国家自然科学基金(30670104)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：军事医学科学院华中农业大学江南大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用蛋白的筛选及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:筛选、鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白,以进一步研究ArgT在福氏2a志贺氏菌致病过程中发挥的作用。方法:将ArgT与GST融合表达,通过体外GST沉降实验和MALDI-TOF MS技术,筛选并鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白。结果:筛选并鉴定到与福氏2a志贺氏菌2457T ArgT相互作用的蛋白OmpR。结论:OmpR与ArgT存在体外相互作用。
- 曹晓玉赵格朱力刘先凯李娜何建勇王恒樑
- 关键词：OMPR
- 炭疽杆菌在家兔盲肠结扎模型内外培养的蛋白表达差异
- 2010年
- 【目的】建立家兔盲肠结扎模型,研究炭疽杆菌在家兔体内外不同培养条件下的蛋白表达差异。【方法】本实验通过进行家兔盲肠结扎模型对炭疽杆菌进行体内外培养,用不同方法提取胞外蛋白、细胞壁蛋白及全菌体蛋白,并经双向电泳分离和质谱鉴定。【结果】送检144个蛋白点,检出124个,其中包括上清蛋白19个,细胞壁蛋白29个,全菌体蛋白76个。【结论】经分析发现,与合成代谢相关的蛋白在体内主要呈下调趋势,包括多种氨基酰-tRNA合成酶、长链脂肪酸CoA连接酶等;在体内表达上调的蛋白则具有多种功能,其中包括分子伴侣DnaK、超氧化物歧化酶SodA、S-层蛋白等。
- 任静晓植懿丹刘先凯朱力冯尔玲王华贵陈福生王恒樑
- 关键词：双向电泳
- 炭疽芽孢杆菌EA1蛋白的融合表达和纯化被引量：2
- 2009年
- 目的:原核表达重组炭疽芽孢杆菌EA1蛋白。方法:用PCR方法从炭疽芽孢杆菌A16R疫苗株染色体中扩增编码EA1蛋白的eag基因序列,经过纯化、酶切后克隆到含有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-2中,构建重组载体pGEX-EA1;将空载体(作为对照)、重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:构建了EA1蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Glutathione Sepharose 4B纯化获得了EA1蛋白;Western印迹表明,此蛋白可与GST标签抗体反应。结论:在原核表达系统中表达并纯化得到EA1融合蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础。
- 高美琴刘先凯冯尔玲朱力陈福生王恒樑
- 关键词：炭疽芽孢杆菌原核表达蛋白纯化
- 炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株构建被引量：4
- 2009年
- 【目的】构建炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株,为研究eag基因的功能奠定了基础。【方法】本研究以我国人用炭疽杆菌活疫苗A16R株中eag基因为目的缺失基因,根据炭疽芽孢杆菌Ames株基因组序列,利用软件设计了扩增上下游同源臂以及抗性基因引物,构建了重组质粒,将该重组质粒电击转入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,利用同源重组原理筛选到炭疽杆菌A16R株eag基因缺失突变株。在分子水平及蛋白质组学方面对基因缺失突变株进行验证。【结果】成功构建了重组质粒,经同源重组后获得eag基因缺失突变株。PCR鉴定表明目的基因已经丢失;SDS PAGE表明野生株与突变株在93 kDa处有差异蛋白条带,经质谱鉴定分析该条带为目的基因所表达的EA1蛋白;双向电泳结果显示突变株与野生株比较明显缺失3个蛋白点,经质谱分析后确定这3个点都是EA1蛋白。【结论】成功获得炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株,为深入研究eag基因的功能奠定了基础,同时也为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立了一个良好的技术平台。
- 高美琴刘先凯冯尔玲唐恒明朱力陈福生王恒樑
- 关键词：同源重组缺失突变体双向电泳
- 福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因突变体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体,以进行后续ArgT功能研究。方法:根据福氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用λ-Red重组系统对argT基因进行缺失,并经PCR验证;采用定点突变的方法构建ArgT非降解株,并经SDS-PAGE验证;对野生株、argT缺失突变株和ArgT非降解突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:构建了2457T的argT缺失突变株和ArgT非降解突变株;2种突变株初始生长均较慢,但最终和野生株状态一致;2种突变株利用甘露醇的能力都比野生株强,而利用葡萄糖的能力降低。结论:获得了福氏2a志贺氏菌2457T株argT基因缺失突变体和ArgT蛋白非降解突变体。
- 赵格曹晓玉朱力刘先凯冯尔玲陈惠鹏王恒樑
- 关键词：缺失突变体定点突变
- 炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体的构建被引量：2
- 2009年
- 目的:构建炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体,以进行后续SLP的功能研究,为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立技术平台。方法:利用PCR技术,分别扩增得到目的基因的上游同源臂(slp-F)和下游同源臂(slp-R),将抗性基因(S)和上、下游同源臂先后连入穿梭质粒pKSV7,构建打靶载体pKSV7-FSR,经去甲基化后,电转化入炭疽芽胞杆菌A16R,通过同源重组敲除slp基因,并通过DNA测序和Western blot实验验证;对野生株和突变株37℃时的生长曲线及生化反应进行比较研究。结果:分别从DNA水平和蛋白质水平证实slp基因被成功敲除;突变株对数期生长较快,衰退较慢,与野生株的生化反应差异不明显。结论:获得了炭疽芽胞杆菌假想S-层蛋白SLP缺失突变体。
- 唐恒明刘先凯高美琴冯尔玲朱力史兆兴廖祥儒王恒樑
- 关键词：炭疽杆菌S-层蛋白基因敲除
