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c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究被引量：1: 2011年; 目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。; 孙岩张娟娟刘晓影何永云梁广智李武修高玉光; 关键词：原癌基因小RNA干扰

Runx 2在牙釉质形成中的作用研究被引量：1: 2011年; 目的:研究小鼠成釉细胞中Runx 2对釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblas-tin,AMBN)、牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因表达的调控作用,为研究Runx 2在牙釉质形成中的作用奠定基础。方法:通过RT-PCR法从小鼠成釉细胞中克隆得到Runx 2全长基因,测序正确后将其亚克隆至pcDNA3.1-hisA载体中;构建针对小鼠Runx 2的siRNA表达框架,将反应质粒pcdna-3.1-HisA-Runx 2及针对Runx 2的特异性小分子干扰RNA(siRNA)分别转染小鼠成釉细胞,用RT-PCR方法检测Runx 2,AMTN,AMBN以及ODAM的mRNA水平。结果:转染的小分子干扰RNA(siRNA)对Runx 2mRNA的表达有显著性抑制作用,Runx 2基因沉默可显著抑制AMTN和AMBN的mRNA表达水平;Runx 2基因过表达可显著上调AMTN和AMBN的mRNA表达水平。Runx 2基因的表达变化对ODAM的mRNA表达水平则无显著性调控作用。结论:Runx 2通过调控AMTN和AMBN的表达水平,在牙釉质形成过程中发挥作用。; 何永云梁广智刘晓影孙岩高玉光; 关键词：核心结合因子

人牙成釉细胞相关蛋白启动子的克隆和转录活性分析被引量：1: 2010年; 目的:构建人牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞、Hela细胞中的活性,为进一步判定上游启动子的转录调控区奠定基础。方法:以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果:成功地获得了不同长度的ODAM基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-333～-195与-195～-96区域为特异的转录调控作用区。结论:初步确定了ODAM基因启动子的转录活性区,为进一步研究该基因转录调控特点奠定基础。; 韩婷婷刘晓影郝建忠高玉光; 关键词：启动子成釉细胞

人牙釉质蛋白Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子的初步研究被引量：1: 2009年; 目的分析人釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)与釉蛋白(Enamelin,ENAM)基因上游启动子序列,构建不同长度的基因上游启动子报告基因载体,为进一步判断启动子序列的转录调控区奠定基础。方法利用软件分析基因启动子序列,以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中。结果成功地获得了不同长度的Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功。结论成功构建了不同长度启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,为进一步研究牙釉质蛋白基因启动子的转录活性及转录调控特点奠定基础。; 刘晓影高志芹韩婷婷官秀梅高玉光; 关键词：AMELOBLASTIN ENAMELIN

釉成熟蛋白和釉原蛋白基因在小鼠牙胚发育过程中的时空表达研究被引量：6: 2009年; 目的：观察、比较小鼠釉成熟蛋白（amelotin）和釉原蛋白（amelogenin）基因在牙齿发育过程中的表达。方法：利用Digoxigenin标记的cRNA探针，采用原位杂交技术对amelotin和amelogenin基因表达进行组织学定位；然后从小鼠下颌中提取总RNA，采用RT—PCR技术观察小鼠amelotin和amelogenin基因在小鼠下颌组织中的表达。结果：在出生后1d的小鼠下颌第一磨牙，随着前期牙本质形成，amelogenin在成釉细胞层开始表达，并逐渐增强，但未检测到amelotin基因表达；在出生后5d的小鼠，成釉细胞处于分泌期，amelotin和amelogenin基因在成釉细胞中显著表达；在出生后10d小鼠下颌第一磨牙，amelotin和amelogenin基因在牙尖周围成熟期成釉细胞中的表达信号明显降低。利用RT—PCR技术，在新生小鼠下颌中未检测到amelotin基因表达，但amelogenin已开始表达；从出生1—7d小鼠下颌中均检测到amelotin和amelogenin基因表达；在出生后7d小鼠，amelogenin表达显著下降。结论：amelotin和amelogenin均参与了釉质发育过程；amelotin基因表达迟于amelogenin基因，提示两种釉质基质蛋白在釉质发育过程中可能发挥不同生物学作用。; 魏亚红孙岩张娟娟李东亮韩婷婷高玉光; 关键词：釉原蛋白成釉细胞原位杂交

人釉成熟蛋白Amelotin基因的启动子活性区域分析: 2009年; 目的构建人牙釉质蛋白(Amelotin,AMTN)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞及Hela细胞中的活性,为进一步判定上游启动子的转录调控区奠定基础。方法以PCR方法荻取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果成功地获得了不同长度的Amelotin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-190～-358与-35～-93区域为特异的转录调控作用区。结论成功构建了不同长度的Amelotin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定Amelotin基因启动子的转录活性区,为进一步研究Amelotin基因转录调控特点奠定基础。; 何永云韩婷婷高玉光; 关键词：成釉细胞

人釉蛋白基因启动子在成釉细胞中的转录活性研究: 2009年; 目的构建人釉蛋白(Enamelin,ENAM)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,通过分析不同的启动子片段的活性,确定启动子的功能区域,为进一步研究Enamelin基因的转录调控机制奠定基础。方法以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果成功地获得了不同长度的Enamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在成釉细胞中活性不同,-1216～-554与-312～-133区域为特异的转录调控作用区。结论成功构建了不同长度的Enamelin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定Enamelin基因启动子的转录活性区,为进一步研究Enamelin基因转录调控特点奠定基础。; 刘晓影高志芹韩婷婷官秀梅高玉光; 关键词：ENAMELIN 成釉细胞

人成釉蛋白基因的启动子活性区域分析: 2009年; 目的:构建人成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞、Hela细胞中的活性。方法:以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞、Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果:成功地获得了不同长度的ameloblastin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-424-267与-128-37区域为特异性转录调控作用区。结论:成功构建了不同长度的ameloblastin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定ameloblastin基因启动子的转录活性区,为进一步研究ameloblastin基因转录调控特点奠定基础。; 刘晓影高志芹韩婷婷高玉光; 关键词：成釉细胞

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山东省自然科学基金(Y2006C106)

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