国家自然科学基金(30870989)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院基础医学研究所更多>>
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- 肥胖大鼠模型的建立及其脂代谢相关分子机制研究被引量：16
- 2012年
- 目的建立饮食诱导的肥胖(diet-induced obesity,DIO)大鼠模型并初步探讨其发病的分子机制。方法用脂肪含量30%的高脂饲料饲喂雄性SD大鼠25周,观察大鼠体重、Lee's指数、肝组织病理改变,检测大鼠空腹血糖及空腹血清胰岛素水平,并通过real-time PCR,检测成模大鼠肝脏中乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合酶(FAS)、激素敏感酯酶(HSL)以及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达变化。结果高脂饲料饲喂6周后,DIO组大鼠体重、Lee's指数均显著增加;25周后肝脏脂肪异常蓄积,出现中重度脂肪肝,空腹血糖及胰岛素水平显著升高,出现明显的胰岛素抵抗。肝脏中ACC、FAS和HSL表达显著增加,SREBP-1c表达水平达到正常组的2.56倍,两组间差异极其显著。结论成功建立了DIO大鼠模型,通过检测脂代谢相关基因的表达水平,初步阐释了营养性肥胖的发生与脂代谢变化之间的关系,SREBP-1c,ACC,FAS和HSL参与了DIO的形成,从而初步揭示了脂代谢变化与营养性肥胖的发生的关系。
- 丁婧王辉余诗灏孟雁
- 关键词：脂代谢分子机制SD大鼠
- 肥胖基因FTO的研究进展被引量：5
- 2010年
- 全基因组关联分析使得FrO（fatmassandobesityassociated）基因成为第一个普通人群肥胖候选基因，其在下丘脑核丰富表达，参与能量平衡的控制。FTO基因的不同单核苷酸多态性可影响饮食的摄取，从而影响人的体重，参与肥胖的发生。此外，FTO基因还与2型糖尿病等疾病密切相关，与其他基因发挥协同作用。
- 王辉孟雁
- 关键词：肥胖单核苷酸多态性体重指数
- 固醇调节元件结合蛋白表达降低导致高脂饲养大鼠发生肥胖抵抗的研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究肥胖抵抗大鼠与肥胖大鼠在肝脏脂代谢调控方面的差异。方法①55只4周龄雄性SD大鼠,无特定病原体(specific pathogen free,SPF)饲养环境下随机选取45只大鼠采用高脂饲料饲喂25周,根据体质量筛选得到饮食诱导的肥胖抵抗(diet-induced obesity resistance,DIO-R)大鼠与饮食诱导的肥胖(diet-induced obesity,DIO)大鼠,另10只大鼠采用基础饲料饲喂25周得到正常对照组大鼠。②用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测大鼠肝脏脂代谢调控基因固醇调节元件结合蛋白1c(sterol response element-binding protein1c,SREBP1c),碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate response element binding protein,ChREBP),肝脏X受体α(liver Xreceptorα,LXRα)及脂代谢相关酶类基因脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS),乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC),肝型肉碱棕榈酰转移酶1(liver carnitine pal mitoyl transferase1,L-CPT1),二酰基甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGAT)mRNA的表达。③酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清胰岛素的含量。④苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察肝脏组织。结果饲养25周时,DIO-R组大鼠肝脏基因mRNA表达水平SREBP1c、FAS、ACC的中位数和(四分位数间距)分别为1.08(0.12)、1.44(0.53)、1.68(0.51)与DIO组大鼠3.65(1.19)、2.09(1.05)、2.07(1.01)相比明显降低(P<0.05或<0.01);DIO-R组大鼠的血清胰岛素水平M(QR)为0.56(0.19)μg/L显著低于DIO组大鼠0.85(0.37)(P<0.01);肥胖抵抗大鼠与肥胖大鼠都有脂肪变性。结论 DIO-R大鼠与DIO大鼠之间脂代谢调控区别主要由血浆胰岛素介导的SREBP1c的表达差异造成。
- 王辉丁婧余诗灏孟雁
- 关键词：脂代谢障碍肥胖抵抗基因调节
- 高糖条件下p58促胰岛β细胞凋亡的机制被引量：4
- 2009年
