国家自然科学基金(30771900)
- 作品数：5 被引量：46H指数：4
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- 结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用被引量：20
- 2009年
- 目的建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性。方法采用以早期分泌抗原靶6 kDa蛋白(ESAT-6)抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elis-pot);应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂(Quantiferon-TB-Gold,QFT-G)进行平行检测。结果采用Elispot检测,结核患者的阳性率最高(75.0%),显著高于健康对照(7.3%)和其他肺部疾病患者(11.1%),结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elis-pot检测结果进行配对比较无显著性差别(χ2=1.6,P>0.05)。结论建立了结核菌特异性IFN-γElispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察。
- 杨倩婷徐平曾剑锋朱秀云黄华邓群益刘国辉周伯平陈心春
- 关键词：免疫酶技术
- 结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测在结核诊断中的应用被引量：8
- 2009年
- 目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(简称Elispot)检测技术对不同的人群进行检测,评价其在结核诊断中的应用情况。方法290例结核病人(结核组),其中肺结核221例中痰抗酸染色(AFB)阳性者89例,AFB阴性者132例;同时选取133例健康志愿者为健康组。采用自行建立的Elispot技术对2组外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;对11例结核病人和10例健康者同时采用T-SPOT.TB试剂盒进行平行检测。结果Elispot反应阳性率结核组为83.79%,显著高于健康组的16.54%(P<0.001);AFB(+)肺结核病人阳性率为89.89%,AFB(—)肺结核病人阳性率为81.06%,两者差异无显著性意义(P>0.05)。T-SPOT.TB与Elispot平行检测阳性率比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论结核菌特异性IFN-γElispot检测技术在结核诊断中显示出较好的特异性和敏感性,可作为临床结核病诊断的辅助手段。
- 黄华陈心春杨倩婷廖明凤张明霞余卫业周伯平
- 关键词：Γ-干扰素酶联免疫斑点结核T-SPOT.TB
- 结核分枝杆菌早期分泌抗原ESAT-6的高效表达及其在结核分枝杆菌特异性细胞免疫检测中的应用被引量：7
- 2009年
- 目的获得纯化的MTB早期分泌抗原ESAT-6，并对其抗原性及在MTB特异性细胞免疫检测中的应用价值进行评价。方法采用基因工程技术表达MTBESAT-6蛋白，通过Western blot法分析ESAT-6与特异性抗体的反应性。以纯化ESAT-6为抗原，用酶联免疫斑点技术（Elispot）检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民外周血γ-干扰素的应答水平，同时与用于隐性结核感染及结核病诊断的QFT-G检测法进行平行比较，对其在MTB感染细胞免疫检测中的应用价值进行评价。结果成功表达和纯化了ESAT-6重组蛋白，所表达的蛋白能被特异性抗ESAT-6抗体识别，同时与肺结核外周血单核细胞反应，刺激后者产生γ-干扰素。Elispot技术检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民的阳性率分别为36／49（73．5％）、11／62（17．7％）、17／194（8．8％），同时用QFT-G法对肺结核患者和健康医务工作者进行检测阳性率分别为38／49（77．6％）、14／58（24．1％），两种检测方法比较敏感度（73．5％，77．6％；X^2=0．381，P〉0．05）和特异度（82．3％，75．9％；X^2=0．406，P〉0．05），差异无统计学意义。结论利用pET原核表达系统可成功地表达和纯化MTBESAT-6重组蛋白，以ESAT-6为抗原建立的Elispot外周血IFN-γ检测技术与QFT-G的特异性和敏感性相当，可用于结核病的辅助诊断。
- 张晶刘威龙周伯平张明霞杨倩婷朱秀云陆坚邓群益陈心春
- 关键词：分枝杆菌结核抗原酶联免疫吸附测定
- 结核病患者外周血和胸水中TLR2配体活性的测定
- 2010年
- 目的通过观察结核病患者外周血和胸水中IL-8的水平,检测TLR2配体的活性,探讨TLR2在结核病发病中的作用。方法选取肺结核(PTB)患者45例,结核性胸膜炎(TP)患者25例,健康对照(HD)38例,采用ELISA法分别检测血浆和胸水中IL-8含量,并用HEK293-hTLR2细胞株检测血浆和胸水中TLR2配体的活性。结果发现IL-8在结核病患者的胸水中水平明显升高(P<0.001),而且结核病人中的血浆和胸水TLR2配体的活性也高于健康者(P<0.05)。结论结核病患者感染部位TLR2配体活性及IL-8明显升高,对局部炎症细胞的浸润有重要意义,同时可作为结核病诊断的辅助手段。
- 陈涛张明霞邓群益朱秀云蔡雄茂李国保付向东陈心春
- 关键词：结核TOLL样受体2IL-8
- 外周血IFN-γ的检测在结核分枝杆菌潜伏感染诊断中的价值被引量：20
- 2008年
- 目的探讨利用酶联免疫斑点(Elispot)法检测外周血结核抗原特异性γ干扰素(IFN-γ)应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法将150例健康者按结核暴露程度分成4级,采用Elispot技术检测其外周血单个核细胞(PBMC)结核菌抗原特异性IFN-γ分泌水平;其中111例进行结核菌素皮试(PPD皮试);39例采用全血干扰素试剂(Quantiferon-TB-Gold,QFT-G)进行IFN-γ分泌水平的平行检测。结果采用Elispot检测结果显示体外IFN-γ应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关(r=0.4155,P<0.0001),不同暴露程度分级的IFN-γ应答阳性率分别是:4级(55.6%)、3级(33.3%)、2级(16.7%)、1级(6.8%)。不同暴露程度分级与PPD皮试结果的相关性没有统计学意义(r=0.1206,P=0.2073);不同暴露程度分级的PPD皮试反应阳性率分别为4级(33.3%)、3级(27.8%)、2级(11.1%)、1级(22.0%)。对Elispot检测结果与QTF-G检测结果进行平行比较分析,两种方法检测结果没有统计学差异(χ2=0.125,P=0.7237)。结论外周血结核抗原特异性γ干扰素(IFN-γ)应答反应水平与结核菌暴露程度成正相关,Elispot检测体外IFN-γ应答反应在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,可以用于对潜伏感染者的筛查。
- 肖松生杨倩婷蔡雄茂张明霞朱秀云吴庆军陈心春
- 关键词：结核分枝杆菌潜伏感染结核菌素皮试
