广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0815011-6-3)
- 作品数：21 被引量：51H指数：4
- 相关作者：卢晟盛卢克焕许惠艳何若钢许丹娜更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室西藏农牧学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 胰岛素和半胱氨酸对猪孤雌胚早期体外发育的影响被引量：4
- 2009年
- 探讨在NCSU-23中添加不同浓度的胰岛素和/或半胱氨酸对猪孤雌胚体外发育的影响.结果表明,在试验1中,添加胰岛素的质量浓度为2.5μg/mL时,猪孤雌胚的卵裂率及囊胚率显著高于对照组(P<0.05);在试验2中,添加半胱氨酸的浓度为1.2 mmol/L时,猪孤雌胚囊胚发育率最高,但添加的浓度大于4.8 mmol/L时,猪孤雌胚的囊胚发育率显著降低(P<0.05);在试验3中,联合添加胰岛素和半胱氨酸时能显著提高猪孤雌胚的囊胚率(P<0.05).因此,在NCSU-23中添加一定浓度的胰岛素和/或半胱氨酸能提高猪孤雌胚发育到囊胚阶段的能力.
- 任子利赵彦玲田加运许丹娜潘天彪黄敏瑞卢晟盛卢克焕
- 关键词：孤雌激活早期胚胎胰岛素半胱氨酸
- 成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：6
- 2010年
- 为探讨不同来源的促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响,将猪卵母细胞置于添加有不同来源促性腺激素(分别来自美国Sigma公司和中国科学院动物研究所)的成熟液中体外成熟40～44 h,成熟卵母细胞经化学孤雌激活后放入胚胎培养液中继续培养,分别于第48小时和第168小时统计卵裂率和囊胚发育率。结果发现,成熟液中同时添加0.5μg/mL中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)的卵裂率和囊胚发育率均略高于其他处理组,分别达到(65.68±24.13)%和(28.41±18.74)%;在囊胚细胞数方面,无论是添加中国科学院动物研究所还是Sigma公司生产的促性腺激素,均以添加浓度为0.5μg/mL时的囊胚细胞数最高。结果表明,两种来源促性腺激素对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育的影响无显著差异,说明中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)能有效促进猪卵母细胞体外成熟和进一步孤雌发育效果,且以在成熟液中同时添加0.5μg/mL FSH和0.5μg/mL LH为宜。
- 兰宗宝韩晓慧梁世忠何若钢卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞促性腺激素
- 猪卵母细胞和早期胚胎透明带杨氏模量变化
- 2010年
- 在39℃环境下,利用微管吸吮的方法,在倒置显微镜下,通过显微操作装置用显微玻璃管吸吮猪卵母细胞和早期胚胎来测定其透明带的杨氏模量。结果显示,从猪卵巢抽取的未经体外成熟培养的卵母细胞(GV期)一直到早期囊胚(未扩张囊胚)阶段,其透明带杨氏模量一直都无显著变化,均集中在20 kPa左右,但当发育到扩张囊胚期其透明带杨氏模量明显变大(P<0.05),且扩张囊胚中化学激活的明显大于体外受精的(P<0.05)。结果提示,在猪卵母细胞和早期胚胎发育进程中,其透明带的刚性在扩张囊胚期最大,这为通过某些理化方法来帮助扩张囊胚期的胚胎孵化,从而提高囊胚的孵化率并最终提高妊娠率提供了力学方面的理论参考。
- 赵彦玲宋立峰任子利杨绿峰卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞胚胎透明带微管吸吮杨氏模量
- 广西巴马小型猪附睾成纤维细胞的分离培养和鉴定被引量：2
- 2010年
- 为了建立广西巴马小型猪附睾成纤维细胞体外培养体系,利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离附睾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏,并通过接触抑制和解除抑制研究细胞的增殖能力,以及通过免疫荧光对其进行鉴定。结果表明,该法成功分离获得广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,并可以大量传代和冷冻,目前已经传至55代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性。可见,通过微量液体组织块贴壁法能成功分离得到广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,在体外能稳定培养和传代。
- 王献伟王宪梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪附睾成纤维细胞
- 显微操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响被引量：1
- 2010年
- 为了进一步优化现有的猪卵胞质内精子注射(ICSI)体系,探讨了ICSI操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响情况。结果表明,囊胚形成率随着ICSI操作时间的延长而呈现明显下降趋势,其中卵母细胞在体外4 h内完成ICSI组的囊胚形成率(5.90%)显著低于其他3个处理(P<0.01)。可见,ICSI操作时间越长,其胚胎早期发育率越低。
