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沉默驱动蛋白KIF4A的表达对卵巢癌细胞SKOV3迁移的影响被引量：5: 2010年; 目的研究沉默KIF4A基因对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响。方法检索针对KIF4A基因的小干扰RNA(siRNA),构建shRNA表达质粒,转染人卵巢癌细胞SKOV3,通过G418筛选建立稳定低表达KIF4A的SKOV3细胞株。采用蛋白质免疫印记(Western blot)法检测shRNA对KIF4A蛋白分子的敲除效率。并通过细胞迁移实验评价低表达KIF4A对SKOV3细胞迁移能力的影响。结果成功筛选出稳定低表达KIF4A的细胞株,选择干扰效率较高的细胞株进行实验。Transwell细胞迁移实验显示,低表达KIF4A的细胞株的迁移率较阴性对照组增长近3倍(P<0.05)。结论 KIF4A低表达,可增强人卵巢癌细胞SKOV3的迁移能力。; 高杰王东秋田明忠朱长军; 关键词：驱动蛋白迁移

糖核酸内切酶Ⅲ制备的小干扰RNA(esiRNA)文库对乙肝病毒感染的基因治疗被引量：1: 2010年; 目的建立HBV esiRNA文库并研究该文库对HepG2.215细胞内HBV表面抗原(HBsAg)表达的抑制效应。方法制备并纯化大肠杆菌核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白(GST-RNaseⅢ);设计并制备HBV基因组序列1～540核苷酸(HBV-1)的双向转录模板(T7-HBV-1);体外转录该模板获得双链RNA(dsRNA),即T7-HBV-1 dsR-NA;用GST-RNaseⅢ酶切T7-HBV-1 dsRNA制备HBV小干扰RNA文库(esiRNA library);应用50、100和150 nmol/L纯化的esiRNA文库转染携带HBV病毒的HepG2.215细胞并应用实时定量PCR及ELISA检测HBsAg的转录和蛋白翻译表达水平。结果成功制备并纯化有活性的GST-RNaseⅢ;用该酶将体外制备的dsRNA酶切并纯化得到esiRNA文库;应用该文库成功抑制了HepG2.215细胞内的HBV HBsAg的表达,并且其抑制作用随esiRNA浓度升高而增强。结论用生物学方法制备的HBV esiRNA文库可以成功抑制HBV HBsAg在细胞内的表达,为预防治疗HBV感染开辟了新的思路。; 田明忠高杰王东秋朱长军; 关键词：文库

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