国家自然科学基金(30670189)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：傅永福黄国文韩玉珍郭敏霞肖龙更多>>
- 相关机构：中国农业科学院作物科学研究所中国农业大学湖南科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省重点学科建设项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- SUA41蛋白表达和纯化及其多克隆抗体制备被引量：3
- 2012年
- 旨在制备特异性SUA41多克隆抗体,为深入研究其在植物生长发育中的功能提供有力的分子生物学和生物化学的工具。PCR扩增拟南芥SUA41基因中编码280个氨基酸(401-680位氨基酸)的特异片段,经过GATEWAY的DNA重组技术构建了原核表达载体pDEST17-SUA41,用热休克法转化到E.coliBL21(DE3)star感受态细胞,以异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出6×His-SUA41融合蛋白,用8 mol/L尿素缓冲液溶解包涵体并且经过水逐级去除尿素获得提纯的融合蛋白,并利用Western blotting鉴定确认。融合蛋白经Ni金属螯合柱亲和层析得以纯化,用SDS-PAGE进一步纯化。纯化的融合蛋白经过SDS-PAGE后切胶回收,免疫小白兔,制备多抗血清,然后用Western blotting进行检测,鉴定血清特异性和效价。结果显示,融合蛋白6×His-SUA41免疫兔,产生特异性的SUA41兔抗血清,可以检测到细菌和拟南芥组织中SUA41蛋白。用水提纯变性剂尿素溶解的包涵体蛋白具有可行性。制备的特异性SUA41兔抗血清效价高,能够有效地识别大肠杆菌表达的和拟南芥的SUA41蛋白。在有合适的对照情况下,该兔抗血清可以用于分析植物中SUA41蛋白的功能。
- 黄国文韩玉珍傅永福
- 关键词：融合蛋白蛋白纯化
- 拟南芥SUMO底物的研究进展被引量：1
- 2013年
- SUMO(Small ubiquitin-related modifier)化修饰是普遍存在于真核生物中的一种翻译后修饰,在很多细胞过程中发挥重要作用。文章阐述了拟南芥中SUMO底物的最新研究进展。首先介绍SUMO化修饰过程,SUMO底物的鉴定,包括鉴定方法的进展和鉴定成果。然后依据底物的亚细胞定位、生理功能和参与的生理生化过程对其进行分类和分析,以期更好地理解蛋白质SUMO化修饰方式在植物生长发育中的功能。
- 郭敏霞傅永福
- 关键词：SUMO化修饰翻译后修饰拟南芥
- 拟南芥SUA41基因的表达和功能分析被引量：4
- 2013年
- 植物的开花受多条途径的控制,其中包括光周期途径、春化途径、赤霉素途径、自主途径和温敏途径。SUA41(SUMO substrate in Arabidopsis 41)是本实验室筛选到的、SUMO(small ubiquitin modifier)的潜在底物,并且前人的研究发现它参与自主途径的开花调节,但其对开花时间的调节机制没有详细报道。文章对SUA41基因的表达、sua41突变体对不同环境条件的反应以及SUA41对开花时间调节的可能机制进行初步分析。结果显示,与野生型相比,sua41突变体在常温或低温、长日或者短日条件下均为早花,并且在低温和常温下的开花时间没有太大差别。过表达SUA41能够恢复sua41突变体的早花表型。SUA41基因在拟南芥的幼苗、根、茎、叶和花以及各个植物发育阶段都有表达,说明SUA41基因是一个组成型表达基因。SUA41基因的表达与GA处理无关,长日低温条件能够诱导SUA41基因的表达,且在温敏途径突变体fve和fca中SUA41基因的表达量减少。与野生型比较,sua41突变体中CO基因的mRNA表达量没有明显变化,FT和SOC1基因表达量增加且FT增加幅度更大,FLC的mRNA表达量减少。结果表明SUA41基因虽然在自主途径中起作用,但主要在温敏途径中参与拟南芥开花时间调节。
- 黄国文韩玉珍傅永福
- 拟南芥NUP107-160亚复合物突变体表型分析
- 2016年
- 核孔复合物(NPC)是真核细胞核膜上比较大的蛋白复合物之一,它通过调节核质间的物质运输,参与生物的多种生长发育过程。目前,植物中只有少数NPC组分的功能得到了初步分析。通过对NUP107-160亚复合物中各组分突变体的鉴定,发现nup160、nup96、nup85、nup107和seh1突变体的叶片振动周期延长,主根的伸长受到抑制,其中nup160、nup96和nup107三种突变体在长日照条件下开花时间显著提前。结果表明NUP107-160亚复合物可能参与拟南芥生物节律、根生长和开花时间的调节。
- 肖龙刘文瑄陈福禄张晓玫陈庆山傅永福
- 关键词：核孔蛋白生物钟开花拟南芥