- 罗龙兴秦祖兴梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞
- 陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养被引量：3
- 2011年
- 本研究建立陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养体系,采用组织块培养法可以获得陆川猪耳部成纤维细胞。用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞、用含有10%FBS的DMEM对细胞进行培养,能很好的支持陆川猪耳部成纤维细胞的生长。传3代后,观察到培养的细胞形态逐渐均一,为典型的成纤维细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形。细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势。用间接免疫荧光法对细胞类型进行鉴定。抗波形蛋白免疫荧光染色显示为阳性,抗角形蛋白免疫荧光染色为阴性。结果,分离得到的细胞为成纤维细胞。结果表明,用组织块培养法,可以培养出陆川猪耳部成纤维细胞。
- 秦小娥胡林林卢晟盛卢克焕
- 关键词：陆川猪组织块培养间接免疫荧光
- 电融合/激活对于巴马小型猪体细胞克隆胚胎生产的影响被引量：1
- 2011年
- 本试验旨在建立适用于猪体细胞克隆的融合/激活体系(试验1),优化融合/激活条件以提高重构卵融合率和激活率,为生产足够数量的克隆胚胎用于胚胎移植最终诞生体细胞克隆猪奠定条件。首先比较脉冲时间确定适合体细胞克隆的最佳融合/激活参数,然后利用此参数验证巴马小型猪耳部成纤维细胞克隆胚胎的发育潜能。结果显示:场强100 V/mm,3次电脉冲,脉冲时间为30μs时适于猪体细胞克隆。在试验2中,利用巴马小型猪耳部成纤维细胞为供体细胞构建体细胞克隆胚胎,得到了较高的卵裂率(83.1%)和囊胚发育率(12.4%)。
- 刘红波吕培茹胡林林杨小淦宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪体细胞克隆电融合电激活
- 食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究被引量：1
- 2011年
- 采用食蟹猴耳部成纤维细胞作为核供体利用电融合法构建猴-猪异种核移植胚胎,研究其核重编机制并寻找适宜的培养基,初步建立食蟹猴-猪异种核移植体系。结果显示:(1)重构胚胎激活后3 h,供体核的大小基本不发生变化,但在激活后6 h大部分形成膨大的类原核。(2)食蟹猴-猪异种核移植胚胎融合率为74.2%,有70.5%的重构胚胎发生卵裂,29%的卵裂胚胎发育到桑椹胚阶段。(3)在NCSU-23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中,重构胚突破4-细胞阻滞发育到8-细胞以上的比例分别为23.5%和17.0%,在NCSU-23培养基中的为19.9%,但是只有在NCSU23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中重构胚胎发育到囊胚阶段(1.4%vs1.1%),尽管差异不显著。本研究首次建立了食蟹猴-猪异种体细胞克隆体系。
- 吕培茹刘红波左二伟杨小淦宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：食蟹猴异种核移植培养基
- 食蟹猴耳部成纤维细胞体外培养体系的初步建立被引量：5
- 2009年
- 建立食蟹猴耳部成纤维细胞的体外培养体系,为食蟹猴体细胞核移植、转基因技术及治疗性克隆做准备。通过组织块培养法进行原代培养,成功分离了食蟹猴耳部成纤维细胞;原代培养后用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞,用含10%FBS的DMEM对细胞进行培养,细胞在体外传至第25代;用含10%FBS和10%DMSO的DMEM为冷冻液对细胞进行冷冻保存,解冻传代后,细胞形态和生长速度没有明显变化;用细胞技术法绘制细胞的生长曲线显示,符合体外细胞生长规律;用吉姆萨染色法对不同代数细胞的染色体倍性进行分析,二倍体细胞所占比例为80%以上。
- 许丹娜许惠艳凌泽继卢晟盛谢莉萍卢克焕
- 关键词：食蟹猴体外培养
- 不同激活方法对猪ICSI卵早期发育的影响
- 2009年
- [目的]探讨不同激活方法对猪单精子显微受精(ICSI)胚发育的影响。[方法]冷冻精子解冻洗涤后直接应用于ICSI,ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测其原核形成情况。[结果]结果表明,单纯电脉冲激活以及电脉冲与6-DMAP联合激活其受精率分别达53.3%和60.4%,对ICSI卵雌雄原核形成的影响差异不显著(P>0.05);ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测猪ICSI卵胚胎早期发育情况,单纯电脉冲激活囊胚率达13.0%,显著高于对照(P<0.05)。[结论]单纯电脉冲激活能促进猪ICSI胚胎的早期发育。
- 张玲冯宝刚许惠艳何若钢卢晟盛房慧伶潘天彪蓝海恩黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞ICSI电激活
