国家自然科学基金(31272533)
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 相关作者：张瑞莉李广兴赵霞于群罗海燕更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所江苏三仪生物工程有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 黄芪多糖对雏鸡黏膜sIgA含量的影响研究被引量：7
- 2014年
- 为研究黄芪多糖(APS)对雏鸡黏膜分泌型Ig A(s Ig A)分泌的影响,将240只7日龄雏鸡随机分为4组:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和C组,其中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡于7日龄以灌服方式分别给予80 mg/m L、40 mg/m L、20 mg/m L APS液各0.2 m L,1次/d,连续5 d,C组雏鸡以相同方式给予相同剂量的生理盐水,于14日龄采取滴口方式进行鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫,在首次给药后1、3、5、7 d以及疫苗免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,每组随机抽取5只雏鸡,收集泪液后,心脏采血处死,快速收集气管液、肠液,采用间接ELISA检测s Ig A含量。结果显示,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡s Ig A含量与C组差异显著(P<0.05或P<0.01),泪液中s Ig A含量Ⅰ组雏鸡相对较高,气管液、肠液中s Ig A含量Ⅲ组雏鸡相对较高,提示APS对雏鸡黏膜s Ig A分泌有显著的促进作用。
- 刘瑞于群李莹赵霞张瑞莉葛铭
- 关键词：黄芪多糖雏鸡黏膜免疫SIGA
- 鸡TLR3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备
- 为研究chTLR3在病毒感染过程中的作用,试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术从雏鸡法氏囊组织中扩增chTLR3胞外区部分基因片段,大小为1317bp,将其克隆于表达载体pET-30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆...
- 王杲强
- 关键词：基因表达多克隆抗体
- 文献传递
- 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用被引量：4
- 2019年
- Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3(chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体;并应用该抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术检测镉中毒雏鸡外周血淋巴细胞与脾内chTLR3的表达变化。结果发现,获得1株阳性杂交瘤细胞,该细胞株单个细胞染色体数量为(94±2)条,细胞上清效价为1∶25,抗体亚类鉴定为IgG3,细胞上清能够与原核表达的chTLR3胞外区蛋白及鸡外周血淋巴细胞中的chTLR3特异性结合。应用此抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术均能够在对照组和染镉组雏鸡外周血淋巴细胞及脾内检测到chTLR3的蛋白表达。结果表明,成功制备了具有天然活性的chTLR3单克隆抗体,该抗体可用于Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术研究chTLR3在鸡组织细胞的分布定位、表达变化,为示踪chTLR3蛋白分布、表达及研究其在鸡发病机制中的作用提供了重要的物质基础。
