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高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金(200359)

作品数：10 被引量：42H指数：3
相关作者：林旭林建银陈婉南林万松王林更多>>
相关机构：福建医科大学福建省肿瘤医院更多>>
发文基金：高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金福建省高等学校科技创新团队培育计划福建省重大科技项目更多>>
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文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生

主题

  • 8篇乙型
  • 8篇乙型肝炎病毒
  • 8篇肝炎
  • 8篇肝炎病毒
  • 8篇病毒
  • 7篇蛋白
  • 7篇乙型肝炎
  • 4篇异性蛋白
  • 4篇特异
  • 4篇特异性
  • 4篇特异性蛋白
  • 4篇基因
  • 4篇剪接
  • 4篇RNA剪接
  • 3篇乙型肝炎病毒...
  • 2篇细胞
  • 2篇细胞基因
  • 2篇细胞基因表达
  • 2篇聚合酶
  • 2篇基因表达

机构

  • 10篇福建医科大学
  • 1篇福建省肿瘤医...

作者

  • 10篇林旭
  • 8篇林建银
  • 5篇陈婉南
  • 5篇王林
  • 5篇林万松
  • 4篇黄清玲
  • 3篇陈金烟
  • 3篇郭丹华
  • 2篇彭仙娥
  • 2篇郑瑾
  • 1篇赖智双
  • 1篇陆青青
  • 1篇黄连真
  • 1篇郑大利
  • 1篇江荧荧
  • 1篇徐晓
  • 1篇柏世玉
  • 1篇史习舜
  • 1篇郑霄雁
  • 1篇李晖

传媒

  • 4篇中国病原生物...
  • 2篇中华微生物学...
  • 2篇中华传染病杂...
  • 1篇肿瘤防治研究
  • 1篇中华肝脏病杂...

