上海市自然科学基金(11ZR1425300)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：韩泽广邓庆陈惠卢大儒李坤雨更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院复旦大学华东理工大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肝细胞癌中转录因子E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响被引量：2
- 2014年
- 探讨肝细胞癌(HCC)中非典型性E2F家族成员E2F7在肝癌细胞生长、分化中的作用及可能涉及的分子机制.本研究运用实时荧光定量PCR检测38例原发性肝细胞癌及对应的癌旁组织中E2F7基因mRNA的表达情况;分别通过基因过表达和RNA干扰技术上调或下调E2F7基因表达,并运用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肝癌细胞株MHCC-H中β-catenin及其靶基因cmyc的表达情况;双荧光素酶报告基因系统检测E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响;核浆分离实验检测过表达E2F7基因对β-catenin入核的影响;免疫共沉淀实验检测异位表达E2F7与内源β-catenin的相互作用.结果显示,肝细胞癌组织中E2F7基因的表达量显著高于相应的癌旁组织(P<0.001);转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核.转录因子E2F7可以促进Wnt/β-catenin信号通路的活性.
- 翟杨杨卢大儒韩泽广邓庆
- 关键词：肝细胞癌WNTΒ-CATENIN信号通路
- RNA干扰沉默编码跨膜蛋白35基因表达对肝癌细胞生长及细胞周期的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究跨膜蛋白35(T MEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性。方法利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析;利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况;采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期;通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因。结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P<0.05)。针对TMEM35基因设计合成siR NAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少。流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G_1期增多,S期减少。结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用。
- 李坤雨李牛王群张壮壮韩泽广邓庆
- 关键词：RNA干扰肝癌细胞周期
- 肝细胞性肝癌中E2F8基因受表观遗传学调控的特征
- 2011年
- 目的研究在肝细胞性肝癌中表观遗传性调控E2F8基因表达的特征,包括E2F8基因启动子区域甲基化状态、靶向调控E2F8基因的微小RNA(microRNA)在肝细胞性肝癌中的表达谱。方法分析E2F8基因启动子区域DNA序列的CpG位点分布特征,亚硫酸氢盐修饰DNA后,测序检测肝细胞性肝癌患者的癌组织与癌旁组织中E2F8基因转录起始点处DNA甲基化修饰状态的差异;利用3种不同方法预测靶向结合E2F8基因mRNA的3'-非翻译区域(3'-UTR)的microRNAs,结合肝细胞性肝癌microRNAs芯片表达数据,初步推测肝细胞性肝癌中异常表达microRNAs调控E2F8基因表达的可能性。结果在E2F8高表达的肝细胞性肝癌病例中,癌组织中E2F8基因转录起始位点附近的DNA甲基化程度显著低于癌旁组织中(P<0.05);采用3种不同的方法独立预测靶向调控E2F8的microRNAs,其中7个microRNAs在3种方法中的靶基因均为E2F8,12个microRNAs在两种方法中的靶基因为E2F8。分析肝细胞性肝癌microRNAs表达芯片数据,发现与正常肝脏相比,miR-23b、miR-340、miR-448、miR-499-3p、miR-520d-5p在肝细胞性肝癌组织中的表达量显著下调。结论肝细胞性肝癌中的异常表观遗传学事件可引起E2F8基因的表达上调。
- 李牛王群韩泽广邓庆
- 关键词：表观遗传学甲基化微小RNA肝细胞性肝癌
- 用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型的建立被引量：6
- 2012年
- 目的建立可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型。方法利用脂质体将荧光素酶表达载体pGL3(LUC/NEO)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721、Huh-7、Hep3B、MHCC-97H、HCC-LM6、PLC/PRF/5中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆。根据体外生物发光情况及细胞的生长特性,从中挑选合适克隆,进行裸鼠皮下接种,建立肝癌移植瘤模型。利用活体成像系统监测肿瘤的生长转移情况,并对肝脏组织进行HE染色分析肿瘤细胞的生长分布特点。结果建立了6株肝癌细胞株的荧光素酶基因稳定表达的亚克隆,并且体外验证了各种细胞株中的荧光素酶活性情况;裸鼠皮下成瘤实验显示了SMMC-7721^(Luc+)、Huh7^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)、MHCC-97H^(Luc+)稳定细胞具有成瘤特性;裸鼠肝脏原位注射肝癌细胞(SMMC-7721^(Luc+)、MHCC-97H^(Luc+)、HCC-LM6^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)),利用活体成像系统能够有效对活体肿瘤生长情况进行监测;裸鼠脾动脉注射肝癌细胞(MHCC-97H^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)),利用活体成像系统能够监测到小鼠肝癌模型的生长状况,之后处死小鼠,对肝脏组织HE染色发现肝癌细胞局部分布于肝脏中。结论本研究成功地构建了可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型,模型稳定可靠、直观、灵敏,为肿瘤生长转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供了重要工具。
- 陈惠李坤雨陈斐严惠明韩泽广邓庆
- 关键词：荧光素酶肝癌移植瘤活体成像