- 唐泽群罗海燕葛铭郭荣许丹蕾张瑞莉
- 关键词：单克隆抗体WESTERNBLOT间接免疫荧光
- 鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)感染雏鸡免疫器官巨噬细胞的数量变化被引量：1
- 2017年
- 为明确传染性腔上囊病病毒(IBDV)感染雏鸡免疫器官巨噬细胞的数量变化,将50只14日龄SPF雏鸡随机分为感染组和对照组。感染组经点眼、滴鼻途径每只感染传染性腔上囊病病毒,6×10^(6.5)TCID_(50)。对照组经相同途径给予相同剂量PBS。于感染后第1、4、7、21天及35天快速采取胸腺、腔上囊及脾脏并制成冰冻切片,应用间接免疫荧光法检测免疫器官巨噬细胞的数量变化。结果显示,感染组雏鸡胸腺巨噬细胞数量在感染后第1-4天明显升高(P<0.01或P<0.05),腔上囊、脾脏巨噬细胞数量于感染后第1-7天明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),随后降低,于第35天恢复正常(P>0.05)。结果表明,IBDV可导致雏鸡免疫器官内巨噬细胞数量先升高后降低,之后随着机体的自我调节逐渐恢复正常。
- 赵霞张瑞莉栾亚男罗海燕刘瑞葛铭
- 关键词：IBDV雏鸡免疫器官巨噬细胞
- 雏鸡免疫器官中chTLRLR4的表达与定位
- 2016年
- 为研究鸡Toll样受体4（chTLR4）在雏鸡免疫器官（法氏囊、胸腺、脾脏）中的表达与定位，将50只健康海兰白蛋鸡随机分成10组，每组5只，分别于1、7、14、21、28、31、35、42、45、49日龄时随机扑杀一组，取法氏囊、胸腺及脾脏，应用实时荧光定量PCR、Westernblot及间接免疫荧光方法检测雏鸡免疫器官中chTLR4的表达情况。结果：①在各日龄雏鸡法氏囊、胸腺及脾脏内均检测到chTLR4转录及chTLR4蛋白的表达。②法氏囊淋巴滤泡的皮质和髓质内均可见免疫阳性细胞，尤其是在髓质部免疫阳性反应较强；胸腺小叶的皮质、髓质及脾脏的红髓和白髓细胞内均可观察到免疫阳性反应区。③法氏囊中chTLR4蛋白表达在1～4213龄均处于较高水平并存在小幅波动，42～49日龄表达量逐渐下降；各日龄雏鸡胸腺、脾脏中chTLR4蛋白表达趋势相似，1～14日龄表达量逐渐升高，14～35日龄呈波动变化，35～42日龄呈下降趋势。研究表明，在各日龄雏鸡免疫器官中均有chTLR4表达，且存在差异。研究结果为进一步探究chTLR4与雏鸡免疫功能相关性提供了依据。
- 张丽楠葛铭李广兴吕艾刘文静杨桂君张瑞莉
- 关键词：雏鸡免疫器官
- ChMDA5通路参与传染性法氏囊病病毒致雏鸡法氏囊损伤的研究被引量：1
- 2020年
- 传染性法氏囊病病毒(IBDV)为dsRNA病毒,可造成雏鸡法氏囊损伤进而发生免疫抑制;MDA5是能够特异性识别dsRNA病毒的模式识别受体。为研究鸡MDA5(chMDA5)信号通路在IBDV致雏鸡法氏囊病理损伤中的作用,试验选取50只14日龄SPF雏鸡随机分为IBDV感染组和空白对照组,每组25只,IBDV感染组雏鸡通过点眼、滴鼻感染IBDV JIC7株病毒液,0.6 mL·只^-1,空白对照组雏鸡经相同途径给予相同剂量无菌PBS,感染IBDV后第1、4、7、21及35天采集雏鸡法氏囊。采用qRT-PCR方法检测法氏囊中IBDV载量,chMDA5及chMDA5信号通路衔接蛋白(chIPS-1)、转录因子(chIRF3和chNF-κB)、下游产物细胞因子(chIFN-β、chTNF-α、chIL-1β、chIL-6) mRNA水平变化;间接免疫荧光法检测chMDA5蛋白表达变化,传统病理学方法检查法氏囊病理组织学变化。结果发现,雏鸡感染IBDV后,其法氏囊中chMDA5、chIPS-1、chIRF3、chNF-κB、chIFN-β、chTNF-α、chIL-1β、chIL-6的表达量均显著高于对照组,且法氏囊组织发生形态损伤,上述变化趋势与IBDV载量变化基本一致。结果表明,雏鸡法氏囊chMDA5及其信号转导通路可被IBDV激活,参与到IBDV感染雏鸡法氏囊损伤与抗损伤过程中。
- 栾亚男许丹蕾葛铭唐泽群赵霞张瑞莉
- 关键词：IBDV法氏囊雏鸡
- 雏鸡免疫器官中chMDA5的表达与定位被引量：1
