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贵州省优秀科技教育人才省长资金项目([2006]12): 作品数：12 被引量：26H指数：3; 相关作者：文明程振涛周碧君岳筠王开功更多>>; 相关机构：贵州大学贵州省动物疫病研究室贵州省动物疫病预防控制中心更多>>; 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

山羊痘病毒P32蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定: 2011年; 为了获得具有生物安全性高的体外表达蛋白,以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因不同片段,将基因片段克隆至毕赤酵母菌表达载体pPICZαA中,构建了重组表达载体,转化感受态毕赤酵母菌X-33中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为64 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-blot证实该表达蛋白具有免疫学活性。; 程振涛岳筠周碧君许乐仁王开功文明李永明朱时杰; 关键词：山羊痘病毒 P32基因毕赤酵母

携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌诱导山羊免疫应答研究: (目的)为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌诱导山羊免疫应答效果。(方法)本研究将60只黑山羊随机分为3组即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门氏菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊...; 熊朝丽张华程振涛周碧君王开功文明; 关键词：免疫应答山羊; 文献传递

羊痘病毒P32基因生物信息学分析被引量：4: 2011年; 为获得羊痘病毒P32基因生物信息学资料,扩增山羊痘病毒贵州LD株的P32基因,并进行克隆、测序与序列分析;以P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构,综合评价P32蛋白的抗原表位。结果表明,羊痘病毒P32基因核苷酸和氨基酸同源性分别达到97.8%和95.6%以上;P32蛋白为含有一个跨膜结构的膜蛋白;肽段227-251区域的各种预测指数均高,推断该区域为一个潜在的优势抗原表位。数据分析显示,P32蛋白具有较强的抗原性,该结果将为GPV P32基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供依据。; 程振涛岳筠周碧君许乐仁王开功文明李永明; 关键词：羊痘病毒 P32基因生物信息学

山羊痘病毒诱导BHK-21细胞凋亡的检测被引量：2: 2011年; 为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在,分别采用HE染色、凋亡试剂盒检测、流式细胞仪检测和DNA Ladder检测,对山羊痘病毒感染的BHK-21细胞培养物进行细胞凋亡检测。不同方法检测结果均显示,山羊痘病毒感染BHK-21细胞组相同时间细胞凋亡数明显高于对照组。表明山羊痘病毒可诱导BHK-21细胞发生凋亡。; 程振涛岳筠周碧君王开功文明李永明许乐仁朱时杰; 关键词：山羊痘病毒 BHK-21细胞细胞凋亡

山羊痘病毒SYBR Green I荧光PCR检测方法的建立被引量：7: 2008年; 为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green I荧光PCR方法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物。以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立并优化SYBR Green I模式荧光PCR检测GPV的ITR基因的方法,并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green I荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速。; 罗阿东唐源文明岳筠程振涛徐春志; 关键词：山羊痘病毒实时定量PCR 熔解曲线

稳定携带山羊痘病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建被引量：2: 2011年; 为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。; 尹传宝程振涛朱琦彭彩丽鲜思美周碧君文明; 关键词：减毒沙门氏菌山羊痘疫苗

山羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用: 鉴于传统检测方法的诸多缺点,为了深入研究山羊痘病毒(GPV),利用DNAStar分析了GenBank中所有7株羊痘病毒全基因序列,选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段,设计并合成...; 程振涛岳筠李永明许乐仁王开功周碧君文明; 关键词：山羊痘病毒 TAQMAN-MGB探针荧光PCR; 文献传递

携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究: 2013年; 为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7、15、30和45d的山羊消化道特异性SIgA含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P<0.05),45d时到达最高值(18.172±0.122)μg·L-1;(2)在诱导产生特异性P32抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P>0.05);(3)在特异性淋巴细胞转化效率上,免疫15d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫30d后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P>0.05);(4)在诱导产生特异性细胞因子方面,重组细菌组山羊血清IL-2含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清IL-5含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P<0.05),而血清IFN-γ和TNF-α含量与弱毒疫苗组差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,构建的携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。; 熊朝丽张华程振涛周碧君王开功文明; 关键词：免疫应答山羊

山羊痘重组沙门菌S7207/pVAX1-P32疫苗株的安全性及稳定性研究被引量：1: 2012年; 对山羊痘重组沙门菌S7207/pVAX1-P32疫苗株的安全性、稳定性及S7207/pVAX1-P32在动物体内散布规律进行测定。选择60只小鼠,随机分为4组,1组为生理盐水对照组,2组～4组为试验组,用上述沙门菌株S7207以108、109、1010cfu的剂量口服免疫小鼠,2周后相同剂量加强免疫,通过在不同时间段称量小鼠体重显示,试验组小鼠生长情况与对照组无明显差异,不同组别小鼠大体及内脏器官也未发生病变,说明S7207/pVAX1-P32安全性良好;通过PCR方法检测P32基因在体内各组织分布情况,在7d后体内各组织中都检测出目的基因,说明DNA在小鼠体内广泛分布。体外传代含pVAX1-P32和不含pVAX1-P32菌株,含质粒菌株经60代传代后含重组质粒菌的比例在50%以上,传代至120代时仍在10%以上,而不含质粒菌株明显低于含质粒菌株,结果证明含质粒菌株稳定性较好。研究结果提示,利用减毒沙门菌为载体传递S7207/pVAX1-P32疫苗具有良好的安全性和稳定性,其质粒在小鼠体内分布广泛,对未来口服疫苗的使用提供了参考依据。; 朱时杰周碧君文明王开功程振涛殷俊磊; 关键词：山羊痘安全性稳定性

山羊痘病毒基因组DNA的提取及酶切分析被引量：1: 2008年; 对山羊痘病毒贵州分离株(LD株和QL株)和参考株(Y株和B株),采用Vero细胞增殖和差速离心浓缩后,以SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组DNA,以3种核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ和PstⅠ进行酶切图谱分析。接种山羊痘病毒48 h^60 h后,Vero细胞呈现典型的细胞病变;病毒基因组提取样本的纯度在1.8~1.9之间,经琼脂糖凝胶电泳均出现一条纯净的DNA条带;经3种内切酶酶切后,贵州分离株的酶切图谱与参考疫苗毒株Y株基本一致,比参考弱毒株B株少3条~4条酶切片段。这为山羊痘病毒毒力基因的进一步研究奠定了基础。; 罗阿东岳筠程振涛周碧君文明; 关键词：DNA 酶切分析

贵州省优秀科技教育人才省长资金项目([2006]12)

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