澳门特别行政区科学技术发展基金(0182006A)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 相关作者：杨子峰王丹芬秦笙关文达钟南山更多>>
- 相关机构：澳门科技大学广州医学院第一附属医院中山大学更多>>
- 发文基金：澳门特别行政区科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四种腺病毒核酸提取方法的比较被引量：3
- 2009年
- 目的通过蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种腺病毒核酸提取方法的比较,为进一步研究腺病毒的分子生物学特性选择合适的方法提供参考。方法以腺病毒感染的A549细胞为样品,分别以蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法提取核酸,核酸经紫外分光光度计检测A260/A280的比值后,用荧光定量PCR方法检测核酸中腺病毒拷贝数浓度,并记录四种腺病毒核酸提取方法所需的操作时间。结果蛋白酶K法、苯酚法、病毒DNA/RNA提取试剂盒、腺病毒荧光PCR检测试剂盒等四种方法提取核酸的A260/A280的比值依次为1.85532、1.7377、1.81474和1.43934,核酸中腺病毒拷贝数浓度依次为4.9×105copies/mL、3.94×103copies/mL、2.66×106copies/mL和6.15×106copies/mL,提取核酸所需的时间分别为1.5、15、0.5和0.5h。结论四种腺病毒核酸提取方法中,蛋白酶K法简单快捷、成本低廉,适合一般实验室使用;苯酚法适合用于提取细胞培养上清中病毒的核酸;病毒DNA/RNA试剂盒的优点是操作时间短,得到的病毒核酸纯度较高;腺病毒荧光PCR检测试剂盒对病毒的核酸损耗少,操作步骤少,适用于临床标本的腺病毒核酸检测。
- 关文达秦笙王丹芬杨子峰莫自耀
- 关键词：腺病毒核酸
- 甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用被引量：6
- 2009年
- 目的改进测定甲型流感病毒株和临床样本病毒滴度的空斑形成方法。方法在12孔板按照不同感染复数（MOI）感染MDCK细胞，覆盖改良营养物（含0．8％琼脂糖，0．005％DEAE，0．2％BSA，1．25μg／ml TPCK），孵育一定时间后固定染色，计算空斑形成单位。以空斑形成法和血凝滴度同时测定感染1～6d后培养液病毒滴度。结果甲1型流感病毒PR8株可形成直径1～3mm的圆形或类圆形空斑，滴度达1×10^7空斑形成单位；临床标本病毒滴度为5×10^3～1．2×10^7PFU／ml；PR8株最佳扩增感染复数为0．01，高峰期为感染后第4天。结论该方法经改进可应用于标准病毒株及临床样本的病毒定量检测和确定流感病毒最佳感染复数；低MOI感染复数易于获得高滴度流感病毒。
- 杨子峰秦笙陈晓红莫自耀王丹芬关文达钟南山
- 关键词：甲型流感病毒甲1型流感病毒流感病毒株病毒滴度MDCK细胞
- 关于WHO 2005年以来高致病性H5N1禽流感病毒的临床和治疗进展被引量：5
- 2009年
- 自1997年中国香港特别行政区报道首例人感染H5N1禽流感病毒以来，截至2008年9月10日，这场在禽类中史无前例地持续流行、造成了人类感染并具有高病死率的疫情已经波及到15个国家和地区，总发病387例，死亡245例，其中我国疫情30例，病死率超过60％，防控形势十分严峻。本文旨在整理分析2005年以来世界卫生组织和全球对禽流感病毒临床防治研究成果及人感染H5N1禽流感病例报道的最新信息，力求提供一个防治人禽流感方面的较为全面而清晰的介绍。
- 杨子峰王丹芬钟南山陈敬贤
- 关键词：高致病性禽流感H5N1
- 反向斑点杂交检测甲/乙型流感病毒及其基因分型的方法研究
- 2009年
- 目的建立一种特异、灵敏的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法。方法应用生物软件针对甲/乙型流感病毒的膜蛋白(Matrix Protein)基因和血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的保守区域设计引物及探针,通过优化PCR和杂交的反应条件,建立检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法,验证方法的特异性和敏感性,并与直接免疫荧光法分别对相同的临床咽拭子标本进行检测,比较两者的检测结果,以评价该方法的临床应用价值。结果该方法对甲/乙型流感病毒的检测具有特异性,对呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A型、副流感病毒3型、鼻病毒和腺病毒3型均无交叉反应,检测灵敏度为102～103copies/μL。在111例发热门诊病人的咽试子标本中,免疫荧光检测出3例甲型流感病毒、0例乙型流感病毒,阳性率为2.7%;反向斑点杂交检测出3例甲型流感病毒,其中1例H1、2例H3、0例H5、0例H9,4例乙型流感病毒,阳性率为6.3%。结论初步应用结果表明,本研究建立的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法具有特异、灵敏的特点,为该方法的后续临床应用奠定基础。
- 杨子峰李佩琼关文达王丹芬秦笙陈晓红王玉涛何蕴韶
- 关键词：流感病毒反向斑点杂交基因分型
