中央高校基本科研业务费专项资金(2013FZA7015)
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- 自噬在5-氟尿嘧啶抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长中的作用
- 2014年
- 目的 通过抑制胆囊癌GBC-SD细胞自噬的方法检测自噬在化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）抑制GBC-SD细胞生长过程中的作用,探讨胆囊癌对化疗药物不敏感的可能机制及自噬抑制剂作为胆囊癌辅助治疗药物的价值.方法 通过不同自嗜抑制剂[氯喹（CQ）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）]预处理或沉默自噬相关基因5和7后,对比GBC-SD细胞在5-FU作用下增殖率、活性抑制率、凋亡率及细胞周期各时相变化.采用免疫印迹法检测5-FU处理后GBC-SD细胞中LC3-Ⅱ、p62表达水平.采用透射电镜检测空白处理组,5-FU处理组细胞中自噬小泡数量.通过荧光显微镜观察转染GFP-LC3质粒的GBC-SD细胞中的绿色荧光点.流式细胞仪检测CQ预处理12 h后,5-FU诱导下细胞凋亡率.结果 药物处理或基因沉默方法抑制自噬均能增加5-FU对GBC-SD细胞的毒性作用,导致细胞凋亡增加及G0/G1期阻滞.5-FU对GBC-SD细胞增殖及细胞活性的抑制率与其作用时间及浓度呈正比,其中10 μmol/L浓度下5-FU对GBC-SD细胞的抑制率可达30%左右,对比CQ、3-MA或5-FU单独处理组,分别使用100 μmol/L CQ 或5 mmol/L 3-MA预处理GBC-SD细胞12 h后,5-FU作用下GBC-SD细胞的增殖率显著下降,且该趋势差异有统计学意义,免疫印迹结果显示5-FU处理可增强GBC-SD细胞中LC3-Ⅱ表达水平,下调p62表达水平.透射电镜检测结果显示对比空白处理组,5-FU处理组细胞中自噬小泡数量明显增多.荧光显微镜观察转染GFP-LC3质粒的GBC-SD细胞,发现5-FU处理组中绿色荧光点明显增多.流式细胞仪检测发现,CQ预处理12 h后,5-FU诱导下细胞凋亡率由34.3%上升至46.2%.结论 5-FU处理可诱导GBC-SD细胞发生自噬,通过抑制自噬可增强5-FU对该细胞的化疗效果.
- 汤佳城梁霄马锐刘敬华刘小龙蔡秀军
- 关键词：氯喹自噬胆囊癌5-氟尿嘧啶
