重庆市自然科学基金(CSTC2009BA5083)
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 相关作者：于超杨竹王应雄李文明殷娟更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 基于“Click”反应耦合酶的高灵敏葡萄糖生物传感器的研究被引量：2
- 2012年
- 采用葡萄糖氧化酶(GOD)为模板,利用"Click"反应固定,构建了新型葡萄糖生物传感器。首先,将碳纳米管叠氮化,并将GOD炔基化;在Cu^+的催化作用下,两者发生"Click"反应;在Nafion的作用下固定在玻碳电极表面,制得葡萄糖生物传感器。采用傅里叶红外光谱(FTIR)法对碳纳米管"Click"反应前后的性质进行了表征。采用循环伏安法和计时电流法考察了电极的电化学行为,并对传感器的性能进行了详细研究。结果表明:在优化的实验条件下,此电极对葡萄糖有明显的催化作用,电流与葡萄糖的浓度在6.0×10-7～1.4×10-3 mol/L范围内呈现良好的线性关系,检出限达2.0×10^(-7)mol/L。此传感器具有良好的灵敏度、稳定性和重现性。对血清样品中的葡萄糖进行检测,结果令人满意。
- 李文娟于超王应雄杨竹
- 关键词：生物传感器
- 功能蛋白的O-糖基化和p38磷酸化共同参与调控单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭被引量：1
- 2012年
- 探讨单核细胞在炎症因子刺激下通过功能蛋白O-糖基化和p38 MAPK磷酸化、调控其对血管内皮的粘附和侵袭的分子机制。将IFN-γ与LPS体外共刺激后的THP-1细胞加至单层血管内皮细胞EA.hy926共培养,观察单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭;并通过测量电阻变化来反应血管内皮通透性的改变。采用Western blot方法检测单核细胞THP-1中p38 MAPK磷酸化的变化,O-GLcNAc糖基转移酶(OGT)和O-GLcNAc糖基化蛋白表达量的变化。分析验证p38 MAPK抑制剂对IFN-γ与LPS诱导的单核细胞对血管内皮粘附和迁移的影响,同时检测OGT、O-GLcNAc糖基化蛋白差异表达的影响。结果显示,IFN-γ与LPS可以共作用促进THP-1对血管内皮的粘附和侵袭,降低血管内皮通透性。同时激活p38 MAPK,此过程与OGT及O-GLcNAc糖基化蛋白表达降低相关。采用p38抑制剂预处理,可逆转上述IFN-γ与LPS诱导的生物学变化。综上,在炎症反应中,单核细胞对血管内皮的粘附和侵袭力的变化受功能蛋白糖基化和磷酸化的双向调控。
- 杨火梅于超杨竹
- 关键词：P38THP-1
- 土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性被引量：4
- 2011年
- 目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。
- 刘海忠于超杨竹王应雄陈文娟殷娟李文明刘洪涛
- 关键词：顺铂细胞凋亡周期蛋白卵巢肿瘤
- 栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究被引量：12
- 2010年
- 目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。
- 李青岭于超李春莉吴建勇李文明
- 关键词：栀子苷氧化应激细胞凋亡线粒体途径
- O-糖基转移酶介导的O-糖基化在卵巢癌细胞迁移过程中的作用及其机制研究被引量：1
- 2013年
- 探讨O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)介导的O-GlcNAc糖基化在卵巢癌细胞迁移过程中的作用及其分子机制。采用RNAi基因干扰技术,干扰OGT基因的表达,构建低表达O-GlcNAc糖基化的卵巢癌HO-8910PM细胞模型;采用O-GlcNAc糖苷酶(OGA)抑制剂PUGNAc或Thiamet G诱导,构建高表达O-GlcNAc糖基化的卵巢癌OVCAR3细胞模型;通过qPCR和Western blot法验证细胞模型的有效性;通过体外细胞迁移实验观察O-GlcNAc糖基化对卵巢癌细胞迁移的影响;并通过qPCR法进一步检测不同的细胞模型中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达。结果显示,在HO-8910PM细胞中,干扰OGT基因的表达,可以降低MMP-2和MMP-9的mRNA水平,抑制HO-8910PM细胞的迁移。综上,OGT介导的O-GlcNAc糖基化可以通过调节MMP-2和MMP-9的表达参与调控卵巢癌细胞的迁移。
