国家自然科学基金(U1201227) 作品数:8 被引量:53 H指数:4 相关作者: 杨子峰 王玉涛 李润峰 李征途 胡坪 更多>> 相关机构: 广州医科大学 华东理工大学 榆林市第一医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
板蓝根多糖的系统分离纯化与组成分析 被引量:20 2016年 目的建立板蓝根多糖的系统分离纯化方法,并对分离得到的均一多糖进行组成测定。方法以抗病毒活性较好的80%醇沉板蓝根粗多糖为研究对象,对其进行DEAE-Sepharose Fast Flow柱色谱、Sephacryl-200葡聚糖凝胶柱色谱以及高效凝胶色谱系统分离纯化。分别采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)和邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC法对分离得到的板蓝根均一多糖进行单糖组成和氨基酸组成测定。结果利用系统分离纯化策略,从80%醇沉板蓝根粗多糖中分离得到2种均一板蓝根多糖(IRPS1A和IRPS1B)和2种均一板蓝根糖蛋白(IRPS2A和IRPS3A)。其中,IRPS1A与IRPS1B的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;IRPS2A的单糖组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖;IRPS3A的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。糖蛋白IRPS2A与IRPS3A均含有天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸,共14种氨基酸残基。同时,IRPS2A还含有酪氨酸残基。结论该系统分离纯化的策略可应用于板蓝根均一多糖(糖蛋白)的获取,为板蓝根多糖的结构分析及药理活性研究奠定基础。 国欣 胡小龙 王月荣 杨子峰 王玉涛 李征途 胡坪关键词:板蓝根多糖 单糖组成 氨基酸组成 实验动物小鼠及西藏小型猪和猴的甲型流感病毒受体分布特征 被引量:1 2015年 目的分析小鼠、西藏小型猪和猴的流感病毒sialic acid(SA)α-2,3-Gal[α-2,3-半乳糖唾液酸]受体和SAα-2,6-Gal受体在不同器官、组织分布特征,为流感病毒的组织嗜性及可能的跨种属传播提供基础数据。方法应用外源凝集素亲和组织化学染色法分析上述实验动物的流感病毒SAα-2,3-Gal受体和SAα-2,6-Gal受体的分布特点及特异性。结果除脑和心脏外,气管与支气管、肺脏、肾脏、脾脏、肝脏、小肠都有SAα-2,3-Gal和SAα-2,6-Gal受体分布,其中小鼠的SA-2,3-Gal受体主要分布在气管纤毛上皮细胞和基底细胞,SAα-2,6-Gal受体在气管纤毛上皮细胞有弥漫性表达;在肺实质,SAα-2,3-Gal受体弥漫性存在于肺泡。西藏小型猪的SAα-2,6-Gal受体主要分布在气管和支气管内上皮细胞的假复层纤毛上皮细胞,肺脏中,SAα-2,6-Gal主要分布在上皮细胞中而SAα-2,3-Gal主要分布在内皮细胞中,在肺泡内层SAα-2,6-Gal和SAα-2,3-Gal受体表达相似;猴的气管和支气管中,SA-2,3-Gal受体主要分布在气管无纤毛上皮细胞(主要是基底细胞),以及支气管部分纤毛和无纤毛上皮细胞;SAα-2,6-Gal受体在气管支气管纤毛细胞和无纤毛上皮细胞有弥漫性表达,且2种受体在肺细胞中均有分布。结论流感病毒SAα-2,3-Gal受体和SAα-2,6-Gal受体在不同器官中均有不同程度分布,其中主要分布在气管与支气管、肺脏等上、下呼吸道。 王玉涛 赵瑾 杨子峰 李润峰 杨春光 李洪涛 张奉学关键词:小鼠 西藏小型猪 甲型流感病毒 板蓝根水提物体外抑制人H7N9禽流感病毒药效研究 被引量:8 2016年 目的评价板蓝根水提物体外抑制人H7N9禽流感病毒的药效。方法利用改良的方法提取纯化板蓝根水提物。在鸡胚尿囊腔中扩增人H7N9禽流感病毒,以药物毒性试验(MTT法)检测药物的毒性,在狗肾细胞上种植人流感病毒PR8株(A/PR/8/34,H1N1)和人H7N9禽流感病毒(A/Anhui/01/2013和A/Shanghai/01/2013),采用细胞病变抑制法(CPE法)在治疗作用策略下研究板蓝根水提物在体外抑制人H7N9禽流感病毒的药效。结果板蓝根水提物体外的半数有毒浓度(TC50)为>5 000μg/m L。板蓝根水提物在体外对于人流感病毒PR8株(A/PR/8/34,H1N1)的IC_(50)为2 500μg/m L,选择指数(SI)>2;对于人禽流感病毒H7N9(A/Anhui/01/2013)的IC_(50)为5 000μg/m L,SI>1;对于H7N9(A/Shanghai/01/2013)IC_(50)为2 500μg/m L,SI>2。板蓝根水提物在体外能抑制人H7N9禽流感病毒,且对于H7N9(A/Shanghai/01/2013)毒株的抑制效果更佳。