国家自然科学基金(31272567)
- 作品数：16 被引量：81H指数：4
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- 相关机构：河南农业大学中国科学院河南牧业经济学院更多>>
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- 稳定表达猪IRF7基因的PK-15细胞系建立及其抗病毒效果评价
- 2015年
- 为探讨猪IRF7基因对某些猪源病毒在PK-15细胞系中增值的影响,利用Piggy Bac真核转座子系统将猪源IRF7基因转染入PK-15细胞中,通过嘌呤霉素和绿色荧光进行双重筛选获得阳性转化细胞,再经克隆纯化得到单个阳性细胞克隆株。通过观察细胞荧光和荧光定量PCR鉴定,最终获得了稳定表达IRF7基因的PK-15细胞系。在Poly I:C诱导下,该细胞系能够显著上调IFN-β的表达。初步研究了该细胞系对病毒复制的影响,结果表明过表达IRF-7基因能够显著抑制猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪水泡性口炎病毒(VSV)的复制。本研究为进一步探索猪IRF7基因的功能与作用机制提供有效工具。
- 赵永祥李永涛赵军陈陆常洪涛王川庆
- 关键词：抗病毒
- 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒全基因组克隆与序列分析被引量：2
- 2013年
- 对河南省樱桃谷鸭主产区信阳、新郑、焦作三地628份樱桃谷鸭血清样本应用PCR技术进行鸭乙型肝炎病毒（DHBV）检测,并将三地DHBV阳性样本各挑选1份进行DHBV全基因的扩增、克隆、测序及序列分析。结果显示,信阳、新郑、焦作三地樱桃谷鸭DHBV自然携带率分别为10.5%、8.9%、17.6%;3株DHBV基因组全长分别为3 021、3 027、3 024bp,均含有编码P、S和C蛋白的3个开放阅读框,各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显著的区域位于P蛋白。序列分析显示,3株DHBV河南株核苷酸同源性为89.8%~93.9%,与参考株为89.4%~99.5%。遗传进化分析及P蛋白关键位点分析结果表明,信阳分离株为西方基因型,其余2株为中国基因型。本试验掌握了河南省樱桃谷鸭主产区DHBV自然感染情况,并成功克隆了3株樱桃谷鸭DHBV全基因序列,为该病毒的进一步研究提供了有益信息。
- 沈永恕刘扬科陈陆霍金耀
- 关键词：樱桃谷鸭鸭乙型肝炎病毒全基因序列
- 河南省2014-2015年猪流行性腹泻病毒流行株遗传进化分析被引量：7
- 2017年
- 为监测和探究河南省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行株变异情况,本试验对15株2014-2015年间河南省PEDV流行株S基因进行克隆及全序列测定,与河南省2011-2013年流行株以及国内、外代表毒株进行同源性及遗传变异分析,并对这些毒株S基因的N-糖基化位点及跨膜螺旋区域进行预测。结果表明:本试验得到的15株毒株之间S基因核苷酸同源性为97.0%~99.8%,氨基酸同源性为97.0%~99.5%;与2011-2013年河南流行株核苷酸同源性为97.1%~99.0%,氨基酸同源性为97.2%~98.8%,与其他地区流行毒株核苷酸同源性为92.2%~99.0%,氨基酸同源性为91.9%~99.0%;与经典毒株相比,S1区域N端存在15bp的插入和6bp的缺失,核苷酸同源性为91.7%~93.6%,氨基酸同源性为92.0%~93.6%。系统发育建树结果显示目前的流行毒株与经典毒株处于不同的2个群,流行毒株分处不同亚群。对N-糖基化位点及跨膜螺旋区域的预测得知2014-2015年河南省PEDV与经典株相比出现变异,与2010年暴发时相比存在部分突变,毒株之间存在部分差异,研制出有效的针对流行毒的疫苗依然是目前防控该病的重中之重。
- 韩莎莎张玉娟时庆贺石昂杨利常洪涛赵军王川庆陈陆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒基因变异
