高等学校学科创新引智计划(B07045)
- 作品数：17 被引量：105H指数：5
- 相关作者：周泽扬向仲怀鲁成潘国庆赵爱春更多>>
- 相关机构：西南大学重庆师范大学重庆大学更多>>
- 发文基金：高等学校学科创新引智计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 家蚕抗菌肽基因研究进展被引量：16
- 2009年
- 抗菌肽是昆虫先天性免疫系统中十分重要的效应因子,近年来一直是昆虫免疫学研究的热点。家蚕作为鳞翅目昆虫的代表,其抗菌肽研究取得了长足进展。根据已经研究获得的抗菌肽基因序列在家蚕基因组中进行同源搜寻,共获得了40个家蚕抗菌肽基因。这些基因编码的多肽在大小、氨基酸组成和性质上差异很大,但基于结构性质可以分成3类:(1)具有α-螺旋结构并且缺乏半胱氨酸(cysteine,Cys)的线性抗菌肽;(2)富含脯氨酸或甘氨酸的组成性抗菌肽;(3)富含半胱氨酸的环形抗菌肽。以这3类结构作为主线,综述了家蚕抗菌肽近年来的研究进展。
- 孙伟沈以红向仲怀张泽
- 关键词：家蚕抗菌肽基因
- 家蚕微卫星标记的荧光原位杂交研究被引量：1
- 2007年
- 家蚕既是重要的农业经济昆虫,又是遗传学研究常用的实验动物和现代分子生物学研究的良好材料.目前已有多种分子标记被用于家蚕遗传连锁图的构建,但人们对这些分子标记在染色体上的物理定位仍知之甚少.该文以微卫星(SSR03)序列为探针,对家蚕染色体进行荧光原位杂交,在减数分裂的间期、粗线期、中期染色体上都观察到单一荧光信号,表明该序列为单一序列微卫星遗传标记.利用ImageJ软件测算杂交信号在该染色体上位置,信号位点距离近端的相对长度与该染色体相对长度比值为12.502±0.470.SSR03可作为家蚕染色体物理图的遗传标记.
- 丁裕斌潘敏慧王强洪锡钧鲁成
- 关键词：家蚕微卫星序列荧光原位杂交
- 应用DGGE技术分析自然免耕土与普通耕作土细菌群落的多样性被引量：3
- 2011年
- 为探明免耕土壤与普通耕作土壤环境中细菌群落的多样性,获取相关优势菌落信息,该研究利用宏基因组学方法获得免耕土和普通耕作土样品总DNA,利用PCR获得16S rDNA V3片段,并进行变性梯度凝胶电泳(Denaturation gradient gel electrophoresis),通过微生物种群丰富度比较两样品中群落的丰富性,同时选取相关DNA条带进行克隆、测序和生物信息学分析。结果显示:免耕土壤中细菌群落多样性更加丰富;两类型土壤样品间细菌群落组成具有显著差异,证明耕作制度影响了土壤细菌群落结构。BLAST分析与系统发生分析结果表明,免耕土壤中特异存在的细菌群落与具有生物固氮、降解甲苯和倍硫磷等特性的细菌序列相似性较高或进化关系较近,推测其在免耕土壤肥力、有毒物质降解及有机质转变等过程中起作用。
- 马振刚马淑华张时恒贾俊杰李田潘国庆周泽扬
- 关键词：DGGE细菌群落自净能力
- 蚕系统发生及进化历史分析被引量：4
- 2012年
- 古丝绸之路是连接古亚洲和古欧洲的纽带.作为重要媒介,家蚕和丝绸在其中发挥着重要作用.家蚕是目前唯一一种被完全驯化的昆虫.然而,利用分子数据研究家蚕起源及进化历史的研究还很少,尤其是家蚕及其祖先野桑蚕的分化时间还有待确定.作为重要的驯化物种,家蚕的群体动力学变化历程也鲜有报道.本研究利用线粒体和核基因DNA序列推断了家蚕及其近缘物种的系统发生关系和进化历史.所有系统发生分析结果表明,家蚕和中国野桑蚕具有更近的亲缘关系.家蚕的驯化时间大约为4100年.中国野桑蚕大约在23600年前与日本野桑蚕分开,这个时间与化石证据和历史记载一致.另外,研究结果表明,家蚕在大约1000年前经历了群体扩张.本文对蚕的分化时间及蚕群体动力学进行研究,不仅有利于驯化动物的遗传分析和鳞翅目昆虫的系统发生分析,而且有利于理解人类文明的传播.
