湖南省卫生厅科研基金(B2010-100)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- siRNA介导的Bcl-2表达下调对肝癌细胞Hep3B的影响及对氨甲蝶呤化疗敏感性的影响
- 2012年
- 目的构建靶向Bcl-2基因的siRNA表达质粒,观察其对肝癌细胞Hep3B的影响及对氨甲蝶呤(MTX)化疗敏感性的影响。方法根据siRNA设计原则,设计并合成Bcl-2的siRNA序列,克隆到pRNAT-U6.1/Neo质粒U6启动子下游构建重组质粒;经序列分析确认质粒构建成功后,将重组质粒转染入人肝癌细胞Hep3B,通过RT-PCR、Western blot分析Bcl-2的表达,细胞生长实验分析其对肝癌细胞生长的影响及对MTX化疗敏感性的影响。结果重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-Bcl-2经过基因序列分析,siRNA片段成功插入,转染此质粒可使Bcl-2的翻译和蛋白表达水平一定程度的降低,并且可抑制Hep3B细胞的生长,增加其对MTX化疗的敏感性。结论成功构建并筛选出靶向Bcl-2基因的siRNA表达载体,它能抑制肝癌细胞Hep3B的生长及增加其对MTX化疗的敏感性,为基因治疗肝癌提供了新策略和实验基础。
- 黄维亮徐丹谢元林
- 关键词：BCL-2SIRNA
- siRNA XIAP表达载体的构建及其生物学作用
- 2012年
- 目的构建靶XIAP的siRNA表达载体，研究其对Hep3B细胞中XIAP表达的影响。方法根据siRNA设计原则，设计并合成三段XIAP的siRNA序列，克隆到pRNAT—U6．1／Neo质粒构建重组质粒；经序列分析确认质粒构建成功后，将重组质粒转染入人肝癌细胞Hep3B，通过RT．PCR、Westernblot和免疫组化分析X!AP的表达。结果重组质粒pRNAT—u6．1／Neo．XIAP经过基因序列分析，siRNA片段成功插入，转染不同siRNAXIAP质粒均可使XIAP的翻译和蛋白表达水平不同程度的降低。结论成功构建并筛选出靶向XIAP基因的siRNA表达载体，为进一步研究XIAP在调控肝癌细胞凋亡方面的作用奠定了基础。
- 黄维亮谢元林陈军苏先狮
- 关键词：小分子干扰