- 地方土猪源副猪嗜血杆菌Omp P2基因的分子鉴定及遗传演化分析被引量：1
- 2014年
- 为研究地方土猪源副猪嗜血杆菌（Hps）的分子遗传演化特性,应用PCR方法扩增淮南猪源河南分离株XY0501的Omp P2基因,并进行序列比较和遗传演化分析。结果显示,XY0501的Omp P2基因序列全长为1080bp,编码359 aa;与参考菌株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.4%,与4型、5型和12型参考菌株的核苷酸序列同源性分别为96.9%~97.4%、96.7%~99.4%和97.1%~99.1%;基因进化树显示与血清5型参考菌株FJ685760亲缘关系最近,同源性高达99.4%。研究结果证明,该分离菌株属于血清5型;Hps可感染地方猪种并导致发病,但其来源则有待进一步研究;Omp P2基因在Hps国内优势流行血清型中高度保守,而且这种高保守性并无明显品种差异;不同地域的Hps分离菌株存在一定的遗传差异。
- 常洪涛王新卫刘慧敏赵军陈陆杨霞姚惠霞王川庆
- 关键词：副猪嗜血杆菌OMP分子鉴定遗传演化分析
- 潜伏感染期猪伪狂犬病病毒基因组甲基化预测及图谱测定
- 2015年
- 为研究DNA甲基化在PRV潜伏感染中的作用,本研究首先对PRV全基因组甲基化状态进行预测,再采用亚硫酸氢盐PCR测序的方法检测急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域的甲基化状态。结果显示,急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域均存在散在的甲基化位点,并未发现广泛的甲基化区域,与预测结果一致。结果表明,潜伏感染期间PRV基因组发生甲基化的可能性很小,进而可知DNA甲基化在PRV潜伏感染过程中未起到关键的作用。
- 郑关民陈文定余秋颖陈陆张玉娟杨利李双双常洪涛李永涛赵军王川庆
- 关键词：猪伪狂犬病病毒甲基化
- 猪脑心肌炎与猪圆环病毒病二联灭活疫苗的研制和免疫效力被引量：6
- 2017年
- 研制了猪脑心肌炎(EMCV)与猪圆环病毒(PCV-2)二联灭活疫苗EMCV/PCV-2,并选择小鼠和猪进行疫苗的安全性与免疫效力试验。结果显示:EMCV/PCV-2二联灭活疫苗对小鼠、仔猪、后备母猪和不同妊娠阶段母猪均安全。免疫小鼠时的最佳接种剂量为0.1mL,首免和二免的保护率分别高达80%和100%,免疫效果均高于相应单苗,并可产生各自的高水平抗体;免疫仔猪时的最佳接种剂量为2mL,免疫效果略高于相应单苗和PCV-2商品苗,且平均日增重最高,料肉比最低,攻毒保护试验结果表明可完全有效抵抗EMCV和PCV-2强毒株的攻击。该疫苗为2种疾病的联合免疫提供了可能,达到"一针防两病"的效果,满足了EMCV免疫的潜在需求。
- 刘慧敏常洪涛杨霞贺秀媛陈陆王新卫李永涛赵军王川庆
- 关键词：猪圆环病毒2型脑心肌炎病毒二联灭活疫苗免疫效力
- 家养野猪脑心肌炎病毒的分离、鉴定及全基因组序列分析被引量：1
- 2014年
- 目的：分离家养野猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus ，EMCV），作全基因组序列测定及与相关物种同源性比较。方法用改进的“细胞接种与RT-PCR方法相结合”技术，成功分离到国内首株家养野猪EMCV JZ1202株，并对其全基因组序列进行测定和分子特征分析。结果分离毒的基因组全长为7735 bp ，与国内外不同动物源EMCV参考毒株的核苷酸同源性为81．2％～99．9％，与国内猪源EMCV分离毒的同源性高达99．4％以上。基于EMCV全基因组、ORF和VP1基因序列绘制的系统发育进化树显示，EMCV可分为 G1、G2和G33个群，JZ1202株与其他国内参考毒株同属于G1群。结论结果证实，家养野猪可感染EMCV并引起发病，提醒作野生动物养殖要考虑EMCV的传播；EMCV存在较大的地域差异，在家养野猪和鼠之间可能存在着交叉感染；EMCV在感染家养野猪时可能发生个别氨基酸突变，以适应不同的猪种。
- 常洪涛刘慧敏赵军陈陆杨霞王新卫姚惠霞王川庆
- 关键词：脑心肌炎病毒家养野猪全基因组分子特征分析
- 猪圆环病毒2型合并感染脑心肌炎病毒对仔猪的致病性分析被引量：2
- 2016年
