广东省自然科学基金(960059)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：中山大学华中师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文)被引量：5
- 2002年
- 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL
- 陈新华敖敬群杨林龙綮新王珣章陈曲侯
- 关键词：活性表达
- 人白细胞介素-12(hIL-12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达被引量：3
- 2001年
- 人白细胞介素 1 2 (hIL 1 2 )是细胞介导免疫发生的关键调节因子 ,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子 ,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成。利用DNA重组技术 ,分别构建了含hIL 1 2 p35基因和 p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3 p35和pAcAB3 p40。将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒 (AcNPVBaculoGoldLinearizedBaculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞 ,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV OCC hIL 1 2 (p35)与AcNPV OCC- hIL 1 2 (p40 )。将两种病毒分别感染Sf9细胞 ,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDS PAGE和Westernblot检测 ,结果显示hIL 1 2p35和 p40两基因均在昆虫细胞中获得表达 ,且能分泌至胞外。表达产物具有免疫原性。
- 杨林张晓馨陈新华龙綮新王珣章李迎秋
- 关键词：人白细胞介素杆状病毒表达系统
- 人白介素-12(P40)亚基在巴斯德毕赤酵母中的表达
- 2001年
- 运用PCR技术特异性地扩增了人IL 1 2p4 0亚基cDNA的编码区序列 ,得到 94 0bp的扩增片段 ,将其克隆于毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC的ClaⅠ ,XbaⅠ位点 ,构建成重组表达质粒pPICZαC p4 0 .经LiCl2 转化 ,Zeocin抗性筛选 ,得到含多拷贝p4 0基因的酵母工程菌PichiapastorisX 3 3 /p4 0 ,在 φ =0 5%甲醇诱导下 ,p4 0基因得到了分泌型表达 ,培养上清的SDS PAGE及Western blot均显示表达产物相对分子质量约 4 40 0 0 ,与预计大小相符 ,薄层凝胶扫描结果表明 ,分泌型表达蛋白占培养上清总蛋白量质量的 4 7% .
- 陈新华杨林陈曲侯王珣章龙綮新
- 关键词：IL-12白介素-12巴斯德毕赤酵母PCR技术免疫调节因子
