养 ,应用放免法检测forskolin处理后不同时间点三个细胞株PKA的活性变化。结果 ( 1)forskolin处理前L9981、L9981 pLXSN和L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性经F检验有显著性差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性显著高于L9981和L9981 pLXSN(P <0 .0 1) ,而L9981与L9981 pLXSN之间比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )在同一作用时间 ( 3 0min)下 ,三个细胞株经不同浓度forskolin处理后PKA活性均显著升高 (P <0 .0 1) ,在forskolin浓度为 10 0 μmol/L时PKA活性最高 ,呈剂量依赖关系。 ( 3 )三个细胞株在同一浓度forskolin( 10 0μmol/L)处理下 ,PKA活性随作用时间升高 ,在forskolin作用时间为 3 0min时PKA的活性最高 ,呈时间依赖关系。结论 ( 1)nm2 3 H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性 ,nm2 3 H1作为一种肿瘤转移抑制基因的作用机理与PKA信号通路可能有一定联系 ;( 2 )forskolin能显著上调L9981细胞?
- 李定彪周清华王艳萍朱文陈小禾杨俊杰刘伦旭付军科聂强李印
- 关键词：NM23-H1L9981FORSKOLIN高转移大细胞肺癌
- nm23-H_1基因缺失人肺癌细胞株的筛选与鉴定被引量：1
- 2004年
- nm12-H1基因已被证明是肿瘤转移抑制基因，它的结构和功能的异常与癌细胞的侵袭和转移能力密切相关。研究证明nm12-H1基因的低表达和杂合性缺失与肺癌的高转移性和预后不良有密切关系。周清华等推测nm12-H1基因可能是“肺癌转移抑制级联”中的关键基因和上游基因，为了进一步探讨nm12-H1基因在“肺癌转移抑制级联”
- 车国卫周清华王艳萍
- 关键词：肺癌癌细胞基因缺失肿瘤转移抑制基因
