国家自然科学基金(39870656)
- 作品数：17 被引量：43H指数：4
- 相关作者：陈建平田玉张雷张莉刘明杰更多>>
- 相关机构：四川大学华西医科大学绵阳市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省学术和技术带头人培养资金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成都及周边地区5种动物隐孢子虫感染的调查被引量：16
- 2002年
- 目的调查成都及周边地区的猪、羊、鸡、兔等畜禽及猕猴隐孢子虫感染情况。方法用改良抗酸染色法检查。结果共采集 2 49份新鲜粪便标本 ,检查的每种动物中均发现有隐孢子虫感染 ,而且感染率较高 ,分别为89.7%、65 .3 %、41 .2 %、88.2 %及 5 5 .0 %。通过显微镜下观察初步发现不同粪源的隐孢子虫在形态学上的差异 ,可为进一步研究不同种株的差异 ,以及其系统发育关系打下基础。结论成都及周边地区
- 廖宛军陈建平陈盛文张雷刘明杰
- 关键词：动物隐孢子虫感染
- 嗜肺军团菌主要外膜蛋白与鞭毛亚单位蛋白双基因融合表达载体的构建及其诱导表达被引量：6
- 2006年
- 目的构建嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)与鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)的融合表达载体,并在原核系统表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建mompS与flaA基因完全融合的重组质粒,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了嗜肺军团菌904bp的mompS及1432bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSF,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-LpSF在原核系统中得到了表达。结论成功构建了嗜肺军团菌mompS-flaA双基因的原核融合表达载体,并在大肠杆菌中得到了表达,为进一步研究嗜肺军团菌核酸双价疫苗提供研究基础。
- 张雷陈建平张莉王涛刘德松田玉
- 关键词：嗜肺军团菌克隆
- 霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR缺失株的构建及其功能的研究被引量：4
- 2001年
- 目的 通过构建霍乱弧菌toxR基因缺失株来研究toxR基因对霍乱弧菌减毒菌株IEM10 1和高产毒株 5 6 9B毒力表达的调控作用。方法 采用自杀性质粒和接合转移技术 ,将 2个中间含有四环素基因的toxR基因分别与霍乱弧菌减毒株IEM10 1和高产毒株 5 6 9B染色体toxR基因重组 ,从而获得toxR基因缺失株IEM10 1 4和 5 6 9B 43 ,并对 2个toxR基因缺失株和其原出发菌株的霍乱肠毒素的产率和主要外膜蛋白图谱进行比较。结果 采用GM1 ELISA检测受测菌CT基因表达 ,toxR基因缺失株 5 6 9B 43的P/N值为 1 82 ,而其原出发菌株 5 6 9B的P/N为 4 5 2 ,而IEM10 1和其toxR基因缺失株的P/N值均低于 2。采用SDS PAGE对受试菌外膜蛋白进行分析 ,toxR基因缺失株 5 6 9B和IEM10 1的外膜蛋白图谱相比 ,均多出 2条相对分子质量 (Mr)为 40× 10 3 和 43× 10 3 外膜蛋白区带。结论 toxR蛋白是霍乱肠毒素基因ctx表达的正调控因子 ,是霍乱弧菌主要外膜蛋白 (Mr 为 40× 10 3 和43× 10 3)编码基因的负调控因子。
- 陈建平陈建平高守一刘延清祁国明
- 关键词：霍乱弧菌毒力基因表达
- mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达被引量：4
- 2006年
- 目的在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Westernblotting进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达。结论嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础。
- 张雷陈建平张莉王涛刘明杰田玉
- 霍乱毒素ctxA基因的克隆及原核表达
- 2006年
- 目的构建霍乱毒素A亚基基因(ctxA)的融合表达载体,并在原核细胞中表达,为霍乱弧菌肠毒素A亚基(CTA)免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础。方法以霍乱弧菌DNA为模板,PCR扩增获得霍乱弧菌ctxA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-CTA融合蛋白,用SDS-PAGE及Westernblot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了霍乱弧菌787bp的ctxA基因,成功构建了重组质粒pET-ctxA,经SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒pET-ctxA在原核细胞中得到了高效融合表达。结论霍乱弧菌ctxA基因在大肠杆菌中得到了高效表达。
