国家自然科学基金(31270217) 作品数:5 被引量:12 H指数:3 相关作者: 陈丽香 周晓辉 刘雪 于辛 李顺 更多>> 相关机构: 复旦大学 复旦大学附属公共卫生临床中心 温州医学院 更多>> 发文基金: 上海市自然科学基金 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
鼠衣原体感染L929细胞致宿主死亡方式的研究 2017年 目的对鼠衣原体感染L929细胞48h后细胞发生死亡的方式(凋亡、自噬、坏死)进行初步探讨。方法以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.85的鼠衣原体感染小鼠成纤维细胞L929,48h后利用荧光显微镜观察DAPI染色情况;应用Propidium Iodide(PI)与AnnexinV染色后流式细胞术分析细胞的凋亡.坏死情况;转染GFP—LC3质粒后荧光显微镜观察LC3表达.Western blot检测LC3蛋白分析细胞自噬情况。结果鼠衣原体感染L929细胞48h后,表现为DAPI染色无凋亡时细胞核碎裂特征,PI与AnnexinV染色后流式分析表明细胞坏死增多,转染GFP.LC3后,与未感染对照相比.鼠衣原体感染组可见荧光弥散状变为点状分布:Westernblot分析可发现鼠衣原体感染的L929细胞LC31蛋白向LC3Ⅱ蛋白转化增强。结论鼠衣原体感染48h后L929细胞主要发生细胞坏死而非细胞凋亡,并伴有细胞自噬现象。 陈丽香 于辛 刘雪 李顺 赵秀云 周晓辉关键词:衣原体 L929细胞 坏死 自噬 以流式细胞术同时检测caspase-1与碘化丙啶或AnnexinV分析小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡 2016年 目的明确以流式细胞术同时检测caspase-1与碘化丙啶或AnnexinV的方法测定小鼠骨髓巨噬细胞炎性死亡的可行性。方法从野生型(wildtype,WT)C57BL/6小鼠和/或C57BL/6背景的easpase.1-/-小鼠分离骨髓细胞,巨噬细胞集落刺激因子(macrophagecolony—stimulatingfactor,M—CSF)刺激分化7d成为骨髓巨噬细胞后,分别进行磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+ATP(三磷酸腺苷)处理。蛋白印迹法(Westernblot)和酶联免疫吸附试验(enzyme—linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测细胞和上清中的IL-1β和caspase-1的切割成熟及分泌情况;乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞上清LDH的释放量;以3种流式细胞染色法:TMRred+caspase-1、PI(propidiumiodide)+easpase-1和AnnexinV+caspase-1检测小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。结果LPS+ATP处理后,NLRP3炎症小体被激活(细胞和上清中有IL.1B和caspase-1的切割成熟和分泌);wT即C57BL/6组细胞上清LDH的释放量多于caspase-1-/-组,表明诱导发生的细胞死亡中存在依赖于easpase-1的炎性死亡方式;流式细胞术同时检测caspase-1与PI或AnnexinV,结果显示LPS+ATP处理组炎性死亡的百分比显著高于PBS组和LPS组,与已报道的流式检测caspase-1+TMRred方法的结果类似。结论流式细胞术同时检测caspase-1与PI或AnnexinV的方法可用于确定小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。与已有的流式检测easpase-1+TMRred方法一样,这两种基于流式细胞术的炎性死亡的检测方法,为小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡提供了更加直观精准的检测手段。 刘雪 陈丽香 李顺 周晓辉关键词:流式细胞术 程序性细胞坏死及其信号通路 被引量:5 2015年 细胞凋亡曾被认为是唯一的程序性细胞死亡方式,而坏死是不受信号调控的。但越来越多的证据表明,某些类型的细胞坏死也可受到信号分子的调控,称为程序性细胞坏死,并发现其在免疫功能调控、炎症、感染性疾病中发挥重要作用。本文对程序性细胞坏死的形态特征和信号转导通路及其与免疫系统功能、炎症反应的关系等方面的研究进展作一综述。 于辛 陈丽香 周晓辉关键词:信号通路 炎症反应 小鼠沙眼衣原体肺感染过程中Treg细胞与Th17反应关系 被引量:3 2013年 【目的】对沙眼衣原体在BALB/c小鼠肺部感染过程中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)与Th17反应关系进行初步探讨。【方法】取6-8周龄的BALB/c小鼠,鼻腔吸入25μL含5×103IFU的沙眼衣原体鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺感染模型。监测感染后不同时期小鼠体重变化;检测肺组织衣原体包涵体形成单位(IFU)及肺组织病理改变;利用流式细胞术检测Cm感染后小鼠体内Treg细胞百分率;ELISA检测肺组织上清液IL-6、TGF-β、IL-17、IL-2细胞因子的的表达;qRT-PCR检测KC(keratinocyte derived chemokine)mRNA和MIP-2(macrophage inflammatory protein-2)mRNA的表达差异。【结果】用5xl03IFU Cm经鼻腔吸入感染后小鼠发生沙眼衣原体肺炎,表现为体重下降、肺组织大量炎症细胞浸润并可检测到衣原体繁殖。Cm感染后第3天,小鼠体内Treg细胞占CD4+T细胞的百分比明显降,随后开始恢复,第7天恢复原来水平,一直持续到衣原体清除。TGF-β、IL-2的表达与Treg细胞动态变化一致。与Th17相关细胞因子IL-6、IL-17和Th17相关趋化因子KC、MIP-2的表达于第3天开始升高,至第7天达到最高水平,随后逐渐减少。【结论】在衣原体感染BALB/c小鼠过程中,Treg可能通过提供TGF-β并在IL-6帮助下促进Th17应答产生。 周晓静 陈丽香 周望展 黄君 刘丹慧 周文江 胡芸文 吕建新 周晓辉关键词:TH17 炎症小体和细胞死亡通路相互关系的研究进展 被引量:4 2016年 当细胞受到微生物感染、外界压力、损伤或化学药物治疗后,可能导致细胞死亡的发生。细胞死亡包括细胞凋亡(Apoptosis)、程序性坏死(Necroptosis)、细胞自噬(Autophagy)以及最近发现的炎性坏死(Pyroptosis)等四种方式。将要死亡或已经死亡的细胞可释放出细胞质、细胞核、内质网和线粒体等生物分子及化学成分。 刘雪 陈丽香 周晓辉关键词:细胞死亡 细胞自噬 CASPASE APOPTOSIS 生物分子 CASPASE 化学药物治疗