国家自然科学基金(31272527)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 绵羊骨骼肌卫星细胞的分离纯化和成肌诱导
- <正>骨骼肌卫星细胞位于骨骼肌基膜和细胞膜之间,是骨骼肌中具有分化增殖潜能的肌源性干细胞,在通常情况下,卫星细胞处于静息状态,激活后的骨骼肌卫星细胞具有增殖分化、融合成肌管的能力。为了在细胞水平探讨绵羊肌肉相关基因的表达...
- 周欣茹辛香路盟李乃峰秦健杜荣
- 文献传递
- 绵羊Musclin基因真核表达载体的构建及其对肌细胞糖代谢和胰岛素作用的影响被引量：1
- 2021年
- 为了研究绵羊Musclin对糖代谢和胰岛素作用的影响,本试验运用生物信息学软件对其结构特征进行预测,并构建绵羊Musclin基因真核表达载体。分4组对绵羊胎儿成肌细胞进行处理:空载体组(pcDNA3.1)、Musclin过表达组(pcDNA3.1-Musclin)、空载体+胰岛素组(pcDNA3.1+Insulin)、Musclin过表达+胰岛素组(pcDNA3.1-Musclin+Insulin)。然后分别在分化48和72 h时收集细胞,检测Musclin对正常或添加胰岛素培养的分化状态绵羊肌细胞糖代谢的影响,并利用荧光定量PCR检测相关基因表达的变化。酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了表达载体pcDNA3.1-Musclin。生物信息学分析表明,绵羊Musclin蛋白含有一个信号肽,并在28氨基酸位点处存在一个酶切位点。亚细胞定位在胞外,属于分泌蛋白。其二级和三级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。细胞试验表明,绵羊Musclin基因过表达明显减少了正常或胰岛素处理的绵羊肌细胞糖原含量并增加了培养液中葡萄糖含量。诱导分化72 h时,过表达Musclin抑制了Musclin过表达组和Musclin过表达+胰岛素组绵羊肌细胞中IRS1、AKT1、AKT2、GLUT1、GLUT4基因mRNA表达,并促进了GSK3βmRNA表达;而诱导分化48 h时,只有GLUT4基因的表达受到抑制。综上所述,绵羊Musclin基因过表达可以影响肌细胞糖代谢并减弱胰岛素的作用,二者相互协调以维持糖代谢稳态。其作用机制涉及到上述相关基因的表达变化,且与绵羊成肌细胞的分化状态有关。
- 郑腾飞辛香韩高链李孟心李俊玲秦健杜荣
- 关键词：绵羊生物信息学真核表达糖代谢胰岛素
- 诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞氧化应激损伤的保护作用被引量：1
- 2017年
- 为了研究诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞增殖和氧化应激的影响,试验将成肌细胞分为6组,即A组为正常培养的C2C12成肌细胞,B和C组细胞分别用25%和50%诱导性多能干细胞条件培养基代替部分原有培养基,A'、B'、C'组分别在A、B、C组的基础上添加了100μmol/L H_2O_2,再通过倒置生物显微镜观察了不同处理组细胞的生长和增殖情况,进一步利用酶标仪检测了细胞的过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明:50%诱导性多能干细胞条件培养基使C2C12细胞数量明显增多,并显著提高了经H_2O_2处理的C2C12细胞的CAT活性。说明诱导性多能干细胞条件培养基可以促进成肌细胞的增殖,并对H_2O_2诱导的成肌细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。
- 秦森张枫惠朱自欣刘家福杜荣
- 关键词：诱导性多能干细胞条件培养基成肌细胞氧化应激
- GC_SBE元件突变对绵羊Myomaker基因5’调控区活性的影响
- 2018年
- 为了研究Smad蛋白结合元件GC_SBE对绵羊Myomaker基因5＇调控区转录调控活性的影响,试验将GC_SBE元件突变为特定酶切位点EcoRⅠ,构建元件突变型真核表达载体MyomakerProGC_SBEM-EGFP,并转染至C2C12成肌细胞中,用荧光定量PCR法检测突变组GC_SBE元件突变对不同状态下EGFP mRNA表达的影响,同时以转染野生型绵羊MyomakerProW-EGFP真核表达载体的细胞作为对照。结果表明：成功构建了绵羊Myomaker ProGC_SBEM-EGFP载体;与对照组比较,在成肌细胞未分化状态下GC_SBE元件突变后导致EGFP mRNA表达下调,在成肌细胞分化状态下GC_SBE元件突变后则导致EGFP mRNA表达上调。说明GC_SBE元件突变对绵羊Myomaker基因5＇调控区的转录调控活性存在影响,且这种影响与细胞的状态有关。
- 朱自欣路盟张枫惠秦健李颖靓杜荣
- 关键词：绵羊
- 孕激素对小鼠Musclin等肌肉相关基因表达的影响
- 为了探讨孕激素对Musclin与Smad3、MEF2肌肉相关基因表达调控的相关性,本试验选用24只雌性小鼠,随机分为四组:对照组、低浓度孕激素组、中浓度孕激素组、高浓度孕激素组。试验一周后检测骨骼肌中Musclin以及S...
- 秦健周英曹海霞樊晓明周欣茹杜荣
- 文献传递
- 绵羊Musclin基因启动子区元件突变载体的构建
- <正>Musclin是由骨骼肌分泌的一种生物活性因子,具有调节肌肉营养代谢和生长发育的功能。因此,深入研究Musclin基因的转录调控机制具有十分重要的意义。为了研究绵羊Musclin基因启动子的转录调控作用,鉴定重要的...
- 李伟真冯旭红李玉红亓帅秦健关宏安晓荣杜荣
- 文献传递
- 绵羊Musclin基因不同长度启动子调控活性的比较及GA和MEF2调控元件的EMSA分析
- <正>Musclin是Nishizawa等(2004)首次发现的一种肌源性细胞因子。在前期研究中,我们克隆了绵羊Musclin基因的启动子序列,并通过生物信息学分析发现了许多潜在的调控元件。为了进一步研究Musclin基...
- 杜荣张红强刘文花李伟真秦健厉建伟关宏安晓荣
- 文献传递