- 2016年
- 为研究鸡模式识别受体MDA5（chMDA5）在雏鸡免疫器官中的表达与定位,分别于1、7、14、21、28、31、35、42、45、49日龄时从50只健康海兰白蛋鸡中随机选取5只,采取法氏囊、胸腺及脾,应用实时荧光定量PCR、Western blot及间接免疫荧光技术检测雏鸡免疫器官中chMDA5的表达情况。结果发现,在各日龄雏鸡法氏囊、胸腺及脾内均检测到chMDA5转录;在法氏囊淋巴滤泡的皮质、胸腺小叶的皮质和髓质及脾的白髓和红髓部位均检测到chMDA5阳性细胞;法氏囊和胸腺组织中chMDA5蛋白的表达规律较为一致,即在1～7日龄呈上升趋势并在7日龄达到峰值,随后下调,在14～35日龄时呈波动变化,之后逐渐上调并趋于稳定;脾中chMDA5蛋白表达以14d左右为一个周期变化,随着日龄增大其表达量在总体上趋于上调。结果表明,chMDA5在雏鸡免疫器官中均有表达,且不同日龄之间的表达存在差异。本研究为进一步探究chMDA5与雏鸡免疫功能相关性提供了科学的试验依据。
- 栾亚男葛铭李广兴谢婉秋杨贵君张瑞莉
- 关键词：雏鸡免疫器官
- 海兰白鸡CDCD14基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备
- 2016年
- 通过克隆获得海兰白鸡CD14基因全长,其与红原鸡CD14氨基酸同源性为98.9%,将其插入pET-30a表达载体中,原核表达获得重组蛋白,约为55 ku,纯化后免疫兔制备多克隆抗体。间接ELISA结果显示多克隆抗体效价为25 600,Western-blot及间接免疫荧光试验结果显示多克隆抗体能够与chCD14重组蛋白、BHK-21细胞内chCD14蛋白及鸡外周血液淋巴细胞内chCD14蛋白特异性结合。本试验表明:制备的多克隆抗体具有天然活性,为进一步研究chCD14在雏鸡组织当中的表达分布奠定基础。
- 罗海燕葛铭解颖颖刘文静吕艾李广兴张瑞莉
- 关键词：CD14多克隆抗体
- 鸡TLR3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 为了研究Toll样受体3(chTLR3)在病毒感染过程中的作用,试验采用RT-PCR技术从雏鸡法氏囊组织中扩增chTLR3胞外区部分基因片段(大小为1 317 bp),将其克隆于表达载体pET30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,然后进行IPTG诱导表达;用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹(Western-blot)及体外瞬时转染方法进行检测。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为55.8 ku,主要以包涵体形式存在,试验制备的兔抗chTLR3抗血清效价在1∶32 768以上,具有良好的免疫反应特性。
- 王杲强葛铭于群李广兴张瑞莉
- 关键词：基因表达多克隆抗体
- IBDV感染雏鸡外周血液淋巴细胞chMDA5信号通路因子表达的动态变化被引量：4
- 2015年
- 为研究鸡MDA5(chMDA5)及其信号通路因子在传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染雏鸡体内的表达情况,将40只14日龄SPF雏鸡随机分为感染组和对照组,感染组雏鸡经点眼、滴鼻方式给予IBDV液,对照组雏鸡于相同日龄、相同途径给予相同剂量PBS,于感染后第1、4、7及21天采取雏鸡外周血液并分离淋巴细胞,采用实时荧光定量PCR方法检测雏鸡外周血液淋巴细胞chMDA5信号通路因子mRNA转录及IBDV载量的动态变化。结果表明,IBDV感染雏鸡后第4天病毒载量较感染后第1天明显升高,之后逐渐下降;雏鸡淋巴细胞chMDA5及其信号通路因子表达量在感染后第4天均有明显的上升(P<0.01或P<0.05),感染后第7—21天又出现下调。IBDV能够激活雏鸡体内chMDA5信号通路,并且IBDV复制与chMDA5信号通路因子的表达有着密切关系。
- 王成成葛铭刘超男栾亚男李广兴张瑞莉
- 关键词：IBDV雏鸡
