国家自然科学基金(39870856)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：顾少华徐万祥谢毅陈金中季朝能更多>>
- 相关机构：复旦大学上海市计划生育科学研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人绒毛膜促性腺激素β亚基单一B-细胞表位(β5、β9或β8)融合蛋白的表达和纯化被引量：1
- 2004年
- 作为开发新型实用性人绒毛膜促性腺激素 (hCG)疫苗的一种尝试 ,我们已构建若干组合靶抗原三个线性B_细胞表位和外源强T_细胞表位的基因工程hCG嵌合肽。为了检测用这些嵌合肽免疫的动物血清中是否能产生抗各表位的三种抗体 ,本研究选用能在大肠杆菌中高表达和与生物素亲和性强且特异 (方便通过亲和层析纯化 )的链霉亲和素为载体 ,分别构建了三种含 β_hCG不同单一线性B_细胞表位 (β5 ,β9和 β8)的融合蛋白。在链霉亲和素基因下游多克隆区EcoRⅠ和HindⅢ位点插入各表位编码基因片段 (带TAA终止密码子 )的pTSA_18重组质粒 ,转化BL2 1(DE3)pLysS宿主菌后 ,它们在IPTG诱导下均能以较高水平表达各自目的融合蛋白 ,而且它们的表达产物在Westernblot鉴定中都能被抗各表位特异的多抗或单抗或抗报告表位单抗识别。用改良的制备性PAGE方法可以一步纯化电泳均一性高于 95 %的三个融合蛋白 ,它们的收得率相对 1L培养物约为 5mg。作为化学合成表位肽的替代物 ,β_hCG三个单一B_细胞表位融合蛋白的可获得性将有助于所构建hCG基因工程嵌合肽以及其他hCG疫苗 ,也包括它的DNA疫苗的免疫原性分析。
- 徐万祥何亚萍何远王丽婷孙志达季朝能顾少华陈金中应康谢毅
- 关键词：人绒毛膜促性腺激素免疫印迹纯化
- 两种hCG嵌合肽CP12和CP22的免疫原性研究
- ＜正＞作为早先以靶抗原1或2个B细胞表位（B cell epitope,BCE）为主的化学合成肽,以及后期演化成掺入自身/外源T辅助细胞表位（ThCE）的化学合成嵌合肽（CP）疫苗研究的延伸,近年来以提高合成肽疫苗的有效...
- 徐万祥何亚萍洪爱真廖矛川孙志达季朝能顾少华应康谢毅
- 文献传递
- HCG嵌合肽CP12基因的构建和原核系统表达
- 2002年
- 徐万祥熊艳孙志达廖矛川顾少华应康刘建平谢毅
- 关键词：基因构建
- 多表位hCG嵌合肽(CP1和CP10)抗原的构建及其免疫原性被引量：1
- 2006年
- 本研究设计了CP1和CP10两种嵌合肽免疫原,它们由人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β- hCG)3个线性B细胞表位(BCE)以及包括来自乙肝表面抗原和破伤风类毒素2个广谱性T细胞表位(TCE)的6个TCEs组合而成。编码CP1及其衍生物CP10的人工基因分别重组插入热诱导pBV221载体后,均能在大肠杆菌中以约占细菌总蛋白1％的比例被表达。在蛋白印迹试验中,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上显示约为16．5 kD分子量的CP1和CP10表达蛋白,能被抗各插入表位单克隆或多克隆抗体识别。各表达蛋白可用制备性PAGE方法一步纯化,纯化产物均显示95％以上的电泳均一性,纯化得率可达到每升培养液1-2mg水平。以它们为抗原主动免疫小鼠,都能分别产生识别CP1或CP10和天然β-hCG的抗血清,并都能在它们的抗血清中检测到各插入抗原表位的抗体。hCG CPs的可获得性及其能诱导各表位抗体生成特征,有可能成为研制hCG抗生育和肿瘤治疗性疫苗的新的候选免疫原。
- 徐万祥何亚萍邱德义廖矛川洪爱真季朝能顾少华陈金中谢毅
- 关键词：原核表达免疫应答
