福建省科技计划重点项目(2008N0008)
- 作品数：3 被引量：13H指数：1
- 相关作者：陈晓静申艳红卢秉国何玮毅潘东明更多>>
- 相关机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：福建省科技计划重点项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 番木瓜β-Gal基因的克隆分析与植物表达载体构建被引量：1
- 2010年
- 番木瓜果实采后贮藏期间的迅速软化与β-Gal基因的表达密切相关。利用常规PCR结合反向PCR技术,分离了一条4501bp的番木瓜β-Gal基因组序列。其共含有17个内含子,外显子部分与相应的cDNA序列只有1个碱基的差异。生物信息学分析结果表明,该番木瓜β-GAL属于糖苷水解酶超级家族42中家族35的成员,在进化过程中与拟南芥的亲缘关系较近,与鳄梨和北美云杉则较远。同时,它还具有一段定位于胞外的信号肽,再次表明其可能参与了果肉细胞壁的降解和果实软化。进一步分离了β-Gal基因启动子,初步验证了其果实表达特异性。将该启动子替换载体p2301/TTRG上的CaMV 35S启动子,构建出RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体。酶切分析和PCR检测结果表明,载体p2301/BPTTRG已被成功导入农杆菌,可用于后续的遗传转化研究。
- 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国
- 关键词：番木瓜Β-半乳糖苷酶果实特异性启动子
- 双T-DNA共转化获得转基因番木瓜被引量：1
- 2010年
- 番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那霉素筛选质量浓度确定为150mg·L-1。在该质量浓度下,2种方法均获得了转基因再生植株,但转化效率仍较低。正交试验结果表明,浸泡转化法中各处理因素的作用大小为:AS质量浓度>共培养时间=菌液光密度值=侵染时间,最佳共转化组合为:100μmol·L-1AS+菌液光密度值0.2+侵染20min+共培养3d。经PCR和Southern杂交检测,所获得的5株再生植株中有2株为共转化的结果,诱导了其中1株生根并移栽。为进一步选育无选择标记基因的抗软化转基因番木瓜奠定了基础。
- 何玮毅陈晓静叶一江申艳红卢秉国
- 关键词：果实软化
- 番木瓜叶片、叶柄胚性愈伤组织的诱导及其体胚植株的发生被引量：11
- 2008年
- 以"漳红"番木瓜组培苗的叶片和叶柄为外植体,在改良MS+0.5 mg/L KT+1.0mg/L 2,4-D+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+400 mg/L Glu+30 g/L蔗糖的固体培养基上诱导出了胚性愈伤组织。其中,CⅡa型胚性愈伤在一定条件下能够继代增殖,并能向CⅡb型转变,CⅡb型胚性愈伤则容易发生体胚。采用两步生根法,将体胚再生植株先接种于1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 g/L AC+30 g/L蔗糖的固体培养基中暗培养7 d后,转移至1/2 MS+1.0 g/L AC+25μmol/L VB2+30 g/L蔗糖的固体培养基上光照培养,生根效果最好。移栽后,成活率可达45%以上。
- 何玮毅陈晓静申艳红卢秉国潘东明
- 关键词：番木瓜叶片叶柄胚性愈伤组织体胚发生
