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国家自然科学基金(81360254)

作品数：33 被引量：65H指数：5
相关作者：吴建伟修江帆王宇魏川川尚小丽更多>>
相关机构：贵州医科大学贵州省疾病预防控制中心贵阳医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划贵州省科技计划项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学农业科学建筑科学更多>>

文献类型

  • 33篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 23篇医药卫生
  • 10篇生物学
  • 3篇农业科学
  • 1篇化学工程
  • 1篇建筑科学

主题

  • 25篇家蝇
  • 10篇抗菌肽
  • 9篇念珠菌
  • 9篇活性
  • 8篇原核表达
  • 8篇念珠
  • 8篇抗真菌肽
  • 8篇基因
  • 7篇克隆
  • 5篇蛋白
  • 5篇生物信息
  • 5篇生物信息学
  • 5篇白色念珠菌
  • 4篇细胞
  • 4篇F-1
  • 4篇MA
  • 3篇溶菌酶
  • 3篇抗菌
  • 3篇抗菌活性
  • 3篇白念珠菌

机构

  • 26篇贵州医科大学
  • 9篇贵州省疾病预...
  • 5篇贵阳医学院
  • 3篇毕节市第一人...
  • 2篇皖北煤电集团...
  • 2篇贵州博康生物...
  • 2篇毕节市中医院
  • 1篇山东科技大学
  • 1篇四川大学
  • 1篇南充职业技术...
  • 1篇安徽省宿州市...
  • 1篇皖北矿务局

作者

  • 18篇吴建伟
  • 12篇修江帆
  • 10篇王宇
  • 8篇魏川川
  • 7篇尚小丽
  • 6篇彭传林
  • 5篇国果
  • 4篇胡亚
  • 3篇王涛
  • 2篇王涛
  • 2篇杨阳
  • 2篇罗嫚
  • 1篇赵学军
  • 1篇吴沁怡
  • 1篇罗振华
  • 1篇袁静
  • 1篇王兵
  • 1篇宋萍萍
  • 1篇黄伟康
  • 1篇赵鹏

传媒

  • 10篇贵州医科大学...
  • 5篇生物技术通报
  • 5篇环境昆虫学报
  • 3篇中国人兽共患...
  • 2篇功能材料
  • 2篇中国公共卫生
  • 2篇中国病原生物...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇贵阳医学院学...
  • 1篇Biomed...
  • 1篇中国社区医师

年份

  • 3篇2023
  • 2篇2022
  • 5篇2021
  • 5篇2020
  • 1篇2019
  • 3篇2018
  • 3篇2017
  • 5篇2016
  • 6篇2015
  • 1篇2014
共 33 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
家蝇GNBP3基因克隆及感染白色念珠菌后的表达被引量：4
2017年
对家蝇GNBP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究。从构建的家蝇Musca domestica幼虫c DNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。白色念珠菌注射感染家蝇幼虫并收集标本,逆转录,通过荧光定量PCR检测感染样本中GNBP3基因的表达情况,结果进行统计学分析。研究结果表明,GNBP3基因ORF全长1473 bp,编码490个氨基酸,理论分子量为55.8 k Da,等电点为6.85;感染后不同时间点,感染组与对照组比较,在3 h、12 h、36 h、48 h GNBP3 mRNA的表达明显增高,两组比较有显著性差异(P<0.05),而24 h表达差异性最小;感染后不同组织中感染组与对照组比较,3 h和12 h时,在体壁、血淋巴、脂肪体中的表达量升高,具有显著性差异(P<0.05);24 h时,在血淋巴中的表达量较对照组高,而在唾液腺和脂肪体中的表达量呈下降趋势,均具有显著性差异(P<0.05);48 h,在血淋巴和脂肪体中表达量较对照组高,在中肠的表达量较对照组低,均具有显著性差异(P<0.01)。成功克隆GNBP3基因且在家蝇感染白色念珠菌后GNBP3的表达水平随时间的推移呈现先升高后降低再升高的趋势,在各组织中以在免疫组织(血淋巴、脂肪体)中的表达显著增高,推测其在真菌识别过程中发挥潜在作用。
胡亚罗嫚王宇王涛尚小丽张迎春修江帆吴建伟
关键词：实时荧光定量PCRMRNA水平家蝇
家蝇抗真菌肽-1A体外抗白念珠菌的细胞内作用机制被引量：2
2021年
目的探讨家蝇抗真菌肽-1A(MAF-1A)体外抗白念珠菌(C.albicans)的细胞内作用机制。方法取C.albicans冻存物划线接种、培养并制备浓度为2×10^(9) cfu/L的菌悬液;分别以0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1A作用24 h,采用荧光指示剂法检测各处理细胞内活性氧(ROS)含量的变化;取0、781及1560 mg/L抗氧化剂维生素C(V_(c))和还原型谷胱甘肽(GSH))预处理C.albicans细胞30 min,采用微量稀释法检测MAF-1A抗C.albicans的最小抑菌浓度(MIC);采用荧光指示剂法检测0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1A作用24 h后C.albicans细胞线粒体膜电位的变化;取C.albicans脱氧核糖核酸(DNA)与等体积不同浓度(0、625、1250及2500 mg/L)MAF-1A共孵育6 h,采用琼脂糖凝胶阻滞实验分析MAF-1A对C.albicans DNA的影响。结果与0 mg/L MAF-1A相比,不同浓度MAF-1A处理C.albicans细胞内ROS量明显增加(P<0.01),且胞内ROS的含量随着MAF-1A处理浓度的增加而增加,呈剂量依赖性;V C和GSH处理后,MAF-1A抗C.albicans的MIC值由625 mg/L升高至1250 mg/L;MAF-1A处理后,C.albicans细胞线粒体的膜电位未出现变化(P>0.05);凝胶阻滞实验结果显示,不同浓度MAF-1A与C.albicans DNA孵育后,DNA条带出现滞后及变暗淡现象,且在加样孔有滞留,这种阻滞现象随着MAF-1A浓度升高越明显。结论MAF-1A不仅能诱导C.albicans细胞内大量产生ROS,还能通过与DNA的结合而发挥对C.albicans的抑制作用。
邓思波黄敏慧张迎春吴建伟崔古贞陈峥宏王涛
关键词：抗氧化剂活性氧
抗真菌肽-1A对白念珠菌细胞膜的作用被引量：1
2021年
目的探讨抗真菌肽-1A(MAF-1A)对白念珠菌(Candida albicans)细胞膜的作用机制。方法取C.albicans冻存物划线接种、培养并制备成浓度为2×109 cfu/L的菌悬液;分别以0、625、1250及2500 mg/L的MAF-1A作用12 h,采用荧光探针法及激光共聚焦扫描显微技术观察MAF-1A对C.albicans细胞膜完整性和通透性的影响;以0和1250 mg/L的MAF-1A分别作用细胞24 h,通过qPCR技术检测MAF-1A对C.albicans细胞膜麦角甾醇合成相关基因(ERG1、ERG6、ERG5、MET6)mRNA表达水平的影响。结果与对照组(MAF-1A为0)相比,不同浓度MAF-1A作用C.albicans 12 h之后,荧光染料PI可透过细胞膜进入到胞质内,C.albicans细胞膜的通透性增加,且细胞膜通透性随MAF-1A作用浓度的升高而增加,呈剂量依赖性;qPCR结果显示,MAF-1A可使C.albicans麦角甾醇合成相关基因ERG1、ERG6、ERG5、MET6的mRNA表达水平下调(P<0.05)。结论MAF-1A可增加C.albicans细胞膜通透性,其机制可能与抑制细胞膜麦角甾醇合成相关基因mRNA的表达有关。
邓思波黄敏慧张迎春吴建伟崔古贞陈峥宏王涛
关键词：膜通透性麦角甾醇激光共聚焦扫描显微镜
Proteomic Analysis of the Peritrophic Matrix from the Midgut of Third Instar Larvae,Musca domestica被引量：2
2016年