- 孙伟于红松沈以红Banno Yutaka向仲怀张泽
- 关键词：家蚕驯化群体动力学
- 线粒体型蛋白frataxin在家蚕微孢子虫中的鉴定与分析被引量：2
- 2008年
- 【目的】Frataxin是铁硫簇相关蛋白,在线粒体代谢中起着重要作用。分析家蚕微孢子中该蛋白的结构特征,系统进化关系以及在孢子体内的转录翻译活性。【方法】基于家蚕微孢子全基因组序列,同源序列搜索获得该基因序列。进行蛋白二级结构比较,近缘物种共线性特征分析及系统进化树构建。此外构建pGEX-4T-1-Nbfra原核重组表达载体,转化E.coliBL21(DE3)进行目的蛋白表达纯化,以此为抗原免疫小鼠,制备抗体,并与家蚕微孢子总蛋白进行Western免疫杂交。【结果】Nbfra蛋白缺乏进入线粒体的信号序列,功能区缺乏部分α-螺旋;frataxin基因在不同微孢子基因组中的分布具有共线性特征,表明其在基因组进化中非常保守。系统进化分析显示微孢子形成独立进化支,并且与高等真核生物近缘,说明微孢子在进化地位上比其它原虫更加高等,支持了微孢子虫是真菌的姊妹枝的进化地位假说。【结论】免疫杂交结果表明Nbfra基因家蚕微孢子虫中能正常表达与翻译。本研究为微孢子的分类地位及线体假说提供了重要的补充依据。
- 胡军华潘国庆许金山芦琨党晓群吴正理李艳红周泽扬
- 关键词：FRATAXIN共线性家蚕微孢子虫微孢子
- 不同EGFP-蜘蛛丝融合基因在昆虫细胞的表达及融合丝蛋白形成机制初探(英文)
- 2007年
- 蜘蛛能吐出具有优异机械特性的多种类型的丝,其中管状腺丝用于构建卵囊并具有良好的分子和机械性能,是目前唯一报道的全长cDNA序列的蜘蛛丝。基于为将来利用生物工程方法大量生产高性能的仿蜘蛛丝纤维提供基础信息,通过Bac-to-Bac/AcNPV杆状病毒表达系统,在强启动子驱动下,对2个大小不同的蜘蛛卵囊丝蛋白基因序列(全长cDNA序列和部分cDNA序列)与EGFP报告基因实现了在AcNPV昆虫细胞中的融合表达。绿色荧光和W estern印迹分析表明,被表达出的2个大小不同的卵囊丝融合蛋白在昆虫细胞胞质中呈现出明显不同的溶解性。含有部分卵囊丝基因的短EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物在胞质里具有可溶性;而含有全长卵囊丝基因的巨大EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物倾向于自我装配形成沉淀聚合物。研究结果也暗示了蜘蛛丝蛋白的分子大小可能对其装配成高性能的丝纤维有重要影响。
- 赵爱春夏庆友鲁成向仲怀张袁松中垣雅雄
- 关键词：蜘蛛丝丝蛋白
- 家蚕转基因研究及肌动蛋白A3启动子的表达分析被引量：7
- 2007年
- 通过显微注射法,将转基因栽体pBcA3EG及辅助质粒pA3H导入产后1h的蚕卵,在G_1代获得家蚕转基因的阳性个体。通过对G_2代转基因蚕基因组的Southern杂交分析表明,获得的该转基因品系为EGFP基因的单拷贝插入。同时对G_2代个体不同发育时期及不同组织进行荧光观察,发现EGFP在转基因家蚕幼虫期的表达较其它时期强,而幼虫时期强烈的EGFP主要由中肠组织的杯形细胞高量表达所致。这些结果初步表明A3启动子在家蚕的不同发育时期及不同组织存在表达的活性差异。
