国家自然科学基金(30870841)
- 作品数：4 被引量：29H指数：2
- 相关作者：李柱一常婷刘煜林宏张巍更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人AChR-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建含人AChRα1亚单位胞外段(Hα1-210)-IgG1Fc融合基因的真核表达载体,表达人AChR-Fc融合蛋白。方法扩增Hα1-210基因,插入含有CMV启动子、小鼠Kappa链先导序列以及人IgG1从铰链区到CH3基因片段的真核表达载体pAN1782中,构建重组表达载体pAN-Hα1-210,并经酶切、测序鉴定;采用脂质体法将重组载体转染CHO-K1细胞,经G418加压筛选、ELISA检测,挑选高表达融合蛋白的阳性转化子扩大培养;表达的AChR-Fc融合蛋白经Protein A亲和层析柱纯化,SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果酶切及测序结果证实Hα1-210基因序列正确,真核表达载体pAN-Hα1-210构建成功;ELISA检测证实AChR-Fc融合蛋白在细胞培养上清中呈分泌表达;SDS-PAGE结果显示该融合蛋白的相对分子质量约为51 000;Western blot结果显示该融合蛋白能被特异性单克隆抗体mAb198所识别。结论成功构建pAN-Hα1-210真核表达载体,并获得具有生物活性的AChR-Fc融合蛋白,为进一步开展融合蛋白靶向B细胞治疗重症肌无力的研究奠定了基础。
- 常婷林宏刘煜李柱一
- 关键词：重症肌无力融合蛋白真核表达
- AChR-Fc融合蛋白靶向BCR选择性识别、清除AChR反应性B细胞被引量：2
- 2012年
- 目的研究乙酰胆碱受体(AChR)-Fc融合蛋白选择性识别、清除AChR反应性B细胞的作用。方法克隆人AChRα1亚单位胞外段基因(Hα1-210),插入含有CMV启动子、小鼠Kappa链先导序列以及人IgG1从铰链区到CH3基因片段的真核表达载体pAN1782中,构建重组表达载体pAN-Hα1-210,表达AChR-Fc融合蛋白;同分泌乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)的杂交瘤细胞TIB175共孵育,采用流式细胞仪观察、分析AChR-Fc融合蛋白同杂交瘤细胞的亲和力以及对杂交瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建真核表达载体pAN-Hα1-210,在CHO-K1细胞中稳定表达具有一定生物活性的AChR-Fc融合蛋白;AChR-Fc融合蛋白对TIB175细胞具有较高的亲和力,可特异性抑制该细胞的增殖并促进其凋亡。结论 AChR-Fc融合蛋白可特异性识别、清除AChR反应性B细胞,为进一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定基础。
- 常婷林宏刘煜李柱一
- 关键词：重症肌无力融合蛋白
- AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体AChR-IgG Fc/pAN1782并在CHOk1细胞中表达AChR-IgG Fc融合蛋白。方法以人烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)α1亚基全序列为模板,以PCR法扩增AChRα1亚基胞外段主要免疫区基因片段Hα1-121,将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞,建立稳定表达AChR-IgG Fc融合蛋白的CHOk1细胞株,以Western blot法检测AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结果 (1)Hα1-121经PCR法扩增后所获428 bp基因片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRα1亚基胞外段基因片段Hα1-121序列完全一致,未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确,载体构建成功。(2)Westernblot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结论成功构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体,且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达,为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步良好基础。
- 高洁常婷王键李柱一
- 关键词：重症肌无力胆碱能IGGFC段融合蛋白
- 重症肌无力发病机制和治疗的回顾与展望被引量：26
- 2012年
- 重症肌无力（MG）是一种由乙酰胆碱受体（AChR）抗体介导、细胞免疫依赖、补体系统参与,主要累及神经肌肉接头突触后膜AChR的自身免疫性疾病.随着免疫学研究的不断进展,对重症肌无力的发病机制、诊断与治疗特点有了更加深入的认识,笔者就此简要概述.
- 李柱一张巍
- 关键词：重症肌无力药物疗法