Objective To better comprehend the molecular structure and physiological function of the housefly larval peritrophic matrix （PM）, a mass spectrometry approach was used to investigate the PM protein composition. Methods The PM was dissected from the midgut of the third instar larvae, and protein extracted from the PM was evaluated using SDS-PAGE. A 1D-PAGE lane containing all protein bands was cut from top to bottom, the proteins in-gel trypsinised and analysed via shotgun liquid chromatography- tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）. Results In total, 374 proteins, with molecular weights varying from 8.225, kD to 996.065 kD and isoelectric points ranging from 3.83 to 11.24 were successfully identified, most identified proteins were mainly related to immunity, digestion, nutrient metabolism and PM structure. Furthermore, many of these proteins were functionally associated with pattern binding, polysaccharide binding, structural constituent of peritrophic membrane and chitin binding, according to Gene Ontology annotation. Conclusion The PM protein composition, which provides a basis for further functional investigations of the identified proteins, will be useful for understanding the housefly larval gut immune system and may help to identify potential targets and exploit new bioinsecticides.
Wang YuXiu Jiang FanCheng Jin ZhiLuo ManZhao PengShang Xiao LiWang TaoWu Jian Wei
关键词：PROTEOME
家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析被引量：6
2016年
目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。
胡红元任春丽尚小丽陈明明王宇王涛吴建伟
关键词：家蝇克隆表达内参基因
吻合器痔上黏膜环切术诊疗体会
2020年
目的:探讨吻合器痔上黏膜环切术(PPH)并发症防治方法。方法:2015年10月-2018年6月收治行PPH患者245例,分析术后并发症原因采取治疗措施。结果:245例患者平均手术时间(13±2.5)min,尿潴留19例(7.8%)。术后24 h内需静脉或肌内注射止痛药38例(15.1%)。术中吻合口活动性出血20例(8.2%),行跨吻合口“8”字缝合止血。术中检查黏膜环不完整。术后无出血患者。肛门坠胀和水肿分别为112例(45.7%)、62例(25.3%)。无肛门狭窄、肛瘘、后腹膜气肿患者。因严重直肠黏膜内脱垂遗留痔核复位不佳者1例,门诊局麻切除痔核。其余患者疗效满意。结论:PPH荷包缝合个体化,加强盆底肌功能训练,可提高疗效,降低并发症发生率。
彭传林刘龙曾春辉朱义生吴建伟
关键词：吻合器痔上黏膜环切术并发症
抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及机制研究被引量：1
2021年
目的探讨抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及潜在机制。方法采用微量稀释法检测MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC;通过扫描电镜等方法观察MAF-1A衍生物对白念珠菌生物膜形态学的影响;以XTT法测定MAF-1A衍生物对不同阶段生物膜活性的影响及生物膜80%抑制浓度(SMIC_(80));采用流式细胞术、激光共聚焦显微技术、qRT-PCR等分析MAF-1A衍生物抗白念珠菌生物膜的作用机制。结果MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC及SMIC_(80)均低于模板肽,分别为62.5μg/mL、125μg/mL和62.5~125μg/mL。MAF-1A衍生物可明显抑制白念珠菌的黏附和菌丝形成,且抑制作用呈剂量依赖性;可使菌细胞黏附及菌丝形成相关基因(ALS3、HWP1、SUN41、UME6)的mRNA表达量降低(t_(UME6)=12.42,P<0.001;t_(ALS3)=12.20,P<0.001;t_(SUN41)=7.206,P<0.001;t_(HWP1)=22.52,P<0.001);可使形成中的生物膜和成熟生物被膜活性明显降低(t_(250)=3.680,P<0.05;t_(500)=4.153,P<0.05;t_(1000)=4.934,P<0.05;t_(250)=0.5335,P<0.05;t_(500)=1.504,P<0.05;t_(1000)=6.431,P<0.05)。62.5μg/mL浓度的MAF-1A衍生物即可直接破坏白念珠菌成熟生物膜结构,引起成熟生物膜的细胞凋亡、ROS含量明显增加,线粒体膜电位显著降低。结论MAF-1A衍生物具有较好的体外抗白念珠菌生物膜活性,不仅能通过抑制细胞黏附、菌丝形成来干扰生物膜的早期形成,还能通过直接损伤以及ROS累积、线粒体膜电位去极化所引发的细胞凋亡来破坏成熟生物膜。