- 晋凤珍于超杨竹
- 关键词：OGTOVCAR3HO-8910PM基质金属蛋白酶-2
- 功能蛋白O-GlcNAc糖基化修饰调控绒毛膜癌细胞的转移被引量：1
- 2013年
- 为研究氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化修饰调控人绒毛膜癌细胞(JAR)迁移的分子机制,首先采用siRNA和酶特异性抑制剂作用细胞,构建O-GlcNAc修饰总蛋白低表达和高表达的细胞模型;利用Transwell方法及黏附实验比较细胞迁移及与血管内皮细胞黏附能力的变化;并通过免疫共沉淀技术检测重要的功能蛋白β-catenin的O-GlcNAc程度,从而分析蛋白转录翻译后调控对肿瘤细胞迁移影响的分子机制。结果表明,增加JAR细胞中O-GlcNAc修饰水平可促进细胞迁移及与血管内皮细胞的黏附活性,且O-GlcNAc修饰作用的靶蛋白β-catenin的糖基化水平也显著增加。当下调细胞中O-GlcNAc蛋白修饰水平,其迁移及黏附能力随之下降。表明O-GlcNAc修饰参与了绒毛膜癌细胞转移的调控。
- 屈茹楠琚娜娜吴明军赵德璋王应雄杨竹于超
- 关键词：O-GLCNAC绒毛膜癌细胞迁移Β-CATENIN
- 川芎嗪抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV3细胞的迁移作用被引量：7
- 2011年
- 目的:观察外源白介素-8(Interleukin-8,IL-8)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移的影响,及川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对它的干预作用,初步研究其可能机制。方法:TMP处理SKOV3细胞后,MTT法确定药物浓度;细胞划痕实验观察外源IL-8对SKOV3细胞迁移能力的影响,采用Transwell法观察TMP对IL-8诱导SKOV3细胞迁移的干预作用;Western blot分析SKOV3细胞中E-cadherin和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达变化。结果:经IL-8(100 ng/ml)处理后,SKOV3细胞迁移力增加。TMP(50、100μg/ml)具有抑制IL-8诱导的SKOV3细胞迁移作用。IL-8使SKOV3细胞中E-cadherin的表达显著降低(40.2±5.3)%,MMP-9的蛋白表达显著增加(34.6±4.4)%;而TMP可以上调E-cadherin的表达(74.9±6.4)%,同时使MMP-9的蛋白表达显著降低(86.5±5.8)%。结论:川芎嗪可以抑制IL-8诱导的SKOV3细胞迁移作用与细胞中E-cadherin和MMP-9蛋白表达变化有关。
- 殷娟于超杨竹
- 关键词：川芎嗪卵巢癌IL-8细胞迁移
- ST6Gal-I通过上调整合素β1的唾液酸化促进绒毛膜癌细胞的迁移
- 2013年
- 为了研究β-半乳糖α2,6-唾液酸转移酶1(ST6Gal-I)对人绒毛膜癌细胞(JAR)和人绒毛膜外滋养层细胞(HTR-8/SVneo)迁移能力的影响。首先采用Transwell小室的实验方法比较两种细胞的迁移能力,再用PCR和Western blot的方法检测ST6Gal-I mRNA及其蛋白的表达差异,最后通过Transwell检测经siRNA干扰ST6Gal-I的表达后对细胞迁移能力的影响,并通过免疫共沉淀技术检测ST6Gal-I的靶蛋白整合素β1唾液酸化程度的变化。结果表明,JAR细胞的迁移能力强于HTR-8/SVneo细胞;JAR细胞中ST6Gal-I在mRNA及蛋白水平表达均高于HTR-8/SVneo细胞,同时检测到JAR细胞中靶蛋白整合素β1的唾液酸化程度亦高于对照组。用siRNA干扰相对高表达的JAR细胞中ST6Gal-I基因,发现其迁移能力随之下降,且ST6Gal-I的靶蛋白整合素β1的唾液酸化程度也发生降低。表明ST6Gal-I参与了肿瘤细胞的迁移调控。该研究结果对发现新的治疗靶点有重要的启示。
- 朱影于超刘学庆陈雪梅丁裕斌王应雄何俊琳
- 关键词：JAR细胞整合素Β1细胞迁移