年份

  • 4篇2009
  • 4篇2008
  • 1篇2007
  • 1篇2005
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对病毒自身调控序列的影响被引量：2
2008年
目的研究双剪接型2，2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体特异性蛋白TPds对病毒自身调控序列的影响。方法PCR扩增6种HBV启动子／增强子序列，以Kpn I及Xho I位点克隆于pGL3-basic，分别构建萤火虫荧光素酶重组报告载体pGL3-BCP（含HBV基本核心启动子）、pGL3-CP1601（含增强子Ⅱ的核心启动子）、pGL3-XP（X基因最小启动子）、pGL3-XP1071（含增强子I的X基因启动子）、pGL3-SP1（表面抗原大蛋白基因启动子）、pGL3-SP2（表面抗原中蛋白基因启动子）。以FuGENE6将TPds表达载体pcDNA3.1／HisC-TPds或空白载体pcDNA3.1／HisC分别与6种HBV启动子／增强子报告载体共转染Huh7细胞，转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性，实验重复5次，数据以SPSS11.5软件分析。结果在一定的质量比值范围内，与pcDNA3.1／HisC空白载体对照相比，pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3，CP1601、pGL3-XP1071、pGL3-SP1、pGL3-SP2共转染后，Huh7细胞内萤火虫荧光素酶活性增高，而pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3-BCP或pGL3-XP共转染后，胞内荧光素酶活性无变化。结论TPds蛋白可反式激活HBV启动子SP1、SP2和增强子I、Ⅱ，对基本核心启动子和X基因最小启动子无影响。
陈婉南陈金烟王林林万松林建银林旭
关键词：乙型肝炎病毒RNA剪接反式激活增强子
乙型肝炎病毒458nt-1308nt剪接特异性蛋白抗α-干扰素作用被引量：2
2008年
目的研究乙型肝炎病毒（HBV）458nt-1308nt剪接特异性蛋白TSR′r′（源于HBVDNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为Spacer区，R′为截短的RT区，r′为截短的RNaseH区）抗α-干扰素（IFN-α）作用并分析其功能区域。方法PCR扩增获得HBV458nt-1308t剪接变异体剪接特异性基因TSR′r′及其缺失突变体，并克隆于pcDNA3.1／HisC。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，Western blot检测目的蛋白表达。TSR′r′及其缺失突变体重组载体分别与IFN-α反应报告载体p6-16CAT共转染Huh7肝细胞，转染后48h给予终浓度为100IU／ml的IFN-α2a刺激，作用24h后裂解细胞，检测胞内氯霉素乙酰基转移酶（CAT）含量。所有实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析。结果构建TSR′r′及其缺失突变体重组真核表达载体，Western blot显示各基因片段在Huh7细胞中均表达相应蛋白。06-16CAT共转染结果显示，随着TSR′r′重组表达载体转染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低。此外，转染TP＋Spacer区的缺失突变体可导致Huh7胞内CAT值显著下降，而其他各类TSR′r′缺失突变体共转染后胞内CAT值无变化。结论HBV458nt-1308nt剪接特异性蛋白抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性，其活性与N端的TP及Spacer区有关。
王林黄清玲郭丹华陈婉南林建银林旭
关键词：乙型肝炎病毒RNA剪接Α-干扰素DNA聚合酶
乙型肝炎病毒X蛋白对MMPs及TIMPs的影响
2007年
目的全面分析乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对基质金属蛋白酶(Matrix Metallo-proteinases,MMPs)及组织金属蛋白酶抑制物(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)的影响,探讨其在肝细胞癌的侵袭转移中的可能作用。方法PCR扩增HBVX基因并克隆入真核表达载体pcDNA3.1/HisC,重组载体及空载体分别以Lipofectamine2000转染HepG2细胞并以800μg/mlG418筛选抗性细胞克隆。以Western blot检测抗性细胞HBx表达。抽提细胞总RNA,半定量RT-PCR检测MMPs及TIMPs。收集细胞培养液上清,以明胶酶谱检测MMP2及MMP9活性,反相明胶酶谱检测TIMPs活性。结果构建了HBx重组载体pcDNA3.1-XB。该重组载体及对照空载体转染HepG2细胞后,G418筛选,分别获得抗性细胞克隆HepG2-XB及HepG2-HIS,前者经Western blot证实可表达HBx。半定量RT-PCR显示HBx可促进MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的转录,抑制MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的转录。明胶酶谱检测显示HBx可促进酶原MMP2(Pro-MMP2)及活性MMP9(Active-MMP9)表达,抑制酶原MMP9(Pro-MMP9)表达;反相明胶酶谱显示HBx可促进TIMP1、TIMP4的表达,同时抑制TIMP2及糖基化TIMP3的表达。结论HBx蛋白对MMPs、TIMPs转录表达的影响是多方面的,但这种影响在HBx促进肝癌细胞侵袭转移过程中的确切机制有待进一步阐明。
