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超长链多不饱和脂肪酸在棉花中的异源合成被引量：2: 2014年; 从球等鞭金藻、眼虫、高山被孢霉和拟南芥中分别克隆到Δ9链延长酶、Δ8去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ15去饱和酶基因,利用我们的多基因聚合方法,将这4个基因聚合到植物表达载体pCambia2300上,其中每个基因都含有独立的CaMV35S启动子和Tnos终止子。利用农杆菌介导法将该表达载体转入棉花,通过卡纳霉素和PCR筛选获得转基因阳性植株,提取转基因阳性植株叶片总脂肪酸,用气相色谱分析法检测到花生四烯酸(AA,20:4Δ5,8,11,14)和二十碳五烯酸(EPA,20:5Δ5,8,11,14,17)含量分别达1.0%和5.0%。表明通过基因代谢工程在棉花中异源合成EPA是可行的,为进一步在棉籽中生产VLCPUFAs奠定了基础。; 刘江马燕斌孙全喜吴霞李雪滢孙美红李燕娥李新征亓宝秀; 关键词：去饱和酶转基因 EPA 棉花

RNA干涉技术与棉花高油育种被引量：9: 2011年; 棉子脂肪酸既是重要的食用油,又是重要的工业原料。但是关于棉子遗传改良的研究报道甚少。研究表明,PEPcase和ACCase的相对活性决定种子的蛋白质与油脂的含量,应用RNAi技术抑制PEPcase催化活性,可以提高脂肪酸总量。本文概述了棉花油分与RNAi技术的研究现状,并阐述了应用RNAi技术改良棉花高油分育种的技术路线。; 王彦霞刘正杰马峙英李召虎华金平; 关键词：棉花 RNAI 含油量

棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建被引量：2: 2011年; 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。; 赵立群李仁李蔚谭小力杨佑明华金平郭仰东; 关键词：高油酸

陆地棉异质型ACCase基因的种子特异表达载体构建与遗传转化被引量：8: 2011年; 异质型ACCase催化乙酰CoA形成丙二酰辅酶A是植物脂肪酸合成途径中的第一个关键的步骤,也是限速步骤;植物体内过量表达ACCase能够增加脂肪酸合成的底物,有可能导致植株种子含油量的增加。本实验采用GUS基因瞬时表达检测棉花愈伤组织中种子特异性表达启动子AGP的活性;利用RT-PCR扩增,克隆了陆地棉异质型ACCase四个亚基编码基因(BCCP1,BC1,CTa2和CTb);利用基因融合等方法,分别构建种子特异表达的过量表达载体p2301MαBCCP1、p2301MαBC1、p2301MαCTa2和p2301MαCACtp-CTb,同时,用这些载体转化拟南芥获得抗性植株,经PCR检测均获得转基因阳性植株,为利用陆地棉异质型ACCase编码基因特异性提高植物种子油份含量等后续研究提供了工作基础。; 刘正杰张园王彦霞李朋波苏莹张曦王玉美华金平; 关键词：ACCASE 陆地棉

球等鞭金藻Δ5去饱和酶基因IgD5在拟南芥中的功能鉴定被引量：1: 2013年; 从球等鞭金藻中克隆到一个Δ5去饱和酶基因,命名为IgD5。系统发育树分析表明,该基因编码产物与来源于巴夫藻Pavlova salina的Δ5去饱和酶亲缘关系最近。此前通过酿酒酵母表达系统,证明IgD5对ω6脂肪酸具有Δ5去饱和酶活性,但并未鉴定IgD5对ω3脂肪酸的催化活性。我们将IgD5转化能够内源合成二高-γ-亚麻酸(DGLA,20:3Δ8,11,14)和二十碳四烯酸(ETA,20:4Δ8,11,14,17)的已携带2个基因的拟南芥(简称TMA2),通过PCR及RT-PCR筛选阳性植株,提取转基因阳性植株叶片总脂肪酸,用气相色谱分析法检测到花生四烯酸(AA,20:4Δ5,8,11,14)和二十碳五烯酸(EPA,20:5Δ5,8,11,14,17),含量分别达7.44%和2.07%,转化效率分别为68%和60%,证明IgD5在转基因植物中具有Δ5去饱和酶的活性,对ω3/ω6脂肪酸没有明显偏好性,并且催化活性远高于其在酵母中的活性。在转IgD5的TMA2中除了AA和EPA,没有检测到其他新脂肪酸,表明IgD5底物专一性很强,是一个可用于植物转基因替代生产鱼油的良好基因。; 刘江孙全喜李新征亓宝秀; 关键词：球等鞭金藻花生四烯酸二十碳五烯酸拟南芥

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