北京市教育委员会科技发展计划(Km200710025007)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
- 相关作者：杨川杰丁库克周平坤李延玲郝淳更多>>
- 相关机构：河北医科大学第二医院首都医科大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系被引量：4
- 2011年
- 目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。
- 李莉赵焕英杨川杰鲁苇媛郝淳乔茶周平坤徐勤芝丁库克
- 关键词：REAL-TIMEPCR
- 早期反应基因Ier5启动子区辐射敏感的转录因子结合位点研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨辐射诱导早期反应基因5（Ier5）的转录调控机制。方法运用缺失体构建、定点突变、电泳迁移率实验（EMSA）及染色质免疫共沉淀（ChIP）技术，确定宫颈癌HeLa细胞中Ier5基因启动子区域、转录因子及其结合位点。结果发现Ier5基因的启动子区可能在缺失体Ier5—8所包含的范围（-408～-238bp）内。Ier5基因具有2个转录因子，分别为GCF、NFI，其中GCF的结合位点在Ier5基因启动子-388～-382bp和-274～-270bp处，NFI的结合位点在Ier5基因启动子-362～-357bp处。GCF抑制Ier5基因的表达，抑制作用随1射线吸收剂量的增加而减弱，NFI促进Ier5基因的表达。结论Ier5基因启动子最可能的区域为-408-238bp，该区域存在2个辐射敏感的转录因子GCF和NFI的结合位点。GCF对let5基因的顺式作用元件起负调节作用，而NFI起正调节作用。
- 崔巍尹玲玲董凌月李莉刘志成李延玲安威刘晓丹杨川杰周平坤丁库克
- 关键词：转录
- IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响被引量：7
- 2009年
- 为寻找放射敏感性基因,采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因,其中就有IER5.为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用,采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系.对该细胞系与HeLa细胞进行辐射,旨在了解IER5-siRNA-HeLa的细胞生长曲线、细胞周期等实验参数的变化,揭示了IER5基因在辐射诱导中的生物学功能.实验发现,IER5基因表达抑制可提高细胞分裂进入S期与G2-M期的比例,促进细胞分裂,促进细胞生长,提高细胞对辐射的拮抗性,同时发现IER5-siRNA-HeLa细胞在尺寸上大于HeLa细胞.研究表明,IER5基因表达抑制可促使细胞受辐射后发生S期与G2-M期的阻滞,IER5参与辐射细胞周期的调控,对临床宫颈癌放疗有一定的潜在应用价值.
- 李秀楠李莉杨川杰郝淳乔茶杨芬周平坤王佩袁增强李延玲鲁玮媛张为远丁库克
- 关键词：HELA细胞宫颈癌