柏世玉黄清玲李晖王林郑瑾林建银林旭
关键词：乙型肝炎病毒基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制物
乙型肝炎病毒X蛋白基因型特异性功能差异被引量：2
2005年
目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)功能差异。方法B、C基因型乙型肝炎病毒X基因真核表达载体(分别为pcDNA3.1-XB及pcDNA3.1-XC)及空白载体pcDNA3.1/Hygro(-)以脂质体2000分别转染Chang细胞,转染细胞2d后以流式细胞仪检测凋亡率;转染细胞以潮霉素筛选,14d后形成的抗性细胞集落以冷甲醇固定、Gi msa染色并计数;各载体与指示载体pCMVβ共转染细胞,转染2d后裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶的活性。所有数据均以配对t检验进行分析。结果各载体转染Chang细胞后细胞的凋亡率为pcDNA3.1-XC>pcDNA3.1-XB>pcDNA3.1/Hygro(-),形成的抗潮霉素细胞集落数为pcDNA3.1/Hygro(-)>pcDNA3.1-XB>pcDNA3.1-XC,细胞内β-半乳糖苷酶活性为pcDNA3.1-XB+pCMVβ>pcDNA3.1-XC+pCMVβ>pcDNA3.1/Hygro(-)+pCMVβ。结论B基因型HBx反式激活能力高于C基因型HBx,而抗细胞增殖及致细胞凋亡能力都低于C基因型HBx,HBx这些功能差异可能与B、C基因型乙型肝炎病毒致病性差异有关。
林旭徐晓黄清玲郑大利陈婉南林建银
关键词：肝炎病毒乙型集落形成单位测定
非酒精性脂肪性肝病发病影响因素的病例对照研究被引量：13
2009年
目的调查非洒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病的影响因素，为预防NAFLD的发生提供可靠的流行病学依据。方法采用病例对照研究方法，对福建医科大学附属协和医院2007年18月体检确诊的NAFI．D患者385例和同期的体检健康人群825人进行调查。自制调查表收集两组一般情况、生活方式、饮食习惯、疾病既往史及生物化学检查结果，并对过程进行质量控制。两组问均衡检验采用f检验和x^2检验；单因素分析采用x^2检验；采用非条件Logistic逐步回归分析筛选变量，找出NAFLD的影响因素。结果两组在饮洒量（g／周）、是否喝茶、是否吸烟、运动指数、韭餐速度、应酬频率、食用油种类、是否食用海产品、是否有脂肪肝家族史及是否有高血压、血糖增高、血脂异常、ALT增高、AST增高、高尿酸血症、肥胖、高密度脂蛋白降低、低密度脂蛋白增高】8个方面的差异有统计学意义（P值均〈0．05）。非条件Logistic逐步回归分析结果显示，以上18个因素中有12个因素进入模型，其中肥胖（OR=6．35）、高血压（OR=3．82）、血脂异常（OR=2．95）、高密度脂蛋白降低（OR=2．85）、高血糖（OR=2．82）、ALT增高（OR=2．80）、高尿酸血症（ON=2．35）、HBsAg阳性（OR=1．99）、脂肪肝家族史（OR=1．79）及常吃海产品（OR=1．58）是NAFLD的危险凶素，而饮茶（OR=0．72）和经常运动（OR=0．90）则是NAFLD的保护因素。结论影响NAFLD发病的因素有多种，主要是生活方式，与遗传因素也有关。
彭仙娥赖智双陆青青林建银林旭
关键词：脂肪肝病例对照研究
福建省大肠癌发病危险因素的病例对照研究被引量：17
2009年
目的探讨福建省大肠癌发生的危险因素。方法采用1∶1匹配的病例对照研究方法,应用统一制订的调查表进行流行病学调查。共调查286对病例和对照。对资料进行单因素和多因素条件Lo-gistic回归分析。结果大肠癌的危险因素有饮用井水(OR=4.05,95%CI:1.50～10.94)和泉水(OR=7.73,95%CI:2.02～29.54),每天吸烟量(OR=4.57,95%CI:2.19～9.54),油腻饮食(OR=5.35,95%CI:2.21～12.99),肿瘤家族史(OR=6.18,95%CI:3.05～12.51),肠道疾病史(OR=6.78,95%CI:3.53～13.07);保护因素有常吃粗粮(OR=0.31,95%CI:0.17～0.53)。结论福建省大肠癌与吸烟,膳食纤维缺乏,饮用井水、泉水,下消化道疾病和肿瘤家族史密切相关。
彭仙娥江荧荧史习舜郑霄雁肖景榕林旭
关键词：大肠癌病例对照研究
小分子乙型肝炎病毒基因组缺失突变体结构分析被引量：1
2008年
目的 了解小分子HBV基因组缺失突变体的基因结构及特点。方法 采用一步法PCR从慢性乙型肝炎患者血清中扩增全基因组HBVDNA，回收并克隆〈1kb的小分子HBVDNA，测序并以BioEdit及VectorNTI6．0软件分析基因结构特点。结果获得基因长度介于174～986bp之间的64种、共124个小分子HBV缺失突变体DNA，按基因结构特点分为3类，即3种GT-AG剪接变异体、29种“常规”缺失突变体及32种基因组内部含polyA的缺失突变体。所有小分子基因组缺失突变体在HBV各编码区及基因调控区均存在不同程度缺失，其中66％（42／64种）保留与HBV复制（包装）相关的所有顺式调控序列，48％（31／64种）保留X编码区。结论 乙型肝炎患者血清中普遍存在小分子HBV基因组缺失突变体，深入了解这些变异体的结构和功能，有助于进一步探索HBV的致病机制。
郭丹华王林黄清玲林万松陈婉南林旭
关键词：肝炎病毒乙型基因缺失聚合酶链反应
