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柔嫩艾美耳球虫表面抗原(EtSAG)基因的分离及鉴定被引量：1: 2010年; 利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR(Real-time PCR)检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。; 马卫娇韩红玉姜连连董辉赵其平朱顺海程军曾艳波黄兵; 关键词：柔嫩艾美耳球虫表面抗原克隆表达抗原性分析

柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达被引量：4: 2011年; 为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583。该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征。利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段。将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD。免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。; 姜连连林矫矫韩红玉董辉赵其平朱顺海马卫娇程军曾艳波黄兵; 关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子裂殖子

柔嫩艾美耳球虫子孢子高表达新基因的克隆、表达及分析被引量：3: 2010年; 为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku。Real-timePCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段。另外,将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7ku大部分以可溶性存在。Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。; 李洋韩红玉董辉赵其平姜连连朱顺海郭涛平宪卿马卫娇曾艳波程军黄兵; 关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子克隆

Apical membrane antigen-1(AMA1)of Eimeria tenella is essential for invasion and development: Apical membrane antigen-1(AMA1) is a micronemal protein of apicomplexan parasites that appears to be essential...; Jiang Lianlian,Lin Jiaojiao,Han Hongyu,Zhao Qiping, Dong Hui,Zhu Shunhai,Huang Bing Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science,Key Laboratory of Animal Parasitology of Ministry of Agriculture,Shanghai,200241,China.; 文献传递

柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析被引量：6: 2012年; 旨在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenellacalcium-dependent protein kinase-3,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达。将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-EtCDPK3。重组质粒通过电击转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。重组酵母细胞在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4 d的部分上清。经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 kD。Western blotting表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合。结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功地进行了表达。; 孔春林韩红玉李洋董辉姜连连李婷赵其平朱顺海黄兵; 关键词：柔嫩艾美耳球虫真核表达毕赤酵母

Identification and partial characterization of a serine protease inhibitor(serpin)of Eimeria tenella: Serine proteinase inhibitors(serpins) are irreversible suicide inhibitors of proteinases that regulate a wide ...; Jiang Lianlian,Lin Jiaojiao,Han Hongyu,Zhao QipingDong Hui,Zhu Shunhai,Huang Bing Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science,Key Laboratory of Animal Parasitology of Ministry of Agriculture,Shanghai,200241,China.; 文献传递

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