湖南省科技厅项目(2012FJ6009)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：吴移谋贺庆芝王川曾怀才陈芝喜更多>>
- 相关机构：南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鹦鹉热嗜衣原体CPSIT-0531融合蛋白原核表达载体的构建、表达及免疫原性检测被引量：1
- 2014年
- 目的构建鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)CPSIT-0531原核表达载体,表达并纯化该融合蛋白,检测其免疫原性。方法采用PCR技术从Cps 6BC基因组中扩增CPSIT-0531基因,并构建pET30a-CPSIT-0531原核表达载体,然后转化到宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导His-CPSIT-0531融合蛋白表达,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA分析His-CPSIT-0531蛋白的免疫原性。结果成功构建了pET30a-CPSIT-0531原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;GST-CPSIT-0531免疫小鼠后,ELISA检测免疫小鼠的血清特异性抗体效价为1:640 000。结论成功克隆表达了His-CPSIT-0531,该蛋白具有较好的免疫原性。
- 贺庆芝曾怀才陆春雪王川吴移谋
- 关键词：克隆表达免疫原性
- CPSIT_p7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：构建鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT_p7原核表达载体，表达并纯化CPSIT_p7，检测其免疫原性，观察其在持续性感染过程中的mRNA和蛋白动态表达情况。方法原核表达和纯化His-CPSIT_p7融合蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析His-CPSIT_p7蛋白的免疫原性。采用青霉素与Cps共同处理细胞来制备持续性感染模型， RT-PCR和Western blot检测CPSIT_p7在其持续性感染过程中的表达情况。结果成功构建了pET30a-CPSIT_p7原核表达载体，并表达和纯化较稳定的重组蛋白；该蛋白免疫小鼠40 d后，ELISA 检测血清特异性抗体效价为1∶1000000；RT-PCR和Western blot 结果显示在Cps急性感染与持续性感染过程中CPSIT_p7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增加，感染后mRNA在36 h表达量达到高峰，之后急性感染呈时间依赖性下降，而持续性感染CPSIT_p7 mRNA高表达水平至少持续到60 h。结论成功克隆表达了His-CPSIT_p7，该蛋白具有较好的免疫原性；CPSIT_p7基因和蛋白在Cps持续性感染中呈高表达。
- 贺庆芝曾怀才黎知青王川胡艳群陈芝喜吴移谋
- 关键词：克隆表达免疫原性
- 鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0018融合蛋白原核表达载体的构建、表达及其在Hela细胞中的定位被引量：1
- 2014年
- 目的构建鹦鹉热嗜衣原体(Cps)CPSIT_0018原核表达载体,表达并纯化该融合蛋白,观察其在感染的Hela细胞中的定位。方法采用PCR技术从Cps 6BC基因组中扩增CPSIT_0018基因,并构建pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,然后转化到宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导His-CPSIT_0018融合蛋白表达,进一步用该融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接免疫荧光法分析His-CPSIT_0018蛋白在Hela细胞中的分布特征。结果成功构建了pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;在Cps感染的Hela细胞中CPSIT_0018的分布与主要外膜蛋白MOMP相似,而与包涵体膜蛋白IncA的分布模式不同。结论成功克隆表达了His-CPSIT_0018,该蛋白定位在Cps包涵体内。
- 贺庆芝曾怀才陆春雪胡艳群陈芝喜王川吴移谋
- 关键词：克隆表达细胞定位