B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化
2009年
目的获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)。方法PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因,以AgeⅠ及BglⅡ位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选多克隆抗性细胞株。扩增细胞以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western blot鉴定表达产物并确定最佳蛋白表达时间和诱导浓度。200 ml大规模培养细胞并诱导表达,一步法及两步法分别纯化B、C基因型HBx蛋白。结果成功构建重组表达载体pMT/BiP-HBxb(含B基因型HBx基因)和pMT/BiP-HBxc(含C基因型HBx基因)。在果蝇S2细胞中,B、C基因型HBx蛋白与6×His融合表达(分别为HBxb-His及HBxc-His),在CuSO4诱导后72 h以及诱导浓度为500μmol/L^1 mmol/L时蛋白表达量最高。在200 ml培养液中,一步法纯化所得HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为1.52和1.37 mg,纯度为85.23%和84.59%;二步法所得的HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为5.38和6.42 mg,纯度分别为95.36%和94.62%。结论在果蝇表达系统中表达并获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白,为进一步探讨结构和功能的关系奠定了基础。
郑瑾林万松林建银林旭
关键词：乙型肝炎病毒基因型纯化果蝇
458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响被引量：3
2009年
目的研究458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白TSR′r′对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制。方法PCR扩增TSR′r′编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC。以FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA;以融合表达多肽表位抗体为一抗,Western blot检测目的蛋白的表达;用Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化,并以半定量RT-PCR进一步验证。结果成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TSR′r′,转染48 h后在Huh7细胞中表达TSR′r′蛋白。TSR′r′导致Huh7细胞载脂蛋白H等27个基因转录上调,其中包括5种代谢相关基因,7种免疫相关基因,7种胶原及胞外基质基因,5种干扰素诱导蛋白基因;TSR′r′还导致Huh7细胞核受体共激活物1基因在内的7种基因转录下降。结论458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白可能多方面影响肝细胞功能,具有重要的致病意义。
黄连真王林陈金烟林万松林建银林旭
关键词：RNA剪接
2.2kb乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响被引量：6
2008年
目的研究单剪接及双剪接型2.2 kb乙型肝炎病毒基因编码剪接特异性蛋白(分别为TPss及TPds)对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制。方法PCR扩增TPss及TPds编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC。采用FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA。以Westernblot检测目的蛋白的表达,通过Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化并以半定量RT-PCR进一步验证。结果成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TPss及pcDNA3.1/HisC-TPds,在Huh7细胞中能分别表达TPss(单剪接)及TPds(双剪接)蛋白。TPss蛋白导致Huh7细胞DGKβ(diacyl-glycerol kinase beta)等4个基因转录上调,ZNF652(zinc finger protein 652)等5个基因转录下降;TPds蛋白导致细胞MTSS1(Metastasis suppressor 1)等3个基因转录上调,WARS2基因(Tryptophanyl tRNA synthetase 2)转录下降。结论2.2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接体编码剪接特异性蛋白可能影响肝细胞骨架的重塑、细胞内物质代谢等方面,与肝细胞的增生、迁移及代谢异常密切相关。
陈婉南郭丹华陈金烟林万松林建银林旭
关键词：RNA剪接
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