教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-0721)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
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- 丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究被引量：10
- 2010年
- 目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA（10~50μmol/L）作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法（Western blotting）检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞（凋亡细胞）逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 刘晓丹刘文达刘培庆王春芝徐妍林东军黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：白血病K562细胞细胞凋亡
- 冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用被引量：3
- 2010年
- 背景：已有研究证明,冬凌草乙素可以通过诱导许多实体肿瘤的细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,目前,冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的作用尚未见资料报道。目的：观察冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其机制。方法：以不同浓度的冬凌草乙素（10~50μmol/L）作用于体外培养的HL-60细胞24,48,72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）表达水平的变化,并对细胞周期调节蛋白P21、P16的表达水平进行检测。结果与结论：冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。流式细胞术检测结果表明细胞主要被阻滞在G0/G1期,50μmol/L的冬凌草乙素作用48h后可以出现典型的亚G1期峰（细胞凋亡峰）。免疫印迹法检测结果显示Mr32000的Caspse-3酶被活化出现Mr20000亚单位片段,同时Caspse-3的底物PARP被裂解出现Mr89000的亚单位片段,免疫印迹法检测结果还显示50μmol/L的冬凌草乙素作用不同时间后,细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平逐渐升高。结果提示冬凌草乙素在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生凋亡,通过上调细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平及激活Caspse-3可能是冬凌草乙素引起HL-60细胞G0/G1阻滞及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 刘晓丹刘文达王春芝徐妍林东军刘培庆黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：冬凌草素HL-60细胞细胞凋亡白血病
- 罗格列酮诱导白血病NB4细胞凋亡的作用及机制探讨被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以不同浓度的RGZ(20～80μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72h,应用RT-PCR法检测PPARγ的表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。应用Western blot检测60μmol/L的RGZ作用不同时间后凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平,同时检测不同浓度药物作用不同时间后Caspase-3活性的变化。结果:40μmol/L以上的RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。RGZ在诱导细胞凋亡的同时,PPARγ mRNA的表达水平逐渐升高,而凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平显著下降。Western blot结果还显示Caspase-3被活化出现20kD亚单位片段。结论:RGZ可以通过PPARγ信号途径抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,下调凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平以及激活Casapse-3可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 刘加军刘文达刘晓丹肖若芝王春芝林东军刘培庆黄河清
- 关键词：白血病过氧化物酶体增殖物激活受体NB4细胞细胞凋亡
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及机制的探讨
- 2010年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂匹格列酮(PGZ)对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的PGZ(20～80μmol/L)作用于体外培养的HL-60细胞24h、48h及72h,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡。应用RT-PCR及免疫印迹法(Westernblot)检测药物作用后PPARγ、Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)表达水平的变化。结果 PGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。FCM检测结果表明,细胞主要被阻滞在G0/G1期,60μmol/L的PGZ作用48h后可以出现典型的亚G1期峰(细胞凋亡峰),PGZ在诱导细胞凋亡的同时,PPARγmRNA及蛋白的表达水平均逐渐升高。RT-PCR表明,Caspase-3酶原及其作用底物PARP表达水平逐渐降低,Westernblot结果显示32kD的Caspase-3酶原被活化出现17kD亚单位片段,同时Caspase-3的底物PARP被裂解出现89kD的亚单位片段。结论 PGZ在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生调亡。通过依赖PPARγ信号途径以及激活Caspase-3可能是PGZ抑制细胞增殖及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。
- 王春芝刘晓丹Prem Raj-Shrestha肖若芝林东军黄仁魏刘加军
- 关键词：白血病过氧化物酶体增殖物激活受体匹格列酮
- 冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究被引量：4
- 2010年
- 目的：探讨冬凌草乙素（ponicidin,PON）对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：以不同浓度的PON（10~50μmol.L-1）作用于体外培养的K562细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,收集药物作用72h后的细胞Annexin V染色并通过流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3及其裂解底物多聚（ADP-核糖）聚合酶PARP的表达水平,并对MAPKs（mitogen-acti-vated protein kinase）信号转导通路相关蛋白（p-P38,p-ERK和p-JNK）以及PI3K（磷脂酰肌醇-3-激酶）/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平进行检测。结果：30μmol.L-1以上的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,不同浓度的药物作用72 h后,随药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐升高,50μmol.L-1的PON作用不同时间后在瑞氏-姬姆萨染色下可见典型的核浓缩及核碎裂等细胞凋亡现象。Western blot检测结果表明,药物作用48 h后caspase-3被活化出现17 kD的亚单位,同时PARP被裂解出现89 kD的亚单位片段。Western blot检测结果进一步显示药物作用48 h后MAPKs信号途径中p-P38,p-ERK和p-JNK蛋白的表达水平无明显变化,而PI3K/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平则随着药物浓度增加而逐渐下降。结论：PON可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K/AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关,而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关;这些研究结果为进一步研究冬凌草素的抗白血病作用提供了有力的实验依据和技术平台。
- 刘晓丹刘文达徐妍刘培庆王春芝林东军黄河清吴传斌肖若芝黄仁魏刘加军
- 关键词：冬凌草乙素白血病K562细胞细胞凋亡