邓思波黄敏慧张迎春李彩多吴建伟陈峥宏王涛
关键词：抗菌肽白念珠菌生物膜线粒体膜电位
高保坍型聚羧酸减水剂的合成及其对混凝土性能的影响分析被引量：5
2022年
以甲基烯丙基聚乙二醇醚(TPEG-2400)、丙烯酸(AA)等为单体,过硫酸铵(APS)为引发剂,甲基丙烯磺酸钠(MAS)为链转移剂,在水溶液中进行了自由基共聚反应合成了高保坍型聚羧酸减水剂,探究了最佳合成工艺及其对混凝土应用性能的影响。结果表明,水泥净浆初始和1 h的流动度随着酸醚比、链转移剂MAS用量、引发剂APS用量、温度和滴加时间的增加,均表现出先增大后减小的趋势。当n(AA)∶n(TPEG)=4∶1,MAS用量为AA和TPEG总质量的3%,引发剂APS用量为AA和TPEG总质量的3%,反应温度为60℃,滴加时间为1.5 h时,水泥净浆初始和1 h的流动度达到了最大值,合成的高保坍型聚羧酸减水剂性能最优。在此条件下合成的聚羧酸减水剂与市售TPEG型减水剂和HPEG型减水剂相比,具有更优的分散性、保坍性能和抗压强度。
史绘洲王辉
关键词：聚羧酸减水剂合成工艺混凝土分散性
家蝇核糖体蛋白S18基因的克隆及表达模式研究被引量：5
2016年
旨为证实核糖体蛋白S18(Ribosomal protein S18,RPS18)基因在家蝇体内的表达稳定性。从构建家蝇幼虫c DNA文库中筛选到核糖体蛋白S18基因,以c DNA为模板,通过PCR扩增,获得RPS18基因完整编码序列(登录号:KT006855),运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建p ET28a/RPS18重组质粒,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化,制备多克隆抗体并进行抗血清特异性分析。应用RT-PCR、q PCR及Western-blot从转录、翻译水平上分析RPS18基因在家蝇不同发育时期和三龄幼虫不同组织中的表达情况。结果表明,RPS18基因ORF全长459 bp,编码152个氨基酸,理论分子量为17 590.5 Da,等电点为10.48;将构建的重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,纯化得到RPS18蛋白;将该纯化蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体,His单抗鉴定及抗血清特异性分析显示,其均可见单一条带;RT-PCR、q PCR及Westernblot分析表明,RPS18基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均能够稳定表达;综合分析表明,该基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均保持较好的表达稳定性。
胡亚卢诚魏川川修江帆吴建伟
关键词：家蝇内参基因原核表达
抗菌肽MAF-1A洐生肽的设计及其抗白色念珠菌活性
2023年
目的探讨家蝇抗真菌肽-1A(MAF-1A)衍生肽的设计及其抗白色念珠菌(C.albicans)活性。方法采用序列截短及氨基酸残基替换法设计4条MAF-1A衍生肽,生物信息学分析其理化特性;取对数生长期C.albicans ATCC10231制备成浓度为(0.5~2.5)×10^(6)cfu/L的菌液,采用微量稀释法检测4条衍生肽对C.albicans的抗菌活性,另设MAF-1A组(25~1600 mg/L MAF-1A处理)、氟康唑(FLC)对照组(0.25~64.00 mg/L FLC处理);采集健康人全血,离心取血细胞制作重悬红细胞,与不同终浓度(25~400 mg/L)活性衍生肽混匀,分为MAF-1A组、MAF-1A22S3组、MAF-1A20S3组、MAF-1A18S5组、MAF-1A16S5组、阳性对照(0.1%Triton X-l00处理)及阴性对照组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)处理],采用体外溶血实验检测各组红细胞的溶血率;制备(1.0~5.0)×10^(9)cfu/L菌液,与不同终浓度[1、2、4×最小抑菌浓度(MIC)]活性衍生肽稀释液混合,设MAF-1A组(1、2、4×MIC MAF-1A处理)和FLC(1、2、4×MIC FLC处理)对照组,分别于0、4、8、12、16、20及24 h取混合菌液100μL于沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)平板上37℃培养,记录菌落数,绘制时间-杀菌曲线检测MAF-1A、MAF-1A22S3及FLC对C.albicans的杀菌动力学;制备1.0×10^(9)cfu/L C.albicans菌液,加不同终浓度(1、2、4×MIC)的活性衍生肽稀释液,设MAF-1A(1×MIC MAF-1A处理)、FLC(1×MIC FLC处理)对照组和阴性对照组(PBS处理),采用扫描电镜观察各组C.albicans的形态学改变。结果4条衍生肽对C.albicans均具有抗菌活性,MIC和MFC值均较模板肽MAF-1A降低,其中MAF-1A22S3的抗菌活性增加最为明显;衍生肽MAF-1A22S3、MAF-1A20S3溶血活性低于模板MAF-1A,其中MAF-1A22S3的溶血性最低(6×MIC范围内溶血率<5%);MAF-1A22S3对C.albicans具有较强的杀菌作用、且呈浓度依赖性,同浓度时杀菌效率强于模板肽MAF-1A和FLC对照组;衍生肽MAF-1A22S3作用后C.albicans细胞表面出现明显的凹陷、裂痕、胞质外溢、细胞皱缩及裂解死亡等病理改变,�
黄敏慧曾晔张迎春李彩多吴建伟陈峥宏王涛
关键词：白色念珠菌抗菌肽分子改造衍生肽
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