博士科研启动基金(9451093201003248)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：项琪邱壮伟黄亚东林健聪娄国锋更多>>
- 相关机构：广东省生物工程药物重点实验室国家工程研究中心暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- TAT-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物活性测定被引量：3
- 2010年
- 构建表达Tat与人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)融合蛋白的重组质粒pET3c Tat-aFGF14-154和pET3c-Tat-aFGF27-154,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中。37℃,1mmol/L的IPTG诱导4h后,获得分子量约为18kDa的融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的42%和24%。利用阳离子交换(CM-Sepharose FF)、肝素亲和层析(Heparin-Sepharose CL-6B)以及分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白,得率分别为93ml/L和78mg/L。Tat-aFGF14-154及其对照蛋白aFGF14-154对Balb/c3T3细胞有明显促细胞增殖的作用,最佳作用浓度分别为1280ng/ml和160ng/ml。而Tat-aFGF27-154及其对照蛋白aFGF27-154则几乎没有促细胞增殖活性。免疫荧光分析结果表明,Tat-aFGF14-154及Tat-aFGF27-154均能穿过PC12、Balbc/3T3、HaCaT和海马神经元细胞的细胞膜,并主要定位于细胞浆中。此外,四种重组蛋白均能降低Aβ25-35对大鼠海马神经元细胞的毒性,在剂量为1000ng/ml时,Tat-aFGF14-154、Tat-aFGF27-154、aFGF14-154及aFGF27-154细胞存活率分别为90.66%、81.87%、85.71%和78.02%,而Aβ25-35模型组的存活率仅为56.87%。
- 林健聪张敏静苏志坚陈红霞邱壮伟娄国锋项琪黄亚东
- 关键词：穿膜肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白
