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Nonidet P-40裂解流感病毒及其对抗体结合影响的透射电镜观察: 2010年; 目的利用TEM观察经Nonidet P-40处理的A型流感病毒表面形态变化,研究不同表面活性剂-病毒表面相互作用情况,以提供一种较为温和的病毒表面裂解条件,并考察表面活性剂存在条件下对病毒表面抗体结合作用的影响,为利用病毒内部抗体结合病毒下层结构提供免疫诊断学理论基础.方法通过用不同浓度的非离子型表面活性剂NP-40对完整的A型流感病毒进行处理,经透射电子显微镜成像,观察两种试剂对病毒表面形态的破坏程度,并考察病毒抗体结合情况.结果 NP-40各浓度对病毒表面破坏程度不一,病毒随浓度增高降解程度增大,但在0.1%NP-40及以下浓度上对抗体结合作用影响不大.结论通过表面活性剂优化处理病毒颗粒,对抗体的结合会产生影响,本研究为利用流感病毒内层抗体结合包膜病毒奠定了样本处理的理论基础.; 胡孔新张丽萍平芮巾马雪征杨鹏飞孙肖红张乐; 关键词：表面活性剂正黏病毒科

西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究: 2011年; [目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i+亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果](1)重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。(2)W estern blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。(3)兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1:50000以上。(4)检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。; 王彦芳杨鹏飞张丽萍平芮巾刑福彬咸庆杰胡孔新; 关键词：西尼罗病毒原核表达免疫原性

应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法被引量：20: 2012年; 目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。; 徐焕洲平芮巾季汝武王琳杨鹏飞张丽萍岳启安胡孔新; 关键词：多重RT-PCR 日本脑炎病毒黄热病毒西尼罗病毒

哺乳动物细胞西尼罗病毒样颗粒表达、纯化及其鉴定被引量：1: 2011年; 目的利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒(WNV)prM和E蛋白,形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法筛选典型西尼罗病毒株,构建重组质粒,转染293T细胞,表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白,利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验(IFA)和酶链免疫吸附试验(ELISA)对表达产物进行鉴定。结果重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(viruslike particles VLPs),转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性;间接ELISA证实,重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性,为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础。; 咸庆杰姜宝芹郭雪王琳杨鹏飞张丽萍平芮巾岳启安胡孔新; 关键词：西尼罗病毒 293T细胞病毒样颗粒间接免疫荧光试验

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国家质检总局科技计划项目(2008IK210)