- 2型糖尿病是一种具有明显遗传倾向的复杂的多基因疾病。CDC2L2是中国北方汉族人2型糖尿病的一个易感基因。目前,该基因与2型糖尿病发生发展的关系尚不清楚。本文针对CDC2L2编码的蛋白p58与胰岛β细胞凋亡的关系及其作用的分子机制进行了研究。INS-1(大鼠胰岛β细胞瘤细胞株)高糖浓度(20mmol/L)下培养,分为三个组:空白对照组、空载体对照组(转染载体pcDNA3.0)和实验组(转染质粒pcDNA3.0-HA-p58),Annexin V-FITC/PI双染法检测胰岛β细胞的凋亡状况。结果显示,在高糖培养条件下,p58高表达组INS-1细胞的凋亡率显著高于空白对照组和空载体对照组(P<0.01,P<0.05)。Western blot检测显示,与两对照组相比,p58高表达组的INS-1细胞中Caspase-3和Bax的表达水平明显上升(P<0.05,P<0.01),胞浆内CytoC的含量显著升高(P<0.01),Bcl-2的表达水平显著下降(P<0.05)。以上结果提示,p58在高糖条件下可能通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,使线粒体外膜的通透性增加,从而引起CytoC由线粒体向胞浆的释放,最终活化Caspase-3,引起INS-1细胞凋亡。本实验为进一步研究CDC2L2与胰岛β细胞凋亡的关系及其分子作用机制奠定了重要的实验基础。
- 张洁刘洋杨红旺许海燕孟雁
- 关键词：2型糖尿病Β细胞凋亡
- CDK11^P58调节细胞增殖与凋亡机制被引量：1
- 2009年
- CDK11P58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L1和Cdc2L2基因编码,通过使用内部核糖体进入位点(IRES)翻译而来.它在有丝分裂、凋亡、纺锤体形成、微管稳定、肿瘤发生发展和中枢神经损伤等方面均有重要作用.目前发现,CDK11P58能与HBO1、细胞周期蛋白D3、β-1,4-半乳糖转移酶、雌激素受体、雄激素受体等相互作用.进一步研究CDK11P58的功能将为如肿瘤和代谢疾病的医治带来新的思路.
- 余诗灏孟雁
- 关键词：有丝分裂相互作用蛋白
- 大鼠胰高血糖素样肽-1受体的克隆和原核表达被引量：1
- 2009年
- 目的从大鼠胰岛细胞INS-1中克隆胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的编码序列,构建原核表达载体并在大肠埃希菌中表达。方法培养INS-1细胞,提取细胞总RNA,经RT-PCR技术扩增出GLP-1受体的编码序列。然后将其连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,并进行酶切、测序鉴定。将获得的pGEX-4T-1-GLP-1R转化大肠埃希菌感受态细胞BL21(D3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,最后通过SDS-PAGE对收获的融合蛋白进行鉴定。结果成功获得了GLP-1R编码序列,构建了原核表达载体pGEX-4T-1-GLP-1R并在大肠埃希菌BL21(D3)中表达。表达的融合蛋白主要存在于上清液中,分子量大小约为83kD。结论本实验为获取GLP-1R大量蛋白样品制备抗体提供了可能;GLP-1R的克隆也为建立2型糖尿病的新药筛选平台提供了条件。
- 杨红旺刘洋孟雁
- 关键词：胰高血糖素样肽-1受体克隆原核表达
- microRNAs与糖尿病
- 2010年
- microRNA是来源于内源性发夹型转录本的单链非编码RNA，长度约22nt。miRNA通过与靶mRNA的3’-UTR（非翻译区）碱基互补，对基因进行转录后水平的调控。在VictorAmbros等人的研究中，首次提到小非编码RNA介导的基因表达调控。他们观察了秀丽线虫中lin-14的调控，
- 丁婧孟雁
- 关键词：MICRORNA糖尿病
- 过表达CDK11^(p58)促进人胰腺导管腺癌MIAPaCa-2细胞增殖
- 2010年
- CDK11p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员,由Cdc2L2编码,是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11p58与胰腺癌细胞增殖的关系,我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式,获得了稳定过表达CDK11p58的MIAPaCa-2(人胰腺导管腺癌细胞)单克隆细胞,并通过流式细胞分析、MTT检测及real-time PCR的方法检测了细胞周期、细胞增殖能力及G1/S期相关调控基因的转录水平.结果显示,该单克隆细胞(实验组)与空载体组细胞和空白对照组细胞相比G1期细胞比例明显下降(P<0.01),S期细胞比例明显上升(P<0.01);细胞增殖能力明显提高(P<0.01);cyclin D1、cyclin D3、p21基因mRNA水平较两组对照细胞明显升高(P<0.01).提示过表达的CDK11p58通过上调cyclin D1、cyclin D3和p21基因的mRNA水平促进MIAPaCa-2细胞通过细胞增殖的关键限速点G1/S期,加快细胞增殖.
- 余诗灏王辉丁婧孟雁
- 关键词：胰腺癌MIAPACA-2