结论板蓝根水提物在体外能有效抑制人H7N9禽流感病毒,药效和作用于人流感病毒药效相当。 李征途 李莉 王玉涛 黎旭钊 李润峰 李小波 杨子峰从乙型流感病毒流行株中筛选获得鼠肺适应株的研究 被引量:3 2014年 目的从乙型流感流行株中筛选获得可在鼠肺中稳定复制的毒株。方法利用免疫抑制剂甘露聚糖分别联合5株乙型流感临床分离株和1株标准株感染BALB/c小鼠,筛选出可稳定在鼠肺中连续感染传代的毒株,并纯化后感染小鼠,检测其致病力与致死率,最后对病毒核酸进行测序,分析分子特征。结果从5株临床分离株中筛选到1株乙型流感病毒,可在小鼠中稳定感染并致死,经测序比对发现适应过程中该株病毒血凝素(HA)发生2个突变:N212Y和E361K,神经氨酸酶(NA)发生1个位点突变S339F,其中HA E361K是裂解位点。结论成功从临床乙型流感分离株筛选适应获得一株鼠肺适应株,为进一步开展药物和发病机制研究提供了可能。 杨子峰 杨春光 王玉涛 潘思华 江海明 李润峰 关文达关键词:乙型流感病毒 小鼠模型 流感病毒诱导的宿主细胞信号通路——潜在抗病毒药物靶点 被引量:3 2013年 流感病毒(influenza virus)属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae family)流感病毒属。根据流感病毒的核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白(matrix protein,M)抗原性的不同将其分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,其中甲型流感病毒根据其表面的血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)抗原性的差异,又分为16种HA亚型和10种NA亚型[1]。 王玉涛 杨子峰关键词:流感病毒 细胞信号通路 药物靶点 板蓝根抗流感病毒多靶点研究思路综述 被引量:8 2014年 板蓝根在临床上主用于病毒或细菌感染性疾病的治疗,许多文献报道板蓝根对流感、乙型肝炎、单纯疱疹、病毒性心肌炎、出血热等疾病均有较好的治疗和预防作用。有关板蓝根功效的研究发现其具有抗病毒、抗癌、抗细菌内毒素、抗炎、增强免疫力等多重药理属性,但其中以抗病毒最受关注。为了进一步探索板蓝根抗流感病毒的物质基础和作用机制,笔者将板蓝根已证明具有抗流感病毒作用的化学成分及药理机制的研究情况作一综述。 李莉 杨子峰关键词:板蓝根 流感病毒 多靶点 板蓝根糖肽的组成测定 被引量:3 2015年 目的测定从板蓝根粗多糖中分离纯化得到的板蓝根糖肽的氨基酸和单糖组成成分。方法 70%醇沉粗多糖经柱层析分离得板蓝根糖肽,其单糖组成采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化高效液相色谱法测定。采用响应面试验优化板蓝根糖肽的肽链酸水解条件,使用柱前在线衍生高效液相色谱法测定其氨基酸组成。结果单糖组成为:甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖=132.6∶5.0∶1.0∶7.6∶7.0∶23.8∶76.8,总质量百分数为94.5%。氨基酸组成测定的最佳水解条件是在104℃下用10 mol/L的盐酸水解17 h。测得板蓝根糖肽的氨基酸组成为:天门冬氨酸∶谷氨酸∶丝氨酸∶组氨酸∶苏氨酸∶精氨酸∶丙氨酸∶缬氨酸∶苯丙氨酸∶异亮氨酸∶亮氨酸∶赖氨酸=3.8∶3.8∶2.5∶0.7∶2.5∶1.1∶2.9∶1.9∶0.6∶1.0∶1.5∶1.3,总质量百分数为5.4%。结论本研究为阐明板蓝根糖肽的一级结构奠定了基础。 胡坪 陈烨 杨子峰 高云霄 张敏 章弘扬 王月荣关键词:板蓝根 糖肽 响应面试验 氨基酸组成 单糖组成 白藜芦醇对常见肠道病毒抑制作用的实验研究 被引量:8 2015年 目的:观察白藜芦醇体外对多种肠道病毒的抑制药效,为进一步探讨其抗肠道病毒谱提供依据。方法:采用细胞病变抑制法(Cytopathic effect inhibition Assay,CPE)和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,通过计算病毒抑制率、药物半数有效浓度(IC_(50))及选择指数(selection index,SI),研究白藜芦醇体外对抗多种肠道病毒的作用效果。结果:肠道病毒属(EV)11、EV71、EV84、柯萨奇病毒(COX)B3和COX A10等5种病毒的TCID50分别为:2.13×10^(-4),1×10^(-4),2.13×10^(-6),1×10^(-5)及4.67×10^(-4)。白藜芦醇在Vero E6细胞的半数毒性浓度TC_(50)为50μg/mL。白藜芦醇最大无毒浓度为25μg/mL,以此为抗病毒活性检测的起始浓度。在最大无毒浓度下,白藜芦醇与阳性对照药对5种肠道病毒均有抑制作用。除EV84病毒外,白藜芦醇的抑制率均高于阳性药物利巴韦林。结论:白藜芦醇体外具有抗多种肠道病毒作用,对于病毒性肠道传染病防治具有一定应用前景。 王玉涛 招穗珊 关文达 李润峰 杨子峰 王新华关键词:白藜芦醇 肠道病毒 体外试验