山东省自然科学基金(Y2008c33)
- 作品数：4 被引量：24H指数：4
- 相关作者：纪新强张文卿武加利刘佳赵乐更多>>
- 相关机构：青岛大学医学院附属医院青岛大学济宁市第一人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人卵巢癌细胞系A2780肿瘤干细胞分离培养与鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:从人卵巢癌细胞系A2780中分离培养卵巢癌干细胞,并对其特性进行鉴定。方法:将A2780细胞消化,离心制成单细胞悬液,悬浮于含有生长因子的无血清培养基(SFM)中获得肿瘤细胞微球体,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD44和CD133的表达;Transwell小室侵袭实验检测肿瘤微球体的体外侵袭能力;CCK-8检测微球体细胞的增殖能力,比较两种细胞的倍增时间;将肿瘤微球体置于含有血清的培养基使其诱导分化,并观察其形态学变化。结果:A2780可在SFM中形成可悬浮生长、稳定传代的肿瘤细胞微球体。与贴壁的肿瘤细胞相比,微球体高表达干细胞标志CD44和CD133(P<0.05),具有更强的体外侵袭力(t=9.354,P<0.05)和增殖能力(t=13.682,P<0.05),及更短的倍增时间(t=3.773,P<0.05),在血清环境下可分化为普通的肿瘤细胞。结论:用含有生长因子的SFM悬浮卵巢癌细胞系A2780可获得卵巢癌肿瘤细胞微球体,此细胞球体中富集有肿瘤干细胞。
- 刘佳纪新强武加利张文卿
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤干细胞培养基无血清
- Nanog基因在卵巢癌和卵巢肿瘤干细胞中的表达及意义被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨胚胎干细胞关键因子Nanog基因mRNA及其蛋白在卵巢癌和卵巢癌肿瘤干细胞中的表达及意义。方法:选取10例正常卵巢上皮组织、10例卵巢良性肿瘤及60例卵巢癌组织,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学PV-6000两步法检测Nanog mRNA和蛋白表达水平;采用无血清悬浮培养法从SKOV-3卵巢癌细胞株中分离培养肿瘤干细胞,流式细胞术鉴定肿瘤干细胞CD117表达,采用RT-PCR和Western Blot方法检测SKOV-3卵巢癌细胞及肿瘤干细胞中NanogmRNA及其蛋白的表达水平。结果:Nanog mRNA在卵巢癌组织中的表达水平均高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);Nanog mRNA在不同分化程度及临床分期的卵巢癌组织中表达水平不同,低分化组高于高分化组(P<0.05);III-IV期高于I-II期(P<0.05);免疫组化结果同RT-PCR。从SKOV-3卵巢癌细胞株中成功分离出肿瘤干细胞,SKOV-3卵巢癌细胞和肿瘤干细胞Nanog mRNA相对含量分别为0.6044±0.0368,0.8736±0.0537,差异具有统计学意义(P<0.05),两种细胞Nanog蛋白相对含量分别为0.6364±0.0169 1.2788±0.0314,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:Nanog基因在卵巢癌组织和SKOV-3细胞系中均高表达,其在组织中的表达强度与临床分期及病理分级关系密切,且在肿瘤干细胞中表达高于一般卵巢癌细胞,其与卵巢癌的发生发展关系密切,可能是卵巢癌干细胞的表面标志物,有望成为新的标志物。
- 赵乐纪新强刘静武加利张文卿
- 关键词：卵巢癌NANOG肿瘤干细胞基因表达
- 卵巢癌肿瘤干细胞对顺铂和盐霉素的药物敏感性被引量：4
- 2012年
- 目的检测卵巢癌干细胞对盐霉素、顺铂的药物敏感性,并比较两者对卵巢癌干细胞的杀伤作用。方法采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离肿瘤干细胞,并采用流式细胞技术检测干细胞标志性因子CD44。人卵巢癌SKOV-3细胞及人卵巢癌干细胞经盐霉素、顺铂作用48h后,采用CCK-8比色法检测细胞存活率,计算半数致死量(IC50)。取第48小时时间点的半数抑制浓度作用于悬浮培养的第5代悬浮细胞48h后,收集药物生存细胞(DSC),采用RT-PCR技术检测DSC的三磷酸腺苷结合转运蛋白B1(ABCB1)基因及三磷酸腺苷结合转运蛋白G2(ABCBG2)基因的转录水平。结果无血清悬浮培养法富集的人卵巢癌微细胞球高表达CD44抗原。盐霉素、顺铂作用第48小时时间点的卵巢癌SKOV-3细胞的IC50分别为(62.50±2.53)和(3.62±0.38)μmol/L,卵巢癌干细胞IC50分别为(48.81±2.83)和(3.80±0.22)μmol/L。卵巢癌干细胞对顺铂耐药指数(RI)为2.12±0.41,明显高于盐霉素RI(0.78±0.08),两者差异有显著意义(t=6.22,P<0.05)。盐霉素组DSC细胞ABCB1和ABCBG2基因表达水平明显低于顺铂组(t=7.49、9.75,P<0.05)。结论人卵巢癌干细胞对盐霉素药物敏感性显著高于顺铂。盐霉素对卵巢癌干细胞的杀伤作用大于顺铂。该差异可能与干细胞高表达ABCB1、ABCBG2基因有关。
- 刘静纪新强赵乐张文卿
- 关键词：盐霉素顺铂卵巢肿瘤肿瘤干细胞
- 人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定被引量：9
- 2010年
- 目的:从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离培养卵巢癌干细胞,并鉴定其生物学性质。方法:卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基(SFM)中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球CD44和CD117的表达,筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力;将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基(SSM)培养促使其分化,并将细胞球和普通SKOV-3细胞分别接种于96孔板,CCK-8法检测增殖能力及其耐药性。结果:卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记,特别是CD44,其侵袭能力显著高于正常SKOV-3细胞(P<0.05);细胞球对顺铂具有更强的耐药性,将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24,48及72h后,细胞球抑制率分别为2.59%,8.43%,12.08%,显著低于分化贴壁细胞(抑制率分别为10.73%,28.13%,39.17%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获取的细胞球,可能含有一小部分具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞,多表达CD44和CD117抗原标记,且CD44更具有特异性。
- 武加利纪新强刘佳张文卿
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤干细胞
