上海市“科技创新行动计划”(09140900300)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。
- 高骏孙凤萍
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 鸭乙型肝炎病毒PCR诊断方法的建立及应用被引量：2
- 2013年
- 根据Genbank上发发表的鸭乙肝病毒(DHBV)的核心蛋白基因序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立了鸭乙肝病毒PCR诊断方法,并应用此方法对上海周边地区的鸭血清进行了检测和测序鉴定。结果表明:建立的DHBV PCR诊断方法具有快速、准确的优点;鸭乙肝病毒上海分离株的C蛋白基因与已报道的其他5株鸭乙肝病毒毒株的同源性在96.9%以上。对上海周边地区的100份鸭血清样本的检测表明,上海周边地区的鸭乙肝病毒自然携带率为8%。
- 高骏孙凤萍魏晓峰胡建华曹静马辰昊张永华易建中
- 关键词：鸭乙肝病毒病毒检测PCR
