陕西省教育厅科研计划项目(11JK-0712)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 相关作者：许刚柱李文张鹏王茂德张俊锋更多>>
- 相关机构：西安医学院西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡被引量：4
- 2015年
- 目的采用RNA干扰技术(RNAi)沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)基因的表达,观察沉默效果及沉默CEACAM1表达后对SHG44人胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对小干扰RNA(siRNA),脂质体法瞬时转染SHG44细胞。流式细胞术(FCM)检测转染效率,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA转染前后SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达,Western blot法检测CEACAM1蛋白的表达。CCK-8法检测SHG44细胞细胞增殖活性,annexin V-FITC/PI染色结合FCM检测SHG44细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3和裂解型多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的变化。结果 CEACAM1 siRNA转染效率达85%。与空白对照组和阴性对照组比较,qRT-PCR及Western blot结果显示,3组特异性siRNA转染48 h后,在mRNA和蛋白水平上CEACAM1的表达均降低,以CEACAM1-siRNA3效果最明显。siRNA组SHG44细胞的增殖能力较正常对照组明显下降,凋亡细胞比例增加。沉默CEACAM1表达可以上调cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达。结论沉默CEACAM1基因表达可有效抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡。
- 许刚柱李文张鹏丁志斌赵慧张俊锋王茂德
- 关键词：胶质瘤凋亡
- siRNA下调CEACAM1基因表达对人胶质瘤SHG44细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨靶向癌胚抗原相关细胞黏附分子l(CEACAM1)基因的小干扰RNA(small interfering,siRNA)对人胶质瘤细胞SHG44增殖及凋亡的影响。方法化学合成3条针对CEACAM1基因的特异性siRNA,采用脂质体法转染SHG44细胞;采用蛋白质印迹法分别检测siRNA转染后SHG44细胞中CEACAM1蛋白及cleaved Caspase-3的表达情况。分别采用细胞计数法及FCM法检测CEACAM1-siRNA对SHG44细胞增殖及凋亡的影响。前期实验分为5组:正常对照组(细胞未经任何处理),阴性对照组(转染非特异性siRNA),CEACAM1-siRNA1组,CEACAM1-siRNA2组和CEACAM1-siRNA3组。根据Western blot结果,选择一种沉默效果最佳的siRNA沉默CEACAM1基因的表达,进行后续试验。后期实验分为3组:正常对照组(细胞未经任何处理)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)、CEACAM1-siRNA组(转染沉默效果最佳CEACAM1-siRNA)。结果与正常对照组和阴性对照组比较,Western blot结果显示,3个特异性siRNA转染48 h后,CEACAM1蛋白的表达均降低,以CEACAM1-siRNA3组抑制效果最明显(P<0.01)。后续实验中CEACAM1-siRNA组SHG44细胞的增殖受到抑制,凋亡率增加(P<0.05),并且沉默CEACAM1表达可以上调cleaved Caspase-3的表达(P<0.05)。结论 CEACAM1-siRNA能下调SHG44细胞中CEACAM1蛋白的表达,抑制SHG44细胞的增殖,诱导细胞凋亡,CEACAM1基因可能参与了脑胶质瘤的生物学行为。
- 李文张鹏许刚柱张俊锋王辉盛旭东王茂德
- 关键词：胶质瘤RNA干扰增殖凋亡
- RNA干扰抑制癌胚抗原相关细胞黏附分子1表达对人脑胶质瘤SHG44细胞化疗敏感性的影响被引量：10
- 2019年
- 目的采用RNA干扰技术,研究人脑胶质瘤SHG44细胞对化疗敏感性的影响。方法用脂质体法转染人脑胶质瘤SHG44细胞株,通过RT-PCR检测癌胚抗原相关细胞黏附分子1(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,CEACAM1)mRNA的变化,CCK-8法检测在化疗药物替莫唑胺(temozolomide,TMZ)作用下转染CEACAM1 siRNA后SHG44细胞增殖情况,分析凋亡情况。结果与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组SHG44细胞CEACAM1基因mRNA表达受到抑制(P<0.01),经不同浓度TMZ作用后,siRNA干扰组SHG44细胞的增殖抑制明显被增强(P<0.01),而且SHG44细胞对TMZ的IC50降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.01)。结论合成的针对CEACAM1基因的特异性siRNA能够抑制SHG44细胞中CEACAM1基因的表达,并能提高胶质瘤细胞的化疗敏感性。
- 盛旭东李文张俊锋王辉许刚柱
- 关键词：RNA干扰癌胚抗原相关细胞黏附分子1胶质瘤化疗敏感性
- 大黄素抑制SHG44胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的研究
- 2013年
- 目的研究大黄素对人胶质瘤SHG44细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法实验组大黄素浓度分别为10,20,40,80μmol/L,并设对照组(未经药物处理),共5组。用噻唑蓝法(MTT)观察大黄素对SHG44细胞的增殖抑制作用;用流式细胞仪法分析大黄素的诱导凋亡作用,通过比色法测定细胞内caspase-3的相对活性。结果与对照组相比,大黄素能明显抑制SHG44细胞的生长,且具有浓度、时间依赖性,其IC_(50)(48 h)为24.79μmoL/L;大黄素处理胶质瘤SHG44细胞后,流式细胞仪分析大黄素能浓度依赖性诱导SHG44细胞凋亡;大黄素作用SHG44细胞后,处理组caspase-3的相对活性明显升高,并存在时间依赖关系。结论大黄素能抑制胶质瘤SHG44细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与caspase-3活化有关。
- 张鹏许刚柱刘凯歌张军伟王茂德
- 关键词：大黄素胶质瘤细胞增殖细胞凋亡
- RNA干扰技术下调CEACAMl基因表达对胶质瘤血管生成的影响被引量：3
- 2014年
- 目的：利用RNA干扰技术下调胶质瘤细胞中癌胚抗原相关细胞黏附分子1（ CEACAM1）基因的表达情况，探讨胶质瘤细胞CEACAM1表达变化后其培养上清液诱导人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）增殖、血管生成的情况及其可能机制。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA，脂质体法瞬时转染SHG44细胞，收集细胞培养上清液作为条件培养基。分别采用RT－PCR检测RNA干扰后细胞中CEACAM1及血管内皮生长因子（ VEGF） mRNA表达的变化情况，ELISA法检测上清液中VEGF蛋白的含量。 MTT比色法及Transwell侵袭实验检测共培养刺激后HUVEC增殖及迁移能力的变化，体外血管生成实验检测体外血管生成能力。结果与正常对照组和阴性对照组相比，转染CEACAM1－siRNA后胶质瘤细胞中CEACAM1 mRNA的表达水平下调（P＜0．01），以CEACAM1－siRNA3组最为显著。 RNA干扰后SHG44细胞VEGF mRNA及上清液中的VEGF蛋白含量均减少，HUVEC的增殖受到抑制，迁移及体外血管生成能力下降。结论 CEACAM1－siRNA能够下调SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达，并通过减少VEGF分泌，从而影响HUVEC的增殖、迁移和体外血管生成能力。
- 许刚柱李文张鹏王辉盛旭东王茂德
- 关键词：癌胚抗原相关细胞黏附分子1RNA干扰胶质瘤脐静脉内皮细胞血管生成
- siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞。Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化。CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化。通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响。结果三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P<0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显。后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P<0.05)。Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论 CEACAM1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力。
- 许刚柱张鹏李文赵慧吴涛张俊锋王茂德
- 关键词：CEACAM1胶质瘤生物学行为
