国家重点基础研究发展计划(G1999075607)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：昌增益周海梦张日清毛启龙闫永彬更多>>
- 相关机构：清华大学北京大学首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 多肽诱导的大肠杆菌DegP(HtrA)蛋白酶的构象变化(英文)
- 2006年
- 具有分子伴侣和蛋白酶双重活性的大肠杆菌DegP蛋白,在热休克和其他应激条件下,对于降解和清除膜间质中变性或损伤的蛋白质起着十分重要的作用.到目前为止,已有几种蛋白质被鉴定出是DegP的天然底物.以前的研究表明,DegP的体内底物之一,PapG菌毛蛋白的羧基端多肽能够激活DegP的蛋白酶活性.然而这种激活的机制及生理意义均未见报道.用合成的PapG菌毛蛋白的羧基端多肽对这种激活的机制进行了初步研究.结果表明,DegP与多肽结合后发生了可检测的构象变化.圆二色性光谱结果显示,结合多肽后DegP的二级结构和三级结构均发生了一定的变化.凝胶排阻层析和动态光散射实验也揭示出DegP分子在一定程度上变小.进一步实验表明,DegP在多肽存在下,其疏水表面和催化位点均有所暴露.荧光各向异性结果显示出DegP在结合多肽后其构象柔性降低.对上述结果的意义进行了探讨.
- 张雪峰郑益新昌增益
- 关键词：构象变化多肽
- Leu122对Hsp16.3组装过程中亚基相互作用的影响被引量：3
- 2002年
- 小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp16 3及其L12 2A突变体蛋白为模型 ,采用高效液相分子筛层析、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和脲梯度凝胶电泳等方法进行研究 .结果表明 ,Hsp16 3在体外能自发地再组装成九聚体 .12 2位的亮氨酸残基对Hsp16 3体外再组装过程中的亚基相互作用有重要的影响 ,并且在Hsp16 3的组装过程中 ,亚基之间的相互识别是高度灵敏和特异的 ,野生型蛋白的亚基和L12 2A突变体蛋白的亚基并不能形成杂合体 。
- 黄素芳古良才毛启龙昌增益
- 关键词：小分子热休克蛋白亚基相互作用HSP16.3
- 分枝杆菌中表达重组蛋白的新载体pMSL的构建
- 2005年
- 为了能够利用耻垢分枝杆菌表达和纯化结核分枝杆菌蛋白,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMSL。该质粒包括来源于牛型分枝杆菌hsp60基因启动子序列,目的蛋白插入的克隆位点和用于目的蛋白表达和定位进行跟踪的绿色荧光蛋白质(EGFP)基因,在目的蛋白插入位点和EGFP基因之间整合了凝血酶识别位点,便于融合蛋白纯化后目的蛋白与EGFP分离,在EGFP基因后面融合有6个组氨酸的密码子。结果表明,pMSL质粒能够在耻垢分枝杆菌中有效地表达绿色荧光蛋白,通过6个组氨酸尾,利用N i-NTA亲和层析柱很好地被纯化。
- 叶子坚刘冲陈效友昌增益
- 关键词：结核分枝杆菌绿色荧光蛋白纯化
- 镁离子对碱性磷酸酶折叠过程的影响被引量：2
- 2003年
- 对小牛肠碱性磷酸酶再折叠的机制及其影响因素进行了探讨。在 2 5℃室温下 ,以 3mol/L盐酸胍对小牛肠碱性磷酸酶 (CIP)进行了 2h的去折叠实验 ,然后再以Tris HCl缓冲液对变性体系进行 2 0倍稀释 ,观察该酶活力恢复的动力学过程并与镁离子参与下的稀释复性过程进行比较。并就不同实验条件下含镁稀释或不含镁稀释 ,获得的最终酶活力、酶活力恢复水平、活力恢复速率常数及数据的相对标准偏差等指标进行了探讨。认为镁是CIP位点的特异性“效应分子” ,它与酶中有关基团的配位 ,稳定了酶活性部位的构象 。
- 宋晓红闫淑莲田晓娟张英侠周海梦
- 关键词：镁离子碱性磷酸酶CIP
- NMR谱图图像分析法研究两态动力学被引量：3
- 2001年
- 核磁共振（NMR）技术是获取生物大分子溶液构象信息的一种重要手段.利用NMR谱图图像分析方法可以快速方便地获得蛋白质在溶液中构象变化的动力学信息.通过采用ω-芋螺毒素SO3（ω-CTXSO3）作为模型蛋白对图像参数与动力学过程之间的关系进行了详尽的探讨,对图像参数的物理学意义进行了理论阐释.结果显示出图像分析方法在利用NMR技术研究广泛存在的两态动力学过程中具有很大的可靠性、简便性和潜在的优势.
- 闫永彬罗雪春周海梦张日清
- 关键词：核磁共振