- 旨在研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染仔猪后造成免疫抑制条件下,探索合并感染脑心肌炎病毒(EMCV)对仔猪的生长性能影响和致病性分析。选取16头健康仔猪设计了EMCV攻毒组、PCV-2攻毒组、PCV-2/EMCV联合攻毒组和对照组,通过临床表现、组织病理学检测、生长性能、免疫指标以及排毒情况等多方面评价,对二者合并感染仔猪的影响进行了研究。结果显示,2种病毒单独感染后,均表现出各自的典型临床特征,危害均不严重。但合并感染后死亡率迅速上升,平均日增重显著降低,体重负增长率升高,心肌和脑组织变性、坏死更为严重,血液中淋巴细胞比率始终较低,EMCV中和抗体较长时间维持在低水平。EMCV排毒期可持续至感染后第12天,略长于EMCV单独攻毒组的第9天。研究结果证实,PCV-2先期感染可使EMCV对仔猪表现出更为严重的致病性和致死性,免疫功能降低,并可能使得EMCV在猪体内的复制、排毒能力增强。
- 常洪涛刘慧敏李永涛贺秀媛赵军陈陆王新卫杨霞王川庆
- 关键词：猪圆环病毒2型脑心肌炎病毒仔猪
- 不同动物源脑心肌炎病毒的分离、鉴定和全基因组序列分析被引量：3
- 2014年
- 为研究脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）对不同动物宿主的感染情况。本试验应用改进的＂细胞接种与RT-PCR方法相结合＂技术,成功分离到国内首株地方土猪源EMCV、首株家养野猪源EMCV、1株鼠源EMCV和3株良种猪源EMCV,并进行了全基因组序列测定和分析。结果显示,6株EMCV分离毒的基因组全长从7 724~7 735bp不等,ORF长度均为6 879bp,彼此间核苷酸同源性为99.3%~99.8%,与其他不同动物源EMCV参考毒株的同源性为79.9%~99.9%,与国内猪源、鼠源分离毒的同源性均在99.4%以上;各基因片段中,以VP1和2A变异幅度最大,VP2和3D最为保守;基于EMCV全基因组、ORF和VP1基因序列绘制的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G3 3个群,猪源EMCV主要分布在G1、G2群,鼠源EMCV在G1、G3群中均有分布;6株EMCV分离毒与其他国内参考毒株同属于G1群,但分布并不完全集中。结果表明,地方土猪和家养野猪可感染EMCV并引起发病,提醒在进行地方品种养殖和野生动物家养时要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;鼠在良种猪、家养野猪和地方土猪EMCV之间的交叉感染、传播与流行中起到重要媒介作用;不同EMCV地方流行株间存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在感染不同动物时可能会发生某些突变,以适应新的宿主。
- 常洪涛刘慧敏陈陆杨霞赵军王新卫姚惠霞王川庆
- 关键词：脑心肌炎病毒全基因组分子特征分析
- 猪ISG15基因的克隆表达与多克隆抗体的制备
- 2017年
- 本研究从家猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出家猪ISG 15基因,经测序和序列分析,将ISG 15片段与p ET28a质粒连接,构建重组原核表达载体p ET28a-ISG15;经IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,以获得ISG15蛋白。用纯化的ISG15蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果显示,家猪ISG 15基因CD S区长504 bp,编码167个氨基酸,包括两个泛素样结构域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列为LRLRGG;W estern-blot分析表明重组ISG15蛋白的免疫原性良好;经ELISA测定血清中抗体的效价为1∶102 400。上述研究结果为进一步揭示家猪ISG15蛋白的功能奠定了基础。
- 李双双李新果石昂时庆贺杨利王玉国陈陆李永涛王川庆
- 关键词：蛋白表达多克隆抗体
