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国家自然科学基金(30200331)

作品数：3 被引量：10H指数：3
相关作者：郭亚军彭玲张瑞萍王皓周倩更多>>
相关机构：第二军医大学郑州铁路职业技术学院更多>>
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文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 3篇T细胞
  • 2篇肿瘤
  • 2篇淋巴
  • 2篇淋巴细胞
  • 2篇免疫
  • 2篇T淋巴细胞
  • 1篇乳腺
  • 1篇乳腺肿
  • 1篇乳腺肿瘤
  • 1篇受体
  • 1篇体外
  • 1篇逆转
  • 1篇逆转录
  • 1篇逆转录病毒
  • 1篇逆转录病毒载...
  • 1篇人T细胞
  • 1篇肿瘤免疫
  • 1篇肿瘤免疫治疗
  • 1篇转录

机构

  • 3篇第二军医大学
  • 2篇郑州铁路职业...

作者

  • 3篇张瑞萍
  • 3篇彭玲
  • 3篇郭亚军
  • 2篇陆斌
  • 2篇云琳
  • 2篇周倩
  • 2篇王皓
  • 1篇金增强
  • 1篇王浩
  • 1篇倪海东

传媒

  • 1篇中华实验外科...
  • 1篇肿瘤
  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 3篇2006
共 3 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用被引量：4
2006年
目的：构建能高效转染人T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统，并与传统的逆转录病毒载体系统做比较。方法：首先在原载体pCMMP-EGFP的基础上，构建携带内部核糖体进入位点（IRES）基因的逆转录病毒载体pCMMP-IRES-GFP。将嵌合T细胞受体基因插入该载体中，与另外两个辅助载体pMD．MLVgag．pol和pHDM．G共同转染包装细胞293T。48h后收培养上清，高速离心病毒。同时将嵌合T细胞受体基因插入传统的逆转录病毒载体pLXSN中，并转染包装细胞PA317，用G418加压筛选出转染的PA317细胞克隆。扩大培养48h后，收细胞培养上清即为病毒液，分别用上述两种方法得到的病，譬液感染NIH333细胞，检测病毒的滴度。取适量病毒液感染川PHA激活后的人原代T细胞，48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光，并用流式细胞术（FCM）检测病毒感染的效率。结果：成功地构建逆转录病毒载体pCMMP—IRES-GFP。将目的基因插入该载体中，与pMD．MLVgag．pol和pHDM．G共同转染包装细胞293T。培养48h后，离心收获浓缩的上清中含有滴度为2．15×10^11VP／L的病毒。以其感染用PHA激活后的人原代T细胞48h后，在荧光显微镜下能观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FCM检测病毒对T细胞的感染效率为50％～60％，并可用FCM进行分选。而用pLXSN载体转染的PA317细胞，包装得到的病毒滴度为6．43×10^9VP／L，病毒感染T细胞的效率仅为5％～10％。结论：构建了能高效转染T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统，为T细胞的基础与临床研究打下了基础。
张瑞萍云琳彭玲陆斌周倩王皓郭亚军
关键词：逆转录病毒载体T细胞内部核糖体进入位点
表达嵌合T细胞受体的T淋巴细胞介导的肿瘤过继性免疫治疗作用研究被引量：3
2006年
目的:构建嵌合T细胞受体(chimeric T cell receptor,chTCR),它包括识别肿瘤相关抗原erbB2的单链抗体、共刺激分子CD28和CD3的信号转导链ζ,将其依次克隆入载体pcDNA3中,电转染入人外周血T淋巴细胞,使嵌合T细胞受体在T细胞表面表达,并验证其在体外和体内的抗肿瘤作用,为肿瘤的过继性免疫治疗提供新思路。方法:抗erbB2的单链抗体(由本所保存),人CD28分子的部分胞外段、跨膜区和胞内段,CD3ζ链的胞内段(分别由RT-PCR的方法获得)依次克隆入载体pcDNA3中,经酶切鉴定正确后,电转染进入人外周血T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测T细胞结合Her2蛋白的功能;细胞杀伤试剂金检测T细胞的抗原特异性杀伤功能;并在裸鼠体内验证其对人的乳腺癌细胞株BT-474移植瘤的杀伤效应。结果:成功构建了抗erbB2嵌合T细胞受体并表达在人的T淋巴细胞表面,体外证明能结合Her2肿瘤抗原,并有抗原特异性的杀伤功能,在BALB／c裸鼠体内对表达erbB2的肿瘤细胞BT～474有显著的抑制肿瘤生长的作用。结论:表达嵌合T细胞受体的T淋巴细胞在体外和体内有抗原特异性的杀伤肿瘤的作用,是一种新的肿瘤过继性的免疫治疗策略。
张瑞萍金增强倪海东彭玲戴建新王皓郭亚军
关键词：乳腺肿瘤
嵌合T细胞受体的构建及其在T淋巴细胞表面的表达和体外抗肿瘤功能的检测被引量：3
2006年
目的利用基因工程技术构建表达嵌合T细胞受体(ch-TCR)分子的逆转录病毒载体(由抗 erbB2的单链抗体和信号传导链CD3ζ组成),感染预先刺激的小鼠T细胞,使得T细胞能以MHC非限制性的方式在体外识别并杀伤肿瘤细胞,为肿瘤的过继性免疫治疗提供新思路。方法将抗erbB2的单链抗体、CD8分子绞链区、CD3ζ链的跨膜区和胞内段依次克隆入逆转录病毒载体pCMMP中,与另外两个辅助载体pHDM．G和pMD．MLVgag．pol共同转染293T细胞,包装获得病毒颗粒,感染NIH3T3细胞检测病毒滴度。取适量病毒液感染预先刺激的小鼠CD3+T细胞,流式细胞仪检测嵌合受体在细胞表面的表达,非放射性的细胞杀伤试剂盒和ELISA检测试剂盒分别检测T细胞的抗原特异性杀伤和细胞因子分泌的功能。结果成功构建抗erbB2嵌合T细胞受体基因的逆转录病毒载体,检测病毒滴度为(2．1±1．1)×108IP／ml。体外感染T淋巴细胞的效率为(45±5)％。体外能杀伤erbB2+的肿瘤细胞SK-BR-3、D2F2／E2,而对erbB2-的肿瘤细胞 MCF-7、D2F2无杀伤功能,并能分泌Th1型细胞因子GM-CSF和IFN-γ。结论表达抗erbB2嵌合T细胞受体的T淋巴细胞体外具有MHC非限制性的、erbB2抗原特异性的杀伤肿瘤细胞和分泌 Th1型细胞因子的功能,为下一步的体内实验打下基础。
张瑞萍云琳陆斌彭玲周倩王浩郭亚军
关键词：T细胞受体T淋巴细胞肿瘤免疫治疗
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