广东省科技计划工业攻关项目(2012A020100001)
- 作品数：24 被引量：97H指数：7
- 相关作者：曹伟胜廖明郝建勇冯敏林瑞庆更多>>
- 相关机构：华南农业大学生物技术有限公司佛山科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目公益性行业(农业)科研专项国家肉鸡产业技术体系建设专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 5株堆型艾美耳球虫顶质体rpoB基因的扩增及序列分析被引量：2
- 2013年
- 以5株堆型艾美耳球虫为研究对象,对其顶质体rpoB基因的部分序列进行了PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上发表的柔嫩艾美耳球虫及其他顶复门寄生虫相关序列进行比较,研究顶质体的遗传变异情况。结果表明,从堆型艾美耳球虫不同来源虫株均获得了469bp的目的片段,应用DNAStar软件进行序列对比发现,5株堆型艾美耳球虫的顶质体rpoB序列完全一致,与柔嫩艾美耳球虫相应序列的相似性为92.75%,而与刚地弓形虫和疟原虫的相似性分别为67.23%和64.62%。首次报道了堆型艾美耳球虫rpoB序列,显示rpoB基因序列保守,不同来源堆型艾美耳球虫虫株的序列没有差异,为进一步研究艾美耳球虫的群体遗传学奠定了基础。
- 刘国昌林瑞庆严浩胡钱江刘丽丹翁亚彪
- 关键词：堆型艾美耳球虫RPOB基因
- Ⅱ群禽腺病毒pⅢa基因的原核表达及抗原性分析
- 2013年
- 为了研究Ⅱ型禽腺病毒pⅢa基因的抗原性,试验根据Ⅱ型禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)VAS株的全基因序列(GenBank序列号为AY849321.1)设计了1对引物,采用PCR扩增出pⅢa的完整基因,将其连接到质粒表达载体pET-32a(+),获得的阳性克隆命名为pET-32a-pⅢa,再将pET-32a-pⅢa转化至E.coil BL21(DE3),经37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导表达5 h,应用SDS-PAGE分析超声裂解后的上清液和沉淀。结果表明:目的蛋白以可溶性蛋白形式存在,蛋白分子质量约为76 ku,目的蛋白具有较好的抗原活性。
- 刘雪美秦建如赵海燕李育豪曹伟胜
- 关键词：原核表达抗原性分析
- 堆型艾美耳球虫早熟系与母株11种抗原基因表达水平的比较分析被引量：1
- 2014年
- 应用荧光定量qRT-PCR技术比较堆型艾美耳球虫早熟系及其母株孢子化卵囊的11种抗原基因的表达情况。提取堆型艾美耳球虫早熟系及其母株孢子化卵囊的总RNA,反转录成cDNA,在GenBank中查找堆型艾美耳球虫11种抗原基因并设计相应引物,进行荧光定量qRT-PCR扩增,用熔解曲线、扩增曲线和循环阈值(Ct值)的变化等比较分析堆型艾美耳球虫早熟系及其母株的不同基因的扩增特异性和相对表达量。结果显示,11种抗原基因得到表达;与疫苗母株相比,早熟致弱的疫苗株大部分抗原基因的表达量下降,其中HSP70基因表达量下降明显。结果表明,早熟系毒力的减弱可能与某些抗原基因表达量下降有关。
- 邹尚书梁建英王新秋何媛程田翁亚彪林瑞庆
- 关键词：堆型艾美耳球虫抗原基因荧光定量PCR
- 3个江西地方鸡品种的禽白血病病毒病原学调查被引量：4
- 2015年
- 对来自江西3个地方鸡品种（崇仁麻鸡、余干乌骨鸡、东乡绿壳蛋鸡）进行禽白血病病毒（ALV）病原学调查。将所采集的血浆接种DF-1细胞,经ALV p27抗原ELISA检测,结果显示这3个江西地方鸡品种均有外源性ALV感染,经鉴定得到4株J亚群禽白血病病毒（ALV-J）。基于gp85序列分析表明这4个分离株与ALV-J英国原型株HPRS-103 gp85基因核苷酸序列相似性最高（平均为94.6%）,而与A、B、C、E亚群ALVgp85基因的核苷酸相似性仅在50.6%~54.5%之间。这是江西地方鸡品种分离和鉴定ALV-J的初次报道,对于我国江西省地方鸡品种的禽白血病净化具有参考价值。
- 秦建如冯敏郝建勇谢金防康昭风廖明曹伟胜
- 关键词：地方鸡品种J亚群禽白血病病毒病原学
- 地方鸡种K亚群禽白血病病毒的分离及遗传鉴定
- 引言禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的一种传染性肿瘤病。外源性ALV尤其是J亚群ALV(ALV-J)的流行,已给我国养禽业造成了严重的经济损失。ALV不仅亚群多,而且变异大...
