广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301101)
- 作品数：22 被引量：28H指数：3
- 相关作者：卢建溪李刚钱师宇王强阳莉更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院暨南大学广东省妇幼保健院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 我国非腹泻患者肠道内腺病毒感染的分子流行病学初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究非腹泻人群肠道内腺病毒感染的分子流行病学情况。方法采集非腹泻患者的粪便样本,在A549细胞中进行培养,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后进行克隆、测序,确定病毒基因型。结果114份样本中,细胞培养结合PCR分型方法检测出12份样本中存在腺病毒,阳性率为10.5%。序列分析显示,其中人腺病毒5型占25.0%(3/12)、7型占16.7%(2/12)、12型占25.0%(3/12)、48型占33.3%(4/12)。结论本研究在我国非腹泻的一般人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在。文献报道人腺病毒48型为罕见血清型,但其占本研究中阳性样本的33.3%,其在我国是否属于罕见,需要慎重对待。
- 卢建溪阳莉李雪玲黄建华周才王强
- 关键词：腺病毒流行病学肠道
- 抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA在原发性胆汁性肝硬化诊断中的作用被引量：3
- 2009年
- 目的评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2—3E（BPO）为靶抗原的酶联免疫吸附（ELISA）法（抗-M2-3E ELISA）检测抗线粒体抗体M2亚型（AMA-M2）IgG和IgA抗体在原发性胆汁性肝硬化（PBC）诊断中的敏感性、特异性以及其临床意义。方法分别用间接免疫荧光法（IFL）、以丙酮酸脱氢酶复合体为靶抗原的ELISA法（抗-PDC ELISA）、抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC患者，87例疾病对照患者和26名健康体检者的AMA-M2 IgG和（或）IgA抗体。检测ALT、AST、总胆红素、白蛋白、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、血清肌酐、IgG、IgM及IgA。对于符合正态分布的计量数据采用t检验，不符合正态分布者采用秩和检验。结果107例PBC患者抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率（90．6％）高于IFL法（81．3％）和抗-PDC ELISA法（72．9％），t值分别为4．32和6．03，P值均〈0．05。抗-M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为55．1％，特异性为97．2％；而总体AMA-M2IgG和（或）IgA的检出率为92．5％，特异性为95．2％。20例IFL检测AMA-M2 IgG为阴性的PBC患者中，抗-M2-3E ELISA法检出率为45％，AMA-M2 IgG和（或）IgA的检出率为55％，抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和（或）IgA。AMA-M2 IgG呈阳性的患者（97例）比呈阴性的患者（10例）有更加严重的组织学变化和更高的IgG、IgM和碱性磷酸酶水平。结论抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗PDC ELISA法更高的敏感性和特异性，可作为第一轮AMA-M2的筛查。AMA-M2 IgG阳性可能说明该PBC患者有更加严重的疾病，但是AMA-M2 IgG和IgA部不能单独用于诊断PBC。
- 卢建溪钱师宇舒欣李刚
- 关键词：酶联免疫吸附测定抗线粒体抗体
- 携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究
- 2011年
- 目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。
- 卢建溪阳莉钱师宇王强
- 关键词：腺病毒载体基因重组
- 抗线粒体抗体阴性原发性胆汁性肝硬化患者的临床特征分析
- 2009年
- 目的探讨抗线粒体抗体(AMA)阴性原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床、生化、免疫学及病理学特征。方法对2003年1月至2008年1月临床及病理确诊的107例PBC患者进行回顾性研究,分析比较AMA阴性及AMA阳性患者的一般资料、病程、临床表现、生物化学、免疫学及病理学特征。结果107例经临床及病理诊断确诊为PBC的患者中20例用间接免疫荧光法(IFL)和/或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清AMA/AMA-M2结果呈阴性,AMA阴性患者和AMA阳性患者之间在年龄、性别、临床表现方面差异无统计学意义(P>0.05)。AMA阴性患者的IgG、IgM和ALP平均值显著低于AMA阳性患者,差异有统计学意义(P=0.006,P=0.001,P<0.05)。AMA阳性患者比AMA阴性患者有更加严重的组织学变化,差异有统计学意义(P=0.002和P<0.001)。结论通过更加严重的组织学变化和更高的IgG,IgM和ALP平均值看出,AMA呈阳性的患者(n=97)比呈阴性的患者(n=10)有更加严重的疾病。
- 卢建溪丘秀生李刚
- 我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
- 2011年
- 目的研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性。方法采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有3个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因组多样性
- 广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分子流行病学研究
- 2010年
