新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200611101)
- 作品数：21 被引量：142H指数：8
- 相关作者：倪志勇吕萌李波王娟白岩更多>>
- 相关机构：新疆农业科学院新疆农业大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定被引量：9
- 2010年
- 为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的GhCOMT2蛋白,大小约为40.062 kD,浓度为0.62 mg/mL。重组蛋白的最佳诱导条件为:0.2 mmol/LIPTG在16℃诱导12 h。重组蛋白以可溶形式高效表达,用蛋白标签亲和层析柱(HisTrapTMHP)获得纯化重组蛋白,Western blotting分析表明其能与His多克隆抗体起特异性反应。
- 李波倪志勇石庆华范玲
- 关键词：原核表达蛋白纯化WESTERNBLOTTING
- TRAP分子标记在棉花海陆渐渗杂交后代选择中的应用研究被引量：2
- 2009年
- 利用与棉花纤维伸长相关和纤维细胞次生壁发育相关的基因设计了9条固定引物,与42条随机引物组合形成378对引物。从中筛选出亲本间有显著差异长绒棉共显性TRAP(目标区域扩增多态性)标记12个。用这12个标记对4个海陆杂交组合、每组合40个BC1单株的后代进行了鉴定,用3个标记对另7个海陆杂交组合、每组合40个BC1单株的后代进行了鉴定,发现分离是普遍存在的,在所有检测的BC1代中,平均分离比例接近50%。显示这些长绒棉共显性的标记可以广泛的用于任意海陆杂交或渐渗杂交后代是否携带与标记相关海岛棉基因的选择,不只针对特殊的亲本和一对杂交亲本的分离群体。为实现TRAP分子标记辅助育种与棉花品质性状的遗传改良奠定了基础。
- 范玲王冬梅师维军马盾王娟吕萌李建平秦超袁辉
- 关键词：海岛棉分子标记
- 棉花甲基化酶基因COMT和CCoAOMT的组织特异性表达分析被引量：11
- 2010年
- 本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(根、茎、叶、子叶、花瓣、雄蕊、胚珠)中都有表达,其中COMT1和CCoAOMT1在各组织中的表达趋势类似,COMT2,COMT3和CCoAOMT2表达趋势各异。在5～25d的棉纤维发育过程中,COMT1和COMT3表达稳定,COMT2表达量逐渐增加。而CCoAOMT基因家族的2个基因的表达量变化相对明显,CCoAOMT1在25d出现表达高峰,CCoAOMT2则在10d和15d呈现高表达量。本研究表明甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在棉花的根,茎等维管组织中具有相对一致的高表达量,而在其他组织和发育纤维中则呈现出明显的组织特异性和纤维发育时期特异性。
- 吕萌倪志勇王娟李波罗淑萍范玲
- 关键词：组织特异性表达
- 不同量化RT-PCR的方法在棉花纤维GhCAD基因表达中的研究被引量：3
- 2009年
- 以陆地棉（Gossypium hirsutum L．）高代品系CJ01在开花后5、10、15、20、25d（DPA）共5个不同发育时期的棉花纤维为材料，分别利用常规半定量RT-PCR法、Quantum RNA^TM 18S内标相对定量法以及实时荧光定量RT-PCR法，对棉花肉桂醇脱氢酶（GhCAD）基因在棉花纤维不同发育时期中的表达进行相对定量分析，并测定了内标表达的稳定性。结果表明，3种方法获得相似的结果，GhCAD基因在5～15DPA时表达量较低，20、25DPA时表达量升高。3种方法虽各有利弊，但均为研究基因量化表达的有力工具。
- 袁辉胡文冉倪志勇王冬梅范玲
- 关键词：陆地棉棉纤维
- 新疆特早熟陆地棉纤维细胞发育过程的超微结构观察被引量：4
- 2009年
- 利用透射电镜观察新疆特早熟陆地棉新陆早36号纤维发育过程中的超微结构变化。在10DPA纤维细胞初生壁形成期,液泡占据纤维细胞中央,细胞质中有大量的线粒体、内质网、高尔基体等细胞器,初生壁较薄且厚度均匀;在20DPA时,纤维在初生壁内已明显有一层薄薄的次生壁的形成,细胞质中细胞器部分解体;随后次生壁增厚速度逐步加快,在30DPA到40DPA之间,纤维平均增厚速度约为每天0.139m,在40DPA到50DPA之间,纤维平均增厚速度约为每天0.47m。纤维细胞次生壁向内层逐步层层加厚,形成"日生长轮"。随着纤维细胞的脱水成熟,纤维细胞次生壁增厚使纤维中腔只剩下一条窄缝。观察结果表明,虽然特早熟陆地棉发育进程快,开花早,但纤维细胞的发育进程与所报道的其它棉花品种具有相似性。
- 闫洪颖胡文冉范玲
- 关键词：纤维发育超微结构
- 棉花肉桂醇脱氢酶基因GhCAD3的克隆及原核表达被引量：11
- 2010年
- 肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素生物合成过程中的一个关键酶类。本研究从棉花中克隆了一个CAD基因,命名为GhCAD3(GenBank登录号为FJ376601)。GhCAD3全长1573 bp,具有1个1080 bp的开放阅读框,5′非编码区为35 bp,3′非编码区为458 bp,编码359个氨基酸,预测分子量约为39.116kD,等电点为7.48。氨基酸同源性分析发现,GhCAD3与其他CAD一致性为64.13%。为了进一步研究GhCAD3基因的功能,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-CAD3,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE电泳分析表明,最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG在37℃下诱导7 h。
- 倪志勇李波范玲
- 关键词：棉花肉桂醇脱氢酶原核表达
- 棉花GhCCR4基因的瞬时表达研究被引量：6
- 2010年
- 利用棉纤维发育调控基因瞬时表达体系,分析目的基因在棉花纤维发育过程中可能存在的功能。实验构建了由CaMV35S启动子驱动的pGUS-CCR4融合瞬时表达载体,使用基因枪轰击法转化棉花胚珠,确定了转化0DPA胚珠的最佳条件:轰击压力为1350psi,轰击距离为9cm,轰击次数为2次。GUS组织化学染色结果表明,GhCCR4基因在棉花纤维伸长期和次生壁增厚期持续表达。不同发育时期纤维长度测量结果发现,在8DPA时转GhCCR4基因纤维长度和对照相比没有明显差别,但在27DPA时纤维长度明显短于对照。纤维透射电镜切片观察发现,转GhCCR4基因的细胞次生壁与对照相比增厚达17%。
- 秦超倪志勇闫洪颖吕萌郝晓燕范玲
- 关键词：棉纤维透射电镜
- 棉花GhCOMT3基因的原核表达、纯化及鉴定被引量：6
- 2010年
- 为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导的蛋白表达量最大,之后对包涵体进行变性溶解,进行SDS-PAGE检测,再经过蛋白标记亲和层析柱(His TrapTMHP)纯化得到变性的pET-28a-GhCOMT3融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化效果,鉴定表达产物,目的蛋白相对分子量约为39.119kDa,检测结果与预期一致。结果表明,pET-28a-GhCOMT3蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达产物,为在蛋白水平上研究GhCOMT3基因功能奠定了基础。
- 李波倪志勇范玲
- 关键词：原核表达蛋白纯化WESTERNBLOTTING
- 木质素生物合成关键酶咖啡酸-O-甲基转移酶基因(COMT)的研究进展被引量：35
- 2010年
- 木质素是植物苯丙烷代谢途径的重要产物之一,其生物合成涉及到许多酶的参与。其中咖啡酸-O-甲基转移酶(caffeic acid-O-methyltransferase,COMT)是木质素特异途径中的一个关键酶,可催化咖啡酸、5-羟基松柏醛和5-羟基松柏醇甲基化分别生成阿魏酸、芥子醛和芥子醇,参与S-木质素的合成。本文主要对COMT基因的特征、COMT在木质素生物合成中的作用及COMT基因对植物木质素合成调控的研究现状进行了综述,并对COMT基因的研究方法和在生产中的应用作了展望。
- 李波倪志勇王娟吕萌范玲
- 关键词：木质素生物合成途径
- 受精对胚珠离体培养棉纤维生长发育的影响分析被引量：1
- 2010年
- 【目的】探索了新疆陆地棉品种新陆早36号未受精胚珠(0 DPA)和受精胚珠(2 DPA)在离体条件下棉纤维的生长发育情况。【方法】利用胚珠离体培养技术分别不继代培养未受精胚珠和受精胚珠30 d,通过纤维长度测量和生长图像的数字化处理技术,对二者体外培养12 DPA和27 DPA的生长状况进行对比分析。【结果】12 DPA时,未受精胚珠纤维长度为0.8 cm,纤维团面积为0.28 cm2,分别为受精胚珠的67%和54%;27 DPA时,未受精胚珠纤维长度为1.7 cm,纤维团面积为0.85 cm2,分别为受精胚珠的81%和77%。【结论】发现受精胚珠在不同时期的纤维发育情况均明显好于未受精胚珠,受精胚珠建立的离体培养体系更适合用于棉纤维生长发育过程的研究。
- 吕萌王娟倪志勇胡文冉范玲
- 关键词：胚珠离体培养受精棉纤维