- 刘春徐汉福陈玉琳李春峰张美蓉夏庆友
- 关键词：家蚕转基因PIGGYBAC启动子
- 重庆地区家蚕微孢子虫遗传多态性分析被引量：2
- 2008年
- 为探讨家蚕微孢子虫种内的遗传多样性,对本实验室保存的一株家蚕微孢子虫的SSUrDNA,rDNA-ITS,rDNA-IGS,Sec61β5′上游序列(Nb-IGS1)和Hsp705′上游序列(Nb-IGS2)进行了PCR扩增和序列测定.多重序列比对发现它们都存在着不同程度的多态性.其中rDNA-ITS和rDNA-IGS遗传多样性最为明显,序列中存在较大的差异区域,包括多碱基的插入或缺失、单碱基的转换和颠换;而对基因上游的调控序列分析发现,Nb-IGS1和Nb-IGS2序列中存在着少量的变异位点.结合GenBank中Nosema属微孢子虫的同源序列,分别构建rDNA-ITS和rDNA-IGS系统树,结果表明重庆地区家蚕微孢子虫遗传分化比较明显.研究表明家蚕微孢子虫种内存在遗传多样性.
- 申子刚潘国庆许金山李田刘含登周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫遗传多态性核糖体小亚基
- 新型碱性低分子量β-葡萄糖苷酶基因的分离与酶学性质研究被引量：4
- 2012年
- 目的:获得新型β-葡萄糖苷酶编码基因,并对其表达产物进行酶学性质研究。方法:采用宏基因组学方法提取兔盲肠内微生物总DNA,构建DNA文库,通过筛选培养基获得产β-葡萄糖苷酶的克隆,测序获得其插入基因序列,氨基酸多重序列比对分析其序列特征,并用DNS显色法测定表达产物在不同条件下的酶活力。结果:在文库中获得一个基因片段nglu07,能编码一个低分子量的β-葡萄糖苷酶。nglu07基因片段长180bp,编码60个氨基酸残基。与已提交的糖苷水解酶Ⅰ家族成员进行氨基酸多重序列比对表明nglu07具有预测的活性位点Glu4与底物结合位点Tyr47,其最适反应温度为50℃,最适pH为10.0,粗酶活为8.12U/mL。结论:成功获得一新型低分子量的碱性β-葡萄糖苷酶编码基因,其蛋白温度稳定性高,在pH4.0～11.0的环境中均能保持较高的酶活力,具有作为食品工业用酶以及碱性酶的潜力,尤其在食品饮料加工、棉织品生物整理、洗涤及废纸脱墨等工业方面具有一定的应用价值。
- 马振刚唐婧马淑华张时恒贾俊杰李田周泽扬
- 关键词：宏基因组低分子量酶学性质
- 家蚕淀粉酶基因(Bmamy2)的分子克隆及表达特征和序列分析被引量：3
- 2008年
- 淀粉酶在生物体内的碳水化合物代谢中起重要作用。根据预测的基因序列设计引物,克隆了一个家蚕淀粉酶基因(Bmamy2),获得完整的编码区序列(全长1 752 bp,编码583个aa)。用推导的氨基酸序列与其它物种的淀粉酶基因作相似性比较和系统发育分析,发现所克隆的Bmamy2基因是一个起源很早的拷贝,在细菌、果蝇、非洲蟾蜍、人和鸡等多种生物中存在与之同源的基因。该基因编码蛋白的功能结构域预测有2个起催化作用的关键氨基酸发生突变,推测该基因可能失去了催化水解碳水化合物的功能。RT-PCR和基因芯片检测结果表明,该基因在家蚕5龄第3天幼虫的中肠和脂肪体中表达,且在中肠中的表达丰度较高。
- 杜周和董占鹏刘俊凤刘彬斌鲁成
- 关键词：家蚕淀粉酶基因克隆