- 目的研究广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分布特点。方法采集73例成人、41例儿童共114例非腹泻人群的粪便样本,进行体外细胞感染实验,同时提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 114份样本中,共有12份样本检出腺病毒,阳性率为10.5%(12/114)。其中儿童组阳性率为14.6%(6/41),成人组阳性率为8.2%(6/71),两组间比较差异显著有统计学意义(P<0.05)。经序列分析显示,12份样本分别属于人腺病毒5型(3份)、7型(2份)、12型(3份)及48型(4份)。成人的人腺病毒型别为5型、7型、及48型,婴幼儿的人腺病毒型别为12型、48型。结论广州地区人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在,其中12型及48型为首次发现,并且12型仅在婴幼儿中发现。此外,文献报道人腺病毒48型为罕见血清型,但其占本研究中阳性样本的33%,其在我国是否属于罕见,需要慎重对待。
- 阳莉卢建溪王强黄建华周才
- 关键词：腺病毒基因型病毒分离流行病学
- 新型的抗线粒体抗体M2亚型抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的可靠性分析
- 2009年
- 目的研究以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3EELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的可靠性。方法分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法(抗-PDCELISA)、以三联体(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-3EELISA)、以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3EELISA)检测107例PBC、167例疾病对照和30例正常对照血清中的AMA-M2抗体。结果107例PBC患者用抗-M2-3EELISA、抗-3EELISA、抗-PDCELISA和IFL4种方法检测AMA-M2的检出率(敏感性)分别为99/107(92.5%)、94/107(87.9%)、78/107(72.9%)、87/107(81.3%),特异性分别为97.3%、98.5%、98.5%、97.3%。抗-M2-3EELISA法AMA-M2的检出率(92.5%)显著高于抗-PDCELISA法(72.9%)(P<0.001)、IFL法(81.3%,P<0.001),高于抗-3EELISA(87.9%)。在20例IFL检测AMA-M2为阴性的PBC患者中,用抗-M2-3EELISA法AMA-M2的检出率为11/20(55%)。抗-M2-3EELISA和IFL的重叠度为85.0%(91/107)。结论抗-M2-3EELISA法具有比IFL、抗-PDCELISA法和抗-3EELISA更高的敏感性,特异性达97.3%。因此,抗-M2-3EELISA法可作为第一轮AMA-M2的筛查,但不可以单独用于诊断PBC的标记。
- 卢建溪钱师宇李永伟李刚
- 关键词：抗线粒体抗体原发性胆汁性肝硬化酶联免疫吸附实验
- 阿德福韦酯抗病毒疗效与乙型肝炎病毒基因型的关系被引量：4
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）不同基因型对阿德福韦酯（ADV）抗病毒疗效的影响。方法对16例应用ADV治疗的慢性乙型肝炎（CHB）患者，采用荧光定量PCR法检测其HBVDNA的水平，全自动生化仪检测其丙氨酸氨基转移酶（ALT）的水平。用PCR法扩增用药前（基线）、用药后28、52和92周时的HBV全基因组，克隆后进行全基因组序列测定及基因型分型。观察治疗12、16、28、40、48、52、68、80及92周时抗病毒疗效。结果（1）不同基因型CHB患者治疗前HBVDNA及AI．T水平差异无统计学意义（均P〉0．05）。HBV基因型B型、C型CHB患者治疗12、16、28、40、48、52、68、80和92周时HBVDNA载量的变化、ALT复常及HBeAg血清转换等指标差异均无统计学意义（均P〉0．05）。HBV基因型B型、C型患者治疗92周HBV DNA有效抑制率均为100％。（2）16例CHB患者的HBV基因型分布为B型9例，C型6例，B和C混合型1例。5例患者在接受ADV治疗后基因型由B型变为C型或从C型变为B型。结论HBV基因型为B型或C型的CHB患者对ADV治疗的病毒学、血清学和生物化学应答无显著差异，提示HBV基因型可能对ADV的疗效无影响。
- 卢建溪王强陈文思李莉朱明芬李刚
- 关键词：基因型阿德福韦酯抗病毒治疗
- 两种肠道腺病毒基因型分型方法的比较被引量：1
- 2010年
- 目的研究简便快速肠道腺病毒基因型分型方法。方法采集137例非腹泻人群的粪便样本,在A549细胞中培养,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增或直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 137份样本中,两种方法均有17份样本检出腺病毒,阳性率为12.4%(17/137)。序列分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致。这17份样本分别属于人腺病毒5型(5份)、7型(3份)、12型(3份)及48型(6份)。结论两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,无需方法一需进行3次体外细胞感染实验后从病变细胞中提取基因组DNA进行PCR扩增,节省实验的时间及成本,特别是避免体外细胞感染过程中可能出现的污染,值得推荐。
- 阳莉卢建溪王强黄建华周才
- 关键词：腺病毒基因型病毒分离流行病学
- 两种恒河猴肠道腺病毒基因型分型方法的比较分析
- 2011年
- 目的通过对两种肠道腺病毒基因型分型方法进行比较,以寻找出简便快速的肠道腺病毒基因型分型方法。方法采集57例圈养的恒河猴粪便样本,方法一:将粪便悬液过滤上清感染BSC-1细胞,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后克隆、测序,确定病毒基因型;方法二:从粪便悬液过滤上清中直接提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 57份样本中,两种方法均有12份样本检出腺病毒,阳性率为21.1%(12/57)。系统进化分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致。提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有三个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1、SAdV-3和HAdV-52。结论虽然两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,而无需方法一进行3次体外细胞感染实验后从病变细胞中提取基因组DNA进行PCR扩增,节省了实验的时间及成本,特别是避免了体外细胞感染过程中可能出现的污染,因此值得推荐。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因型