- 郝建勇秦建如邱倩倩廖明曹伟胜
- 蛋清样品用于禽白血病病毒分离的效果评估被引量：10
- 2014年
- 为评估蛋清样品在禽白血病病毒(ALV)分离中的作用,从广东某地方鸡种群采集种蛋1673个,经ALV p27抗原ELISA检测,将阳性蛋清分为5个不同S/P值区间(A≥2.0,1.5≤B<2.0,1.0≤C<1.5,0.5≤D<1.0,0.2≤E<0.5)并设立对照区间(F<0.2),分别同时接种DF-1细胞和CEF细胞进行病毒分离,通过PCR方法对其中20份DF-1细胞培养物p27抗原阳性样品进行亚群鉴定。从送检种蛋蛋清共检出ALVp27阳性样品107份,阳性率为6.4%(107/1673);不同S/P值区间蛋清病毒分离情况分别为:A区间CEF和DF-1细胞病毒分离率均为100%(27/27);B区间为80%(16/20,CEF)和75%(15/20,DF-1细胞);C区间为55.6%(10/18,CEF)和33.3%(6/18,DF-1细胞);D区间为36.4%(8/22,CEF)和9.1%(2/22,DF-1细胞);E区间为5%(1/20,CEF)和0%(0/20,DF-1细胞);对照组F区间为8.3%(1/12,CEF)和0%(0/12,DF-1细胞)。PCR结果显示,20份样品中均有ALV-J感染,其中6份为ALV A&J共感染。结果表明从蛋清样品可以分离出外源性和内源性ALV;从ALVp27抗原ELISA高S/P值的蛋清易分离出外源性ALV;低S/P值的阳性蛋清样品很可能是由内源性ALV引起,这给临床上禽白血病的净化检测造成一定的"误诊";该地方鸡种群不仅存在至少两个亚群外源性ALV,也有内源性ALV。
- 郝建勇徐海娈秦建如邱倩倩廖明曹伟胜
- 关键词：禽白血病蛋清病毒分离
- 兔肠艾美耳球虫实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 为建立一种肠艾美耳球虫定量的检测方法,在肠艾美耳球虫核糖体第二内转录间隔区(ITS2)序列设计一对特异性引物,以10倍倍比稀释的已知卵囊含量的肠艾美耳球虫DNA为模板进行SYBR GreenⅠreal-time PCR的扩增和标准曲线的建立。结果显示,最低可检测1个卵囊含量的样品,与同属的黄艾美耳球虫、中型艾美耳球虫、大型艾美耳球虫均不发生交叉反应,重复性变异系数小于2%。表明建立的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可为快速检测肠艾美耳球虫提供有效的方法。
- 许家园程田胡会朋陈晓珍翁亚彪林瑞庆
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
- 种禽场A亚群禽白血病病原学调查及分离株遗传进化分析被引量：11
- 2014年
- 【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳性样品进行鉴定.【结果和结论】从4个种禽场共检出71份阳性样品,外源性禽白血病病毒分离阳性率为4.6%.其中,仅从C种禽场分离到2株ALV-A,命名为GD13-1和GD13-2,前病毒全基因序列分别为7 721和7 715 bp,且GD13-2与J亚群禽白血病病毒混合感染.与国内外其他ALV-A的LTR、gp85核苷酸序列进行分析比对,发现该研究分离的2株ALV-A与国内A亚群分离株SDAU09E2相似度最高,其中与LTR相似性分别为96.9%、97.2%,与gp85相似性分别为98.4%、98.7%;与广东地区5年前ALV-A分离株GD08的LTR核苷酸序列相似性分别为88.9%、89.5%,与gp85相似性分别为98.5%、98.8%.调查结果表明,广东地区部分种禽场内仍然存在ALV-A感染,但ALV-A已经不是流行毒株,且变异程度不大.
- 冯敏谭利强代曼曼郝建勇秦建如黄小容廖明曹伟胜
- 关键词：种禽场
- 近期禽流感流行情况分析与防控建议被引量：3
- 2014年
- 1 当前禽流感疫情状况分析
1．1 H5N1亚型高致病性禽流感的流行特点
1．1．1 H5亚型禽流感的威胁仍然很大，造成的损失比较严重。从发病时间看，虽然冬春发病相对较多，但全年发病的态势仍严峻；从发病品种看，种鸭、肉鸭及白羽肉鸡和蛋鸡发病稍多些，黄羽肉种鸡和黄羽肉鸡相对较少；从发病地区看，北方养殖区家禽发病稍多些，南方养殖区家禽发病相对较少。虽然各地都在执行强制免疫政策，但部分地区仍存在免疫家禽抗体水平参差不齐、自然发病和排毒等现象，发病禽群的临床症状与其不同品种的敏感性、健康状况、抗体水平高低和毒株变异等因素密切相关。
- 廖明焦培荣亓文宝徐成刚贾伟新任涛
- 关键词：禽流感疫情发病时间高致病性禽流感H5亚型禽流感H5N1亚型强制免疫
- J亚群禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检出量为0.165μg/mL。用该法对48份临床血浆样品进行检测,结果与PCR方法的符合率达到85.2%。
- 廖亚琳梁艺瑜王秀珑冯敏谭利强曹伟胜
- 关键词：双抗体夹心ELISA