- 张莉陈建平张雷王涛刘德松田玉
- 关键词：霍乱弧菌克隆基因表达
- 霍乱弧菌ctxB基因真核重组质粒的构建及表达
- 2006年
- 目的构建霍乱孤菌ctxB基因真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-ctxB上切下ctxB基因,导入真核表达载体pcDNA3·1(+),重组子经限制性酶切分析、PCR鉴定正确后,命名为pcDNA3·1-ctxB。用脂质体法将重组质粒pcDNA3·1-ctxB转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法对pcDNA3·1-ctxB的瞬时表达产物进行鉴定。结果约380bp的ctxB被克隆到pcDNA3·1(+)真核表达载体中,经测序无误后,用阳离子脂质体转染的方法,检测到重组质粒pcDNA3·1-ctxB在NIH3T3细胞的胞浆和胞膜上得到了表达。结论ctxB真核表达的成功构建及表达为进一步从分子水平研究霍乱肠毒素B亚单位的免疫原性及其作为佐剂的应用价值提供研究基础。
- 张莉陈建平张雷刘明杰王涛
- 关键词：霍乱孤菌真核表达
- 霍乱弧菌毒力表达调控基因及霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株的研究被引量：1
- 2003年
- 目的研究霍乱弧菌毒力表达调控基因与霍乱弧菌毒力之间的关系 ,构建霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株。方法首先采用PCR扩增、Southern印迹杂交及原位杂交对我国不同群型霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR、toxS、toxT的分布进行研究 ;然后采用自杀性质粒和接合转移技术构建霍乱弧菌toxR基因缺失株 ,并与原出发菌株比较 ,确定toxR基因对霍乱弧菌毒力表达调控机制 ;再用基因定向置换技术构建霍乱、黑热病双价口服活疫苗候选株。结果霍乱弧菌毒力表达调控基因与霍乱弧菌毒力表达有关 ;霍乱弧菌toxR蛋白是霍乱肠毒素的正调控因子 ,是霍乱弧菌主要外膜蛋白 (4 0kDa、4 3kDa)编码基因的负调控因子。结论初步构建霍乱。
- 陈建平张雷刘明杰张建国
- 关键词：霍乱弧菌黑热病霍乱
- 杜氏利什曼原虫amastin基因重组真核表达质粒的构建与表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amas-tin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin,并研究其在NIH3T3细胞中的表达。方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增。将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。以pcDNA3.1-amastin转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光染色法和RT-PCR分别鉴定pcDNA3.1-amastin的瞬时表达和稳定表达。结果:在细胞膜和细胞内均观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA3.1-amastin成功地转入NIH3T3细胞,并在细胞膜和细胞内获得短暂表达。稳定转染的NIH3T3细胞的总RNA经反转录后,用PCR扩增出无鞭毛体蛋白基因,表明获得了稳定表达。结论:成功地构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的真核表达重组质粒,并且该基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达。
- 李金福陈建平杨志伟田玉马莹胡孝素
- 关键词：杜氏利什曼原虫体外表达
- 霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR的PCR扩增及克隆被引量：1
- 2000年
- 为了构建霍乱弧菌和杜氏利什曼原虫双价口服活疫苗候选株 ,作者采用 PCR对霍乱弧菌毒力表达调控基因 tox R进行扩增及克隆 ,并对霍乱弧菌 tox R基因进行限制性酶切分析。结果显示 :7株霍乱弧菌均扩增出 1 .3kb的 tox R基因片段 ,tox R基因中部含有 Eco R 酶切位点 ,再将 tox R基因克隆在质粒 p AT1 5 3上 ,对所获的重组质粒 pt R4进行限制性酶切分析 ,证实质粒 pt R4插入的 1 .3kb的 DNA片段为 tox
- 陈建平马莹杨双会王雅静
- 关键词：霍乱弧菌调控基因
- 免疫佐剂分子CTB基因的克隆与表达被引量：2
- 2004年
- 我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们成功地扩增出 376 bp的霍乱弧菌 B亚基基因 ;构建免疫佐剂分子的重组质粒 p CTB;并在原核系统中表达出 12 KD的霍乱弧菌 B亚基抗原区带。
- 王涛陈建平张雷王玉芳马莹
- 关键词：免疫佐剂克隆技术基因表达聚合酶链式反应